食用菌笔记.doc

五界系统：生物界包括植物界、动物界、原生生物界、真菌界、原核生物界（细菌、蓝藻）八界系统：1988-1989年 细菌总界分为真细菌界、古细菌界。真核总界分为植物界、动物界、原是动物界、原生动物界、假菌界、真菌界真菌：具有真正的细胞核 有性和无性繁殖 没有叶绿素，不能进行光合作用 以吸收为营养方式 能产生孢子（繁殖）具有分枝的丝状营养体 细胞壁以几丁质为主，有的也含纤维素真菌分为有益真菌和有害真菌（真菌病害等）食用菌：是一类可以食用的大型真菌，菌丝生长发育到一定阶段具有较大子实体。要求：在大型真菌中子实体肥大多肉 木质化程度低 不含毒素 烹调后无异味八界系统中，真菌界（五个门）子囊菌门（5.6%）和担子菌门（94.4%）中才有食用菌亚洲以香菇为主，中国是香菇生产出口大国食用菌营养价值：高蛋白，低脂肪，PN占干重的30%40% （三高人群可多吃菌）药用价值：增加免疫力 抗衰老 降低胆固醇，降血压 部分菌有抗癌活性（多糖，萜烯）菌丝：具有分枝的丝状营养体，有隔膜，两相邻隔膜间即为一个细胞。庞大的菌丝群叫菌丝体吸收营养 输送营养物 贮藏营养 无性繁殖特化菌丝：菌丝束：相邻的平行的菌丝结成束状（细胞的形态未变）菌索：相邻平行菌形成的似绳索状的集体外皮细胞（拟薄壁组织）中央有菌髓（长型细胞）菌索顶端是尖端生长点，负责菌索延长菌髓：除了存在于菌索中央外，菌褶，菌刺等中的长型丝状细胞菌核：由拟薄壁组织和疏丝组织组成的坚硬的休眠体。菌丝在形成初期白色或浅色，后期褐或黑。如茯苓。菌核作用：抵抗不良外界条件 营养贮存菌核分为真菌核：完全由菌丝细胞组成 假菌核：含菌丝和寄腐（植物）组织 小菌核：只有几层细胞，细胞未发生形态分化子实体：繁殖器官，主要食用部位，由菌盖、菌柄、菌褶、菌环、菌托组成，并不是所有蘑菇都有五个部分。菌盖：角质层（最外）菌肉 菌褶（菌管） 颜色（鉴定特征）：可能随生态环境、发育阶段发生变化 菌盖形状：伞状，也可随生境和发育阶段而变化 表面特征：往往具附属物纤毛、鳞片等菌盖边缘形态（采收标准之一）：全缘、波状、四裂状等，内卷、反卷、延伸菌褶：不同颜色，往往由孢子颜色决定（是否等长，分叉，稀密）孢子印：多孢子聚集成堆形成印记构造：菌髓、子实层基、子实层（着生有性孢子的栅栏组织）子实层双核菌丝顶端着生孢子，子实层由担子（子囊）、担孢子（有性生殖）、囊状体（侧丝）组成，每个担子上长24个担孢子，子囊里8个囊孢子菌褶和菌柄的连接方式（也是鉴定依据之一）： 直生：菌褶的锐端成直角状着生在菌柄上（延生） 弯生（凹生）：菌褶锐端与菌柄连接处有弯凹 离生（游生）：菌褶锐端与菌柄不接触，之间有一段距离（草菇） 延生：菌褶的锐端沿着菌柄下延特殊菌褶：功能相同（产孢子） 菌管：没有褶片，外面只能看到管口（孢子长内周壁） 菌刺：孢子长菌刺上（猴头菌） 子座：子座上方子囊巢里长孢子（冬虫夏草的“草”） 其他：球体，里面长孢子（马勃）菌柄形态：多数白色，灰白色；圆柱形。担子菌基部膨大，有的基部假根化表面特征（鉴定）纵剖面特征：实心（香菇），空心（鬼伞），半空心（厚壁）菌柄在菌盖上的位置：多数中生，少偏生（灵芝，香菇），侧生（平菇）菌柄质地：多数肉质可食，少数木质化高菌环和菌托：子实体初期（蕾期）里面已有类似伞状；当菌盖展开，内菌膜撕裂，残留在菌柄上形成菌环；外菌膜残留在菌柄上形成菌托子实体的发育形式：裸果型：子实层自始自终裸露的（多空菌目）被果型：子实层被子实体包裹（腹菌类如马勃）半被果型：子实层初期被菌膜覆盖，后来被撕裂（伞菌目）假被果型：裸包（被伞盖包裹）裸生活史：生物完成一生所经历的生命周期两大阶段：营养菌丝生长阶段 生殖菌丝生长阶段孢子阶段：萌发后，形成单核菌丝两两互相结合形成双核菌丝（大部分时期）形成菌丝束子实体原基（菇胚）菇蕾形成大量子实体在子实层产生孢子产生菌丝营养生长阶段孢子萌发形成单核菌丝，萌发形式： 芽管式（草菇）：孢孔吸收水分萌发形成单核菌丝（孢壁厚有孢孔，薄的无） 芽殖式：通过孢孔形成芽孢，产生单核菌丝 伸长式：孢子壁薄，直接吸收水分（香菇） 分生孢子式（木耳）：孢子先产生隔膜，在每个里面产生分生孢子，隔开产生单核菌丝双核菌丝：二次菌丝，可亲和的两个单核菌丝经细胞质配合形成。