马来酸依那普利滴丸剂.doc

科目：科研新思路与新药开发班级： 06级华方临药二班马来酸依那普利滴丸剂的临床前研究一马来酸依那普利原料药研究1. 马来酸依那普利合成的两个重要中间体是：(S,S)N-(1-乙氧羰基-3-苯丙基)-L-氨基酸N-(1(S)-乙氧基羰基-3-苯丙基)-L-丙氨酰-L-脯氨酸下面我们对这两个中间体的研究(S,S)N-(1-乙氧羰基-3-苯丙基)-L-氨基酸的研究如式（n ）所示的（S , S ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基）L 氨基酸衍生物在双金属复合催化剂存在下，在催化加氢溶剂中，控制氢气压力为0 . 05 0 . SMPa ，于10 60 充分反应，迅速过滤双金属复合催化剂，后处理得（S , S ) N （1 乙氧淡基3 苯丙基）L 氨基酸衍生物粗品；所述粗品在有机酸、醇、酯和水组成的混合溶液中进行重结晶精制得到高纯度的产品。采用了双金属复合催化剂，在常低压进行催化加氢，有效的抑制副产物环己基和二酸的生成，大大提高了反应的选择性。同时提供了种简单的精制方法，提高了产品的光学纯度，减少了异构体含量。如式（I ）所示的（s , s ) N （1 乙氧淡基3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的制备方法，其特征在于所述的制备方法如下：如式（11 ）所示的（s , s ) N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物在双金属复合催化剂存在下，在催化加氢溶剂中，控制氢气压力为0 . 05 o . SMPa ，于10 60 充分反应，迅速过滤双金属复合催化剂，后处理得（S , s ) N （1 乙氧淡基3 苯丙基升L 氨基酸衍生物粗品；所述粗品经精制得到（S , s ) N （1 乙氧拨基3 苯丙基关L 氨基酸衍生物；所述双金属复合催化剂是将两种金属负载于活性碳、氧化铝或沸石载体上制成的负载量为1 10 的催化剂，所述的双金属复合催化剂为钉把复合催化剂、把铂复合催化剂或把钉复合催化剂，所述双金属复合催化剂与N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的质量比为1 : 5 20 ；所述催化加氢溶剂为0 . 1 O . 4N 的强酸的醇溶液或0 . 1 0 . 4N 的强酸的含水醇溶液或0 . 1 0 . 4N 的强酸的醇和酷任意比例的混合溶液要求1 所述的（S , s ) N （1 乙氧碳基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述（S , s ) N （1 乙氧拨基3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物粗品是通过重结晶精制，使用的重结晶溶剂为有机酸、醇、酉旨和水组成的混合溶液，其中醇：有机酸：酉旨：水的体积比为l : 0 . 02 0 . 2 : 0 . 2 1 : 0 . 2 l 。2. 特征分析：（S , s ) N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述的钉把复合催化剂中钉和把的质量比为l : 5 20 。（S , s ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述的铂把复合催化剂中铂和把的质量L 匕为l : 20 40 。（s , S ) N （1 乙氧碳基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述铂钉复合催化剂中铂和钉的质量比为l : 1 10 。（s , s ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于，所述催化加氢溶剂的体积用量为N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物质量的s 20 倍（ml / g ）。（S , s ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述催化加氢溶剂中的强酸为下列之：HZSO4 、盐酸、冰醋酸。（S , S ) N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述催化加氢溶剂为0 . 1 0 . 4N 的强酸的醇溶液，所述醇为下列种或两种以上任意比例的混合：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇。（S , s ) N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述催化加氢溶剂为0 . 1 O . 