解决YMC色谱反相条件下压力过高方法

1 解决YMC色谱反相条件下压力过高的方法 2 一 背景 1 时代背景高效液相色谱法是近30年发展的一种色谱分析法 以其专属性高 分析效能高 检测灵敏高 分析速度快等特点 越来越多的应用于化学分析方法中 以中国药典2005版二部为例 采用高效液相法的品种达到848种 而且药品的含量检测 杂质 鉴定方法 由传统的检测方法逐渐过渡到高效液相法 可见高效液相色谱法逐渐成为常规的分析方法 3 2 色谱柱的结构 我们还有必要了解色谱柱的结构 一套完整的色谱柱 即高效液相色谱柱系统 除填有填料的柱管外 还应有柱头及配套的连接管 柱头内有垫圈和过滤片 YMC的色谱柱的垫圈和过滤片是一体化的 过滤片的孔径为1 m 见插图1 4 插图1色谱柱的结构 5 3 清洗柱子的时间 查阅相关资料通常所说的冲洗柱体积多少倍 我们以250mm 4 6mm常规柱为例 由下列公式V R2 h 3 14 4 6 2 2 250 1000 4 2ml知需4 2ml左右溶液 才能冲洗1次 通常我们所洗10倍体积 即42ml体积 如果我们以1ml mim冲洗 则需要42分钟就可以完成清洗任务 6 二 色谱柱的分类及特点 1 色谱柱的分类 7 2 YMC色谱柱的相关技术参数 8 三 YMC柱的缺点 虽然YMC色谱柱具有上述的优良性质 但是在新柱使用几个月后 压力逐渐上升 以致于达到250bar左右的压力 过高的压力会造成色谱仪泵内的密封圈漏液 连接管路中漏液 加快了易耗件的消耗 增加了高效液相色谱仪的运行成本 而且随工作压力的逐渐上升 最后超过泵所承受的最高压力 使泵不能工作 虽然YMC色谱柱有1万多理论塔板数 但因色谱柱高压无法使用 所以我们必须解决色谱柱的高压问题 9 四 分析原因 YMC色谱柱产生过高压力的原因 主要是流动相和样品溶液带来的有机物和无机物的污染 10 五 解决有机物污染的方法 1 有机物污染的原因 1 曾经使用正相条件后 再进行反相条件 2 样品中有不明的有机物 11 2 有机物污染的解决办法 12 需要注意的问题 特别要指出的是 有的色谱仪中单向阀的宝石球 在100 乙腈水溶液中易发生粘连 例如岛津10ATV泵 所以你在不了解色谱仪中的宝石球的组成时 切不要用100 乙腈冲洗 以免造成宝石球粘连 泵不出液体的情况来 13 1 无机物污染产生的原因 当流动相和样品进入色谱柱后 盐类 脂类 含脂物质 可能在使用时与色谱柱发生相互作用 当被吸附的样品成分积累到一定程度时足以使它们形成新的固定相 分析物能与这些杂质作用形成一定的时间波动 如果足够的污染产生 柱子会逐渐产生高压 14 2 解决无机物污染的办法 3 1清洗柱子我们先用10 甲醇水溶液冲洗45分钟 使柱压降至140 150bar左右 然后用0 05mol L硫酸水溶液冲洗45分钟 再用10 甲醇溶液冲洗45分钟 最后用色谱甲醇冲洗45分钟 使柱压降至80bar左右 15 注意事项 提醒大家注意的是配制甲醇水溶液所使用的蒸馏水 必须使用0 2um过滤的 通过多次实验 我们将用水锁定在冻干岗位 因为注射用水的过滤孔径是0 45um 而冻干岗位的用水过滤孔径0 2um 符合色谱仪的使用要求 如果没有以上用水条件 建议对蒸馏水蒸馏3遍后再使用 否则 水中的金属离子必将引起柱效下降 YMC色谱柱承受pH值范围在2 7之间 过低的pH会造成柱中的硅胶溶解 使柱效下降 而0 05mol L硫酸pH 2 2左右 符合YMC色谱柱pH值范围 而且0 05mol L硫酸能够溶解硅胶吸附的杂质 并将其冲洗出来 16 3 2清洗过滤片 如果上述方法仍不能解决色谱柱的高压问题 这说明筛板堵塞 取下柱头 用10 硝酸将其超声40分钟 用清水洗净 然后用蒸馏水再次超声40分钟 反复两次 清洗完毕后 将柱头安装好 在拆卸 安装的过程中 最好使用板牙或扳手拧柱头 切忌使用过长 过大的扳手或板牙 或使用过大的力气致使柱头滑丝 或拉坏柱头内的筛板 安装好清洗干净的柱头后 用甲醇冲洗色谱柱45分钟 17 3 3试漏 用0 5ml min的流速逐渐升至2 5ml min 使柱压达到200bar左右 然后用滤纸沿着柱头连接处 查看有无液体漏出 如果有 先停泵 不可强力拧紧柱头 而是将柱头卸下 然后对准丝口 重新上好 再行试漏 18 无机物污染的解决办法 19 七 预防措施 为了避免YMC柱压升高后烦琐的清洗过程 我们平时使用色谱仪器时需要注意以下几点 使用的流动相需要0 45 M滤膜进行过滤 超声 目的 滤去孔径叫大的杂质 并脱气 20 七 预防措施 2 在反相条件下 由于大部分是使用缓冲液系统 所以切记不要直接将流动相切换到高浓度甲醇溶液 而是用10 甲醇溶液冲洗45分钟后再用色谱甲醇冲洗45分钟 这样做的目的是防止柱头 管路和泵的堵塞 21 七 预防措施 在泵与进样器之间安装在线过滤器 一旦发生压力升高 我们只需要将在线过滤器中的滤膜卸下 超声处理干净后再安装上去 避免了柱子