锁状联合：双核菌丝增殖主要方式（90%），少部分无（双孢蘑菇）生殖生长阶段（菌丝束子实体孢子）孢子的产生：只有双核菌丝才能形成子实体。子实层基双核细胞顶端产生子实层。担子先减数分裂，再一次有丝分裂，形成4个单倍体核。伞菌目无隔膜；木耳在担子上产生隔膜，具有横膈膜；银耳形成3个纵隔膜。在子囊门中不叫担子，叫子囊。形成4个细胞核后进行有丝分裂，形成8个子囊孢子。孢子的释放传播方式：风传 雨水传播 昆虫传播（竹菌）挤压（马勃球体）释放数量：每个子实体产生十几亿到几百亿个孢子（万亿）。有性生殖：经过两性生殖细胞的结合产生新个体的方式殖配核融减数分裂（三阶段）同总结合（雌雄同株，自身可育）异宗结合（90%）：雌雄不同株，至少两个可亲和无性繁殖：不经过生殖细胞结合，直接由亲代直接产生新个体通过菌丝体断裂方式 通过产生无性孢子 单核/双核菌丝在遇到不良环境形成原沿孢子准性生殖：不经过生殖细胞，而在体细胞中实行基因重组的一种生殖方式（借助有丝分裂），与有性比，位置不同，分裂不同，几率不同大型真菌的生长生活方式：腐生专性腐生 兼性腐生（寄生为主）兼性寄生（腐生为主）（木腐生-树叶、木屑等木质材料为营养源；草腐生-植物茎秆、草；获取营养方式不同）寄生专性寄生 共生：两种生物共同生存，互惠互利，互相依存。与高等植物共生（菌根分为外生菌根和内生菌根 外生菌根：菌丝不嵌入细胞，在表面形成菌套，同时嵌入细胞形成哈氏网）。生态类群1、林地真菌 2、木材腐朽菌（白腐菌-降解木质素；褐腐菌-降解纤维素和半纤维素）3、草原真菌（成圈生长，仙人圈/环）4、土壤真菌（又叫田野蘑菇） 5、菌根真菌 6、虫生真菌（冬虫夏草-蝙蝠蛾虫草菌） 7、粪生真菌（粪鬼伞） 8、沙丘、洞穴真菌生态环境对食用菌的影响：1、维度 2、海拔（温度影响，大型真菌2000m） 3、地形地貌 4、植被类群 5、土壤质地（吸水性、腐殖质、酸性） 6、季节食用菌与其他微生物关系：1、中性 2、竞争关系 3、寄生 4、共栖关系（一方获利，另一方无影响，如银耳（收益）相灰菌）大型真菌的生理营养要素：1、C源（菌丝利用，不能无机C）：单糖，双糖（棉子糖），多糖（菌丝胞外酶降解再吸收），有机酸（苹果酸、琥珀酸），醇类（多元醇）2、N源：主要有机AA、PN，少部分无机NH4+，不能NO3-；C/N-C过多，难高产，N过多推迟子实体发生3、无机盐：大量P、S、K、Ca、Mg；微量Fe、Zn、Cu等，微量不需额外加。无机盐占子实体0.3% 0.7%4、生长激素营养物质的吸收、转运：小分子C、N源直接被菌丝吸收，大的菌丝产胞外酶分解再吸收被动扩散（无机盐），主动运输（与植物类似，模膜载体PN），菌丝输运营养，多糖：胞外分解成单糖，胞内菌丝子实体 