4N 的强酸的含水醇溶液，所述含水醇溶液中水质量为醇质量的5 30 % ，所述醇为下列种或两种以上任意比例的混合：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇。（s , s ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述催化加氢溶剂为0 . 1 O . 4N 的强酸的醇和酯任意比例的棍合溶液，所述醇为下列种或两种以上任意比例的混合：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇，所述醋为下列之：醋酸乙醋、醋酸丙醋、醋酸丁醋、甲酸乙酷、甲酸丙醋、甲酸丁醋。（S , S ) N （1 乙氧淡基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述催化加氢反应的时间为2 20 小时。（s , s ) N （l 乙氧碳基3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物的合成方法，其特征在于所述重结晶溶剂中使用的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乙二酸；所述重结晶溶剂中使用的醇为下列种或两种以上任意比例的混合：甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇；所述重结晶溶剂中使用的醋为下列之：醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸丁酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯。3中间体的制备：种简便有效的（S , s ) N （1 乙氧拨基3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的制备和精制方法，能有效的抑制副产物的生成，大大提高了反应的选择性，得到光学纯度高的产品。种如式（I ）所示的（S , S ) N （1 乙氧拨基3 苯丙基升L 氨基酸衍生物的制备方法，如式（IV ）所示的( S , S 则（1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物在双金属复合催化剂存在下，在催化加氢溶剂中，控制氢气压力为0 . 05 O . SMPa , 于10 60OC 充分反应，迅速过滤双金属复合催化剂，滤液经后处理得( S , s ) N （1 乙氧拨基3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物粗品；所述粗品经精制得到（S , S ) N （1 乙氧碳基3 苯丙基升L 氨基酸衍生物。所述双金属复合催化剂是将两种金属负载于活性碳、氧化铝或沸石载体上制成的负载量为1 10 的催化剂，所述的双金属复合催化剂为钉把复合催化剂、把铂复合催化剂或把钉复合催化剂，所述双金属复合催化剂与N （1 - 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物的质量比为1 : 5 20 ；所述催化加氢溶剂为0 . 1 O . 4N 的强酸的醇溶液，或者为0 . 1 O . 4N 的强酸的含水醇溶液，或者为0 卜0 . 4N 的强酸的醇和酷任意比例的混合溶液。所述的钉把复合催化剂是将质量比为1 : 5 20 、优选1 : 5 10 的钉和把负载于活性碳、氧化铝或沸石载体上，所述钉和把的总负载质量为载体质量的1 10 % ，优选5 10 。把复合催化剂与N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物质量比优选1 : 5 10 。所述的铂把复合催化剂是将质量比为1 : 20 40 、优选1 : 20 30的铂和把负载于活性碳、氧化铝或沸石载体上，所述铂和把的总负载质量为载体质量的1 10 % ，优选5 10 。本发明中所述铂把复合催化剂与N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物质量比优选l : 5 ： 10 。所述铂钉复合催化剂是将质量比为1 : 1 10 、优选1 : 1 5 的铂和钉负载于活性碳、氧化铝或沸石载体上，所述铂和钉的总负载质量为载体质量的1 10 % ，优选5 10 。本发明中所述铂钉复合催化剂与N （1 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基升L 氨基酸衍生物质量比优选h 10 ： 20催化加氢溶剂为0 . 1 0 . 4N （优选0 . 