第四章--急性毒性作用及其试验方法

第四章急性毒性作用及其试验方法 第一节急性毒性和急性毒性试验 一 概念和试验目的 1急性毒性 acutetoxicity 概念指机体 人或实验动物 一次 或24小时内多次接触外来化合物所引起的中毒效应 包括死亡 2急性毒性试验是研究一次或24小时内多次给予实验动物被检化学物后 观察在短期内 一般7天 引起动物毒性表现的实验 3急性毒性试验的目的 1 测定受试物对一种或几种实验动物的半数致死量 LD50 以初步估计其对人类毒害的危险性 2 了解受试物的毒性强度 性质和可能的靶器官 阐明受试物急性毒性的剂量反应关系 3 为进一步进行亚慢性和慢性试验以及其它特殊毒性试验的剂量设计和毒性判定指标的选择提供依据 二 实验动物的选择 动物种类一般常用大鼠或小鼠 如果同时用两种动物 其中一种为非啮齿类如狗 猴等更为理想 2动物年龄动物年龄不易过老过幼 一般应选用初成年者 大 小鼠为出生后2 3个月左右 体重一般分别为200g 180 240g 和20g 18 25g 左右 狗为生后一年左右 所有动物进入实验室后 至少饲养观察一周 选取其健康动物 体重相差应在10 以内 动物性别除另有要求 雌雄分别试验外 一般常雌雄各半 三 给予被检物的途径和方法 原则上要求与人类摄入该物质的实际途径相同 对食品中化学物质来说 主要是经口给予 在急性毒性试验中 多采用灌胃法 四 观察指标和时间1 观察指标在测定LD50中 主要观察指标 动物死亡数目 动物主要中毒症状和开始出现的时间死亡的时间也要记录 啮齿类动物中毒表现观察项目 2观察时间1 一般观察一周即可 因急性毒性实验中 动物的中毒症状以及死亡 一般多出现在给予被检物后24 48h以内 2 如中毒反应出现较迟 主要在48h或3 4天后出现 则观察期也必须相应延长至2周甚至4周 特别是48 70h内 第二节急性毒性评价 一 半数致死量和急性毒作用带 半数致死量1 LD50值受多种因素影响 包括 实验动物的物种 品系 性别 年龄 受试化合物浓度及稀释溶液的性质 喂饲条件以及试验者的熟练程度等 2 存在一定的取样误差3 LD50是一个点的界限 所以是一个质反应 而不能代表受试物的急性特征 2急性毒作用带 acuteeffectzone Zac 指化合物的毒性上限与毒性下限的比值 也就是引起试验动物的死亡之剂量与最低剂量的剂量范围的宽窄 Zac值的大小可反应急性阈剂量距离LD50的宽窄 Zac值越大 表明化合物引起急性死亡的危险越小 反之表明引起急性死亡的危险性越大 二 急性毒性分级 目前 我国食品安全性毒理学评价程序中 借用国际上的六级标准 第三节LD50计算方法 一 寇氏法 也叫平均剂量法 1原理要求各组实验动物数相等 相邻组剂量成等比级数 若满足此要求 则受试物剂量的对数与死亡率成比例关系要求各剂量大致有一半组所产生的反应率在10 50 之间 另一半在50 90 之间 最好还有反应率在0 及100 的组 故需预试 2剂量分组小动物常设5 10个剂量组 每组6 10只 首先确定最高 最低量两个组 分别可使动物90 和10 死亡 预试时按2倍或3倍递增剂量 每次三个剂量水平 如200 400 800mg Kg或100 300 900mg Kg 测试动物死亡率 3计算公式 当p1 0 pk 1 上式可简化为 其中 xk 最高剂量的对数 d 相邻两组剂量之比的对数 pi 各组死亡率 i 组数 SElgLD50 标准误差对数 ni 各组动物数 LD50的95 可信限为 lg 1 lgLD50 1 96SELD50 SElgLD50 d pi 1 pi ni 1 2 三 霍恩法 也叫剂量递增法或流动平均法 1特点动物数量固定 剂量也固定 因而简单易行使用动物数量较少但可信限范围较大 不够精确 2剂量分组一般分四或五组 每组四或五只动物 各组中雌鼠与雄鼠数应分别相等 该方法对剂量系列要求严格 主要有两种 3预试 1 以10 100 1000