单糖转化糖/多糖菌丝PN：降解成AA子实体（菌丝不转运PN，只运AA）1、菌丝生长阶段：根据最适温不同分低（1821金针菇）、中（2228大部分）、高（2832草菇） （低中可冰箱保存菌丝，高不可5）2、子实体发生阶段：必须外界环境条件改变（降310）菌丝长满后，未能形成子实体（降温是诱导原基形成主要因素），低温群菌降57，中温35，高温23（低温降大，高温降小），诱导成后，仍需改变温度，子实体生长不同阶段1、变温结实：温差刺激，降温后还需温度波动（香菇）2、稳温结实：降温后稳定即可形成子实体原基（双孢蘑菇，草菇）湿度（水分）：1、菌丝生长阶段（发菌期）：栽培基质的含水量，次要，空气相对湿度RH（加薄膜等形成小气候）2、子实体发生阶段（长菇期）：对RH有较高要求，提高RH，喷雾，80%85%，随着子实体长大，对RH要求更高80%90%（但RH过高，影响蒸腾，影响营养输送，病害加大，CO2过高）依水分分二类1、喜湿性食用菌：对湿度有较高耐受力（木耳）2、厌湿性：湿度较大时子实体发育不良（香菇）基质的PH（影响酶）：过酸，影响阳离子吸收；过碱，影响阴离子吸收一般，木腐生菌喜偏酸（有机酸产生分解基质），草菌偏碱（猴头3-4PH，双孢7.27.5PH）O2/CO2 1、发菌期：耗氧 2、长菇期：耗氧更多（通风）灵芝CO2 0.1%时不长菌盖或畸形；金针菇吃菌柄，CO2要高，只长菌柄。对CO2敏感菌类：灵芝，木耳，银耳，香菇，双孢蘑菇，故一定要搞好通风对CO2不太敏感：金针菇，凤尾菇光照：1、发菌期：不需要光照，保持黑暗，有光则影响生长2、出菇期：诱导原基形成时，对大部分菇类需弱的散射光，长子实体时也要光 喜光型：大部分（散射光促进子实体分化形成，香菇、平菇等） 中间型：对光线不敏感，有光无光均可（双孢蘑菇） 厌光型：不需要散射光刺激（地下菌类）光质（光的颜色）：蓝色，紫外光促子实体形成担子菌门分类，三个纲冬孢菌纲（冬孢子）黑粉菌纲 担子菌纲（担子果）30个目担子菌纲下6个目：1、担子果开裂，是裸果型，半裸果型21、担子果开裂，是被果型52、担子有隔32、担子无隔43、担子具横膈膜木耳目3、担子具纵隔膜银耳目4、子实体是裸果型，子实层体呈多管状，质地多木质、半质多孔菌目（也叫非褶菌目）4、子实体半被果型，多肉质，子实层多褶状伞菌目5、产胞组织肉质或黏质鬼笔目5、产孢组织成熟是粉末状马勃目银耳目（200个种）：代表属银耳科银耳属 担子果（子实体）白色半透明，长在栎属或其他阔叶树的腐木上木耳目：木耳科木耳属，黑木耳=木耳（毛木耳可吃），担孢子肾性，不孕而有毛，光面产子实层，子实体胶质，长腐木上多孔菌目：1、形态特征（主要的木材腐朽菌，木腐菌），子实体裸果型，生殖菌丝分化成骨架菌丝（厚壁，无分支）和联络菌丝单系菌丝系统：完全由生殖菌丝组成 二系菌丝系统：生殖菌丝骨架菌丝（或联络菌丝）三系菌丝系统：三种均有2、发育形式：裸果型-单核菌丝时间比较长，才形成双核菌丝（与伞菌目相反）生殖：异宗结合（有性生殖），无性也有多孔菌分6种类型（子实层位置，子实层体或担子果形状划分）鸡油菌型 草菌型 杯状菌型 珊瑚菌型 齿菌型（猴头） 孔状菌型鸡油菌科鸡油菌属：杏味鸡油菌珊瑚菌科珊瑚菌属：杆形珊瑚菌珊瑚菌科绣球菌属：绣球菌（白色，干后浅黄）齿菌型，猴头菌科猴头菌属猴头菌（栎，胡桃腐木）孔状菌型：牛排菌科牛排菌属肝色牛排菌（阔叶树腐木），灵芝菌科灵芝菌属灵芝（菌盖软木质，肾形，黄色至红褐色，表面光泽且有浅褐纹，菌柄腐生，红栗褐色，有光泽，光泽如盖，木根腐，海南最多）；多孔菌科奇果菌属猪苓、卧孔菌属茯苓（大可达60kg）伞菌目（主要）1、形态：伞状，担子果肉质，膜质，革质，无木质。半被果型（开始被），双核菌丝时间长2、习性：陆生分为土生（森林、草原、庭院），土生，叶生，粪生，菌生（长在其他蘑菇上），89月份，湿润多雨季节，旺盛，主要在草原，森林。3、分类（16科220属）牛肝菌科牛肝菌属美味牛肝菌（褐色），长于栎，松林，可与之形成菌根江菇科红菇属大红菇（菌盖红色），长于林地，可食；乳菇属辣乳菇（乳汁白色），松乳菇（乳汁橘红色）可食 （鹅膏菌科）毒伞科毒伞属毒伞（毒鹅膏）：剧毒，少部分该科种也可食 光柄菇科（无菌环）小包脚菇属：草菇（无菌环）口蘑科：香菇属香菇（阔叶树倒木上）侧耳属粗皮侧耳（糙皮侧耳），即平菇（子实体覆瓦状丛生）、杏鲍菇、鲍鱼菇、白灵菇 口蘑属：蒙古口蘑（可形成蘑菇圈），又称白蘑伞菌科伞菌属：双孢蘑菇（孢子含菌核，故无单核菌丝阶段），广泛栽培的食用菌鬼笔目竹荪属长裙竹荪、短裙竹荪（竹林下落叶层）马勃目马勃科马勃属小马勃、秃马勃属大秃马勃（幼时可吃，大后孢子粉可止血）毒蘑菇1000多种（担子菌，子囊菌），我国300种，重毒100种中毒类型：引起胃肠炎症状（食物中毒症状，恶心、腹泻、呕吐），潜伏期8h3h（潜伏期长的毒性大）引起神经精神病变（亢奋或抑制，幻觉），潜伏20min2h引起肝脏等内脏损害（毒肽），6h以后表现，此时已晚（最严重）引起溶血症状，导致红细胞破坏，导致贫血，严重时昏迷，抽风引起呼吸与循环衰竭，20min1h引起光过敏性皮炎（红斑红点，刺痛感），（卟啉），1d2d，毒性较弱治疗方法：同一般的食物中毒处理方法，催吐，洗胃，吸解毒药剂什么是菌种？广义上指以保藏，试验或生产为目的具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子，组织，菌丝体（主要），狭义上指生产用菌种，适宜的营养培养基上，进行纯质培养的菌丝体。优良菌种三条件：具有优良种性（高产、高质、出菇早等）高纯度，无混杂 菌丝无老化培养基 ：1、按成分区分 合成培养基（成分已知） 天然培养基 半合成培养基2、按状态 液体培养基 固体培养基 固化培养基食用菌种类：母种（一级种）；原种（二级种）；栽培种（三级种）菌种类型不同的区别：1、来源：母种通过菌种分离而得（野外，栽培场）。纯化。原种是母种扩繁而来，栽培种由原种扩繁。2、培养基：母种在固化半合成或合成（少）培养基（固化：液体加凝固剂）。原种固体半合成，栽培种固体半合成3、灭菌：母种培养基-高压121，30min，原种-高压126，1h以上，栽培种-常压灭菌（100蒸汽灭菌1214h）4、培养基容器：母种-装于试管斜面，原种-750ml广口瓶（菌种瓶），栽培种-聚丙烯塑料袋（15*28cm）1:7:30 270袋5、作用：母种作保藏和扩繁，栽培种直接栽培，原种是过渡种（扩繁）制种设苗基本药品（C源，N源，PH药剂NaOH，HCl等）基本器具：1器皿（试管、三角瓶，培养皿9cm，漏斗-分装培养基 广口瓶）2、预产量器具（天平，杆秤，棒秤，量筒，移液管）3、基础设苗制种设苗1、配料设苗：切片机，粉碎机，过筛机，搅拌机，装瓶装袋机2、灭菌设苗：高压锅，常压灭菌锅（灭菌柜，蒸汽发生系统）3、接种设苗无菌室：要紧邻冷却室，四面光滑，严密，清洁 内放超净工作台 接种箱 接种工具：接种刀，接种针，接种钩；接种铲，接种锄；接种耙，勺，环（孢子分离）4、培养设苗 恒温培养箱 培养室（通风，干燥，保温，黑暗） 培养架（充分利用空间、空气易洗道，方便检查菌种）5、菌种保藏设苗：防止菌丝老化，降低新陈代谢 低温（冰箱）缺氧 干燥一级种培养基制备PDA：确定配方不溶物浸提过滤加琼脂融过滤加可溶物定容分装灭菌摆放斜面1、配方的确定：P-马铃薯（200g） D-葡萄糖(20g ) A-琼脂(20g) PDA溶于1000mL水中设计配方：天然有机物（PDA中有Po4a4o）可换成黄豆粉等，提供全面营养可溶有机营养：Glc 矿物质（PDA中无）：K2HPO4等，0.01%0.5% 琼脂2%2、不溶物的浸提（洗净去芽眼）：加热（热浸提），煮沸30min，可将Po4a4o营养溶于水中，然后过滤取滤液加琼脂加热至溶解加可溶物（Glc）定容调PH分装（分装装置：玻璃漏斗、橡胶管、玻璃管、止水夹、装1/41/5试管的培养基）（动作要迅速，玻璃管不碰试管口）冷却产生冷凝水：慢冷水少，快冷水多。组织分离法要冷凝水少（防感染），孢子分离法，要有适量冷凝水（孢子萌发）二级种培养基制备1、木腐生菌常用原料：主料-木屑（阔叶树，无树脂，无芳香等的陈旧木屑好）；棉籽壳（水，O2）；辅料-麸皮、米糠（提供N素和VBI）CaCO3/CaSO4/CaO提供Ca2+，调PH，固NP；加硬，额外C源-红糖制备工艺流程：配方确定不溶物预处理（晒木屑，泡柿子壳）干料干混可溶物溶解混合含水量调节（60%）分装洗涤加塞高压灭菌（126，1h以上）冷却接种配方：以木屑为主的基础性配方（木屑78%，米糠麸皮20%，1%CaSO4、CaCO3，1%红糖，含H2O55%62%，PH自然）以棉籽壳为主（生理酸性）（棉籽壳菌种）：（棉籽壳58%68%，米糠麸皮10%20%，木屑10%20%-棉籽壳高温灭菌时产生酚、醛等木屑吸附，CaCO31.5%，石灰0.5%调PH，含水60%）干料干混，不要先加水（麸皮米糠易成团，不易分散均匀）2、不不溶物预处理（晒木屑，预湿棉籽壳，把棉籽壳铺平，撒石灰，铺木屑，混匀）3、可溶物溶解，加入干料中混匀，加水（先快后慢）(手握法：用力握捏，抓一把，成团65%)4、分装入菌种：上紧下松，菌丝有充分氧气（长到后期，丁字压实耙压实压平，倒置不落料为度）5、洗涤瓶子外壁（倒置瓶子），瓶口内壁浸入水中旋转洗6、加塞：瓶口加0.2kg干重，加水后0.5kg，加瓶1斤多，塞子要不掉，旋转又能拔出7、灭菌126，1h以上，冷却草腐生菌（草菇，双孢蘑菇）1、双孢蘑菇：短发酵棉籽壳（95%97%）为主料棉籽壳发酵：称重，加3%石灰粉，调至70%含水量+牛粪粉（预湿）建对发酵（铺上棉、石，加牛粪粉，适次重复，顶层用牛粪粉，打洞通气，覆盖薄膜。第三天翻堆-纵向翻堆，内外互换，重新建堆发酵，6天翻，9天翻，翻3次。翻时补水分补石膏-疏松，第12天撒堆，晒干，储存。另加：石灰0.5-调PH，麸皮米糠3%5%-太高狂长菌丝，形成菌被，CaCO3 1.5%，含水55%，PH=10）2、以棉籽壳为主（草菇）：棉籽壳88%，木屑6.5%，石灰0.5，PH=10，麸皮5%三级培养基木腐生菌1、木屑菌种，与二级区别：容器不同，锥形木棒打2cm洞于培养基中央；2、棉籽壳菌种另：3、木块菌种（茯苓）：松木块制备，厚0.5cm，宽1.52cm，长89cm松木块预处理：浸泡在0.5%红糖液过夜，第二天捞出沥干拌料：松木块加上1/4松木屑培养基（78%松木屑，20%麸皮，1%石膏，1%红糖，含水60%）拌料。垫一层木屑基，加料，顶层加一层木屑基，密封，灭菌4、种木菌种：种木粒（小圆盘高1.8cm，直径9.511mm-香菇；89.5mm-银耳）（不过是阔叶树木屑，以后同3）5、枝条菌种：桑树枝，同木块6、芦苇（手指粗1012cm长，对剖两半，放入5%麸皮，1%红糖液煮沸10min，捞出沥干-预处理）和20%阔叶树木屑（89%木屑10%麸，1%石膏，含水量60%）；同37、麦粒菌种：木腐生，边可培双孢蘑菇草腐生菌三级菌种制备1、短发酵棉籽壳菌种 2、棉籽壳菌种 3、麦粒菌种双孢蘑菇（金针菇，平菇）麦粒预处理：PH1012 石灰水泡2436h（10），1824h（温度高时）捞出，洗净，a方案：沸水煮1015min，米黄色浅褐b方案：蒸（堆成45cm厚）1520min，c高压（121，30min）灭菌（使松软），a，b，c选一，捞出，摊晾，然后趁热拌料；与1.54%石膏或CaCO3，相当麦粒干重5%的预湿后牛粪粉（草腐生菌）或5%木屑（木腐生菌），装袋时最后压12cm牛粪粉或木屑（防止麦粒滚动）。扎口，灭菌，冷却。4、稻草菌种（草菇）：干稻草切34cm，泡35h，捞出沥干，拌料-74%稻草，麸皮（N，B）24%，过磷的钙，CaCO3 1%。干料干混，调含水量65%（易散失）灭菌与消毒（杀大部分微生物）灭菌分为1、干热灭菌：空气，火焰 2、湿热灭菌：常压 100蒸汽1214h 高压 121，30min消毒 培养空间消毒（化学、物理），培养料消毒干热灭菌1、火焰灭菌 2、干热灭菌160170，12h，烘箱（万一着火，切电源，勿开烘箱们，让它烧）留1/41/3空（对流）玻璃器皿等干了再放（破裂）易燃物（棉花塞）不要碰铁板 灭菌时间到，等体温60下才能打开门3、湿热之常压灭菌：100，1214人，常压灭菌锅，蒸汽发生系统（常压灭菌锅：拱形侧面式 周转框堆叠薄膜覆盖式 大型常压灭菌锅）影响常压灭菌效果的因素：拌料是否均匀 培养料杂菌基数 蒸汽流通性 灭菌锅容积（？）灭菌时间、温度湿热之高压灭菌：121，30min；126，1h以上（二级种）卧式，立式，手提式。仪表显示是由于压强，故未排气温度也未到手提式：1加水（略超支架）2、装锅（别太满）3、密封（旋钮等对角旋紧）4、通电加热排气归零 5、关排气阀，加热 6、降温，排气，指针归零，等十分钟出锅影响高压灭菌效果因素：1、假压现象（空气未排尽）2、培养基成分（防止破坏营养）3、PH（PH越低灭菌效果越好）4、培养基颗粒大小培养基灭菌效果的检验：直接把培养基，料，直接培养，看是否长菌4、消毒剂类型：氧化还原型（H2O2，KMnO4，漂白粉，福尔马林）表面活性物质（乙醇，新洁尔灭）碱性物质（石灰）杀菌剂（农药多菌灵-杀真菌，尽量少用，慎用）化学消毒：药剂喷雾（雾滴越细越好）（漂白粉液）药剂熏蒸（氧化还原） 半小时以上，气雾消毒盒，焚烧消毒法，1m3（7gKMnO4，10mL福尔马林）24h，至少12h 沸水消毒法 过渡消毒 0.02um，混合纤维素酯空间消毒效果检验：把PDA平板放入，在空气中30min，盖上培养，观察菌落以不超5个为合格培养料消毒：1加石灰 2 杀真菌剂（梅雨，高温高湿季节），慎用少用 3巴氏消毒（5860，30min）第九章 菌种分离提纯扩大培养菌种分离提纯 1、菌种资源（材料）的获得野外菌种资源的采集：了解目的菇的生长环境，季节，地点 采集工具 采集筐，温度计，湿度计，照度计等，照相机，调查表 采集中 观察，测量，记录，要尽量采到不同发育阶段的子实体，尽量减少对完整的破坏，五件都要完整（便于保存，鉴定）采集后回来 孢子印的采集（孢子印颜色；菌柄去掉，放在白纸上，白纸下可垫水碗）菌丝形态可在显微镜下观察鉴定。2、拿部分子实体进行菌种分离3、保存标本 干制 间歇烘干 低湿干燥（4060，一般50烘2h，停，再烘），最好采用低湿干燥（5，可保证子实体色泽，但耗时长）放于标本瓶，投放11颗樟脑丸，采集单一并放入，密封，贴标签 浸制：有些有色素溶于水，溶液不能含水。无水溶剂：醋酸汞，冰醋酸，醋酸铅，酒精。有水溶剂：醋酸汞，冰醋酸，水或ZnSO4，福尔马林，水菌场选留种菇（main）：选菇性理想的：经济性状-高产，优质，抗逆性强；生理性状-出菇早，营养要求低；外观性状-菇盖肥厚，圆正，菇柄粗短，没有病虫，且有适宜的成熟度组织分离法：选活性强的幼菇作菌种分离对象孢子分离法：选成熟阶段子实体（菌膜将破未破时-防污染）菌种（母种）分离（3种）1、分离前准备 准备培养基（PDA）组分：不要有冷凝水（防污） 孢子：可有水滴，利萌 基内：加抗生素，抑菌剂2、子实体种菇的预处理：适当烘干（组分）已开膜的先洗净（孢子分离）无菌滤纸吸干，再等其重产孢子时，再分离。腐木等材料烘干，杀螨（敌敌畏，三氯杀螨醇）（基内菌丝分离法）2、组织分离 伞菌：分离位置-子实体的一小块组织（菌柄与菌盖的交接处-纵剖面，为主，菌盖外缘的菌肉，盖皮和菌褶间），放PDA上，长出菌丝，分离纯化多孔菌：子实体外缘菌肉胶质菌（银耳、木耳）：切取小块耳片 尚未展开耳片的耳集团其他 金针菇生长点（菌柄顶端）组织分离法（打掉菌盖）菌索（菌索中央-菌髓，或生长点） 子实层（菌柄菌肉薄，中空的，用子实层，即菌褶片）组织分离 优点：操作简便，后代不易变异（无性繁殖）缺点：若亲本带病毒，则后代带有病毒，有些种组织层太薄（银耳，木耳）不太适合组织分离3、孢子分离法：多孢分离，萌发后单单结合，后来是双核菌丝（主要）（单孢分离是一个一个孢子分离，单核菌丝）种菇孢子弹射法（一旦发现孢子印，马上停止，防杂菌太多）贴褶法 褶上涂抹法：（接种环，弄湿，涂抹，然后平板划线），要选有菌膜，且未破的空中包子捕捉法（污染率较高） 悬钩法（广泛）单孢分离（遗传育种时）：涂抹法：涂抹于PDA表面，萌发到500um时，分离到另外PDA上培养；梯度稀释点样法：孢子悬浮液，稀释到毛细管只允许一个孢子进去，蘸一下，点样5个，每个样点只有1个孢子时即可，培养皿外盖划圈标注，毛细管分别点一下，一份送镜检，只有一个孢子的，挑一块PDA培养，获得单孢孢子萌发，影响因素：温度 孢子结构-壁厚（银耳），壁薄（香菇）孢子数量：有些种类孢子太少了不易萌发 不明物质诱导孢子萌发方法：浸泡处理 高温处理（12d）低温处理 添加诱导物 添加天然基质提取液4、基内菌丝分离法：单一菌丝类型 腐木-烘干杀螨，表面消毒，火焰灭菌，切一小块放PDA上 混合菌丝类型-银耳（两种菌丝）：纯白；灰黑羽毛状-香灰菌菌丝（共栖），不是银耳，分别培养，它们在一起银耳才长（子实体）。菌种的提纯：早发现污染，早提纯1、防污染：加抑菌剂（抗生素）前端菌丝切割 基内菌丝分离（PDA培养基）（对表面长杂菌的在PDA里面分离）降低培养温度 增加培养基硬度，减少冷凝水（颜色一致，菌落边缘要整齐一致，否则要进一步分离提纯） 菌种的扩大培养菌种扩大一级种扩大扩为很多管一级种二级种扩大1:7，二级种扩大时混合菌丝要接入同一瓶中（银耳：纯白长得慢，羽毛快，两支接一瓶，2:1），然后2728（羽毛），56d，然后2223（纯白），若经过2025d，菌种表面胶质化，则适合段木栽培，若1213d胶质化，则？料栽培 三级种扩大（二级三级）1:30，银耳1:34贴标签（菌种，品种，接种人，日月年）培养：温，光，湿，氧（通风0.5h）菌种质量鉴定 二三级种质量鉴定（1）瓶壁、袋壁与菌丝是否相脱离(萎缩)（螨类？缺水？空气干燥？菌种老化？）（2）培养料降解情况（颜色，棕褐淡黄，若仍有棕褐，则未长到位）（3）？袋内有无黄色分泌液（4）菌丝生长停滞，形成抑制线（含水量过高，缺氧）（5）培养料表面出现胶块，菌膜，小子实体（透了光，降了温）（6）培养料发出腥臭味（杂菌污染）菌种的选购：提，闻，看提：盖，塞松紧是否适宜，若太松，则不能用；若比较轻，则失水或老化，不能用闻：有无腥臭味看：有无异常现象，表面有无破损，里面菌丝有无以上几种情况（纯，正，壮，润）菌种的保存：降代谢。低温，干燥，缺氧，冷冻等技术1、继代保存法：冰箱中36月，继代一次2、矿物油法：121，1h后的油加入母种试管中（石蜡油）加到斜面上1cm处，竖立保存10以上，太低易死亡（注意：油灭菌，不带水，加到斜面上方1cm，不要过高或过低）3、载体吸附法：保存孢子,0.5cm*1cm滤纸，灭菌，收集孢子印。放入锥形玻璃管，加干热灭菌4、液氮超低温冷冻保存（-196），不形成冰晶（保存长期），珍贵菌，定期补充液氮栽培代料栽培生料栽培：不经高压常压灭菌，可经巴氏消毒等，适合长得快，抗逆性强，管理粗放的（平，草，双）熟料栽培：经高压或常压灭菌（香，？，金）段木栽培（阔叶树木段）平菇的生物学特性一、形态特征二、生活史（原基桑葚期珊瑚期子实体）三、生长条件（1）营养：纤维素纤维木质素，N源：麸皮，米糠，黄豆粉 （2）环境：2226（中温型菌丝，依菌丝描述），依子实体最佳生长？又分低温型品种（515），高温型品种（子实体2126），中温型（1520）湿度：段木，？，棉籽壳60%65%，稻草6570%，空气相对湿度（平菇喜湿），子实体发生时85%90% O2，CO2状况：耗氧菌类。通风 光照：菌丝时不要光，子实体发生时要弱散色光，蓝光促 PH偏酸，菌丝5.86.2，子实体5.56.0（子实体发生时PH均比菌丝时低）阳畦生料栽培一、工序二、栽培季节：秋，冬，春，26月，811月三、栽培前准备（1）原种，棉籽壳，稻草，麦茎，麦秆，玉米芯，一般不另外添N源（防杂菌疯长污染）（2）栽培场所：选择场地 排灌水方便，地下水高的水稻田 阳畦建筑 5M*1.2M，畦坑保温保湿，南方畦深1020cm，北3040cm （3）培养料配制 配木：棉籽壳矿物质多菌灵 配方的配制 投料量得估算（春12.5kg，秋17.520kg，棉籽壳菌种）；接种量占培养料815%；播种方法，菌丝原菌皮，浅黄色水珠，培养已结束春栽平菇发菌，26月发菌期管理，1、提高畦床温度 2、出菇期管理 （1）诱导原基的形成，提高昼夜温差，提高干湿度差，光照（早晚掀膜，增通风时间）（惊蕈刺激法，手拍畦床表面；搔菌刺激法） （2）秋菇管理：搞好通风供氧（幼？阶段：时间段）适时补水调湿（早晚喷雾，喷嘴朝上）；转槽（一茬完到下一茬？）：710天，此时薄膜打开冬菇管理：降湿至55%，后覆土，保温。增加光照度，每日午后通风补水春菇管理：加强遮荫越夏，含水量降至45%采收：当菌盖边缘内卷平展。平菇不能干制。采收前34小时喷雾，防菇盖开裂，不要堆挤香菇的栽培1、生物学特点：菌丝白色毛状，孢子印白色（熟料栽培）2、生长条件：营养条件（白腐生菌，留下白色纤维素，降解木质素），C源：棉籽壳；N源：米糠，麸皮；矿质元素：Ca2+，PO43+，维生素B1（麸皮，米糠）。环境条件：温度 中温型变温（2427最适，525分化子实体）；高温品系：2025；中：1520；低：515 湿度：空气湿度，培养基含水量（厌湿型菌）O2：搞好通风供氧，保证充分O2供应 光照：菌丝不要光，子实体散射光（弱光，能看报纸）PH，偏酸，菌丝5.56.5香菇的木屑菌筒栽培季节选择：菌丝室内，子实体室外长；转色，营养生殖生长，转色前6080d是栽培期。栽培前准备：（1）原料：阔叶树木屑（香樟不行，有芳香物），麸皮米糠。CaSO4，CaCO3，糖。（2）栽培容器：低压聚乙烯塑料袋 （3）培养料配制 （4）料筒的制备填料 扎口，外观无凸凹不平，勿过松勿过紧，手拍捏液凹，装好后长4041cm（袋长55cm）灭菌，“#”摆放 （5）接种选择菌种 菌种质量鉴别 接种方法：前期消毒（环境，工具袋表面，接种者）；接种：a、打洞（三个洞），用接种柜把菌种填满填紧洞穴，不要有空穴 b、贴胶布在料筒对面再打孔（两个），再接种，填满，贴胶布（搬入培养室）成了菌筒长出菇，菇筒。孔可调整，目的是在1923时转色一、发菌期管理：1、菌丝定植期管理：防止堆温过高，供O2；外缘扩12cm，710d，通风，阴凉，干净，暗（25）2、菌丝生长期管理：改善通风（散热，供O2，翻堆），检查污染情况，定植状况，长满需40天，再2040天成熟，准备出菇期管理二、出菇期管理：把菌筒搬出，搬到室外菇棚（1）选择地点：排水方便，靠水，每亩70008000菌筒（2）搭盖荫棚（上茅草，周围草帘）；内光照度七阴三阳；？高温，改八阴二阳（3）筑畦挖沟：阳畦，建菌筒靠架，建地膜棚，挖排水沟三、炼筒；脱筒（晴，22，阴天傍晚，菌丝一定要生理成熟，接种穴四周出现不规则小泡隆起，出现褐色色斑）；立筒（把脱完的靠在靠架上，盖上