4N ）的强酸的醇和醋的混合溶液，混合溶液中醇和醋为任意比，可以是两者的任意比例混合，所述醇为下列种或两种以上任意比例的混合：甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇，所述醋为下列之：醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸丁酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯催化加氢为常低压加氢，氢气压力优选0 . 1 0 . SMPa 。所述催化加氢温度优选20 50 催化加氢反应时间可根据液相色谱跟踪，视原料反应完全而定，般为2 20 小时，优选10 20 小时。处理可按照如下进行：将滤液在40 以内减压回收溶剂，加水，调节pH 至4 . 2 4 . 5 , 20 25oC 充分搅拌，过滤，得（S , s ) N （l - 乙氧淡基3 苯丙基关L 氨基酸衍生物粗品。通过以上工艺，氢化得到粗产品的异构体含量非常少，然后将粗品进行精制即可得到高纯度的产品（S , s ) N （1 乙氧淡基3 苯丙基升L - 氨基酸衍生物。精制方法可按照如下步骤进行：加入( S , S ) N （1 乙氧碳基3 苯丙基关L 氨基酸衍生物粗品和体积为所述粗品质量的5 15 倍、优选5 10 倍（ml / g ）的重结晶溶剂，在0 40 结晶3 8 小时，即得（s , s 卜（1 乙氧碳基3 苯丙基卜L 氨基酸衍生物纯品。4. 具体实施方式：实施例1 取58 . 6 克（s , s ) N （l 乙氧拨基3 氧代3 苯丙基关L 氨基酸衍生物，用600ml0 . 4N 硫酸乙醇溶液溶解，加入负载量为5 钉把109 （钉把质量比为l : 5 ) ，装入氢化装置，于25 27oC 、0 . 3 0 . SMPa 的氢气压力下氢化10 小时，迅速过滤回收钉把，用30Oml 乙醇洗涤钉把，40 以内减压回收溶剂，加水200ml ，用0 . IN 氢氧化钠溶液调节pH 至4 . 2 4 . 5 , 20 25oC 搅拌2 小时，过滤，得（s , S ) N （l 乙氧淡基3 苯丙基升L 氨基酸衍生物。收率：88 . 1 % ，液相纯度98 . 7 % , n : 0 巧, 111 : 0 . 11 。实施例2 至实施例12N-(1(S)-乙氧基羰基-3-苯丙基)-L-丙氨酰-L-脯氨酸的研究提供种从水性溶液中简便而且高收率的析出高品质的N （1 ( S ）乙氧基漾基3 苯丙基）L 丙氨酞L 脯氨酸（依那普利）马来酸盐晶体的方法，将含有N （1 ( S ）乙氧基援基3 苯丙基）L 丙氮酞L 脯氨酸、马来酸及碱的pH4 以上的水性溶液与酸混合，其中酸的量可以使该碱实质上全部形成中性盐，从而使N （1 ( s ）乙氧基拨基3 苯丙基）L 丙氨酞L 脯氨酸以马来酸盐的形式析出晶体。使N （1 ( S ）乙氧基羡基3 苯丙基）L 丙氛配L 脯氨酸的马来酸盆析出晶体的方法，包括将含有式（I ）所示N （l ( S ) - 乙氧基淡基3 苯丙基）L 丙氛统L 脯氮酸、马来酸及碱的PH4 以上的水性溶液与酸混合，其中酸的量可以使该碱实质上全部形成中性盐。要求1 所述的方法，在该pH4 以上的水溶液中，相对于N （1 ( S ）乙氧基淡基3 苯丙基）L 丙氛既L 脯氛酸( I ) ，马来酸的量为等摩尔数以上，碱的量为与马来酸等摩尔数以上要求1 或2 所述的方法，该PH4 以上的水性溶液是通过下述方法配制的：将N （1 ( S ）乙氧基羡基3 苯丙基）L 丙氛酞L 脯氛酸（I ）马来酸盆溶解于用碱保持在PH4 以上的水性溶液中。要求1 、2 或3 所述的方法，上述混合通过在水性溶液中加入所述酸进行，使碱形成中性盐。要求1 、2 或3 所述的方法，上述混合通过在酸中加入水性溶液进行，使碱形成中性盐。要求1 5 中任意项所述的方法，碱为碱金属氢氧化物要求1 6 中任意项所述的方法，酸为无机酸。8 、知权利要求7 所述的方法，无机酸为盆酸。在商业规模下以高质量、高收率而且经济、有效地使式（I ）所示N （1 ( S ）乙氧基羡基3 苯丙基）L 丙氛配L 脯氨酸（以下也称作依那普利）的马来酸盆析出晶体、进行精制的方法3背景技术作为使上述依那普利（I ）的可药用盆（特别是可药用盐为马来酸盆的马来酸依那普利）析出晶体的方法，例知在美国专利第4442030 号说明书、第4374829 号说明书及第5359086 号说明书中记载了乙睛等有机溶剂中重结晶的方法。但是，由于考虑到该有机溶剂在最后的成品中保留有痕迹量，为了使人类摄取的马来酸依那普利不具有这种不期望具有的特性，就应该尽量避免使用有机溶剂从这点考虑，使用水性溶液可以得到较好的结果。 关于使依那普利马来酸盆从水性溶液中结晶出来的方法，例知在有机化学杂志（J . org . chem . ) 53 、536 544 、（1955 ）中，记载了通过依那普利的马来酸盆在水中重结晶，得到依那普利马来酸盆的方法，其中乙氧基淡基结合的碳原子立体构型与依那普利不同的光学异构体N （1 ( R ）乙氧基羡基3 苯丙基）L 丙氨耽L 脯氛酸的马来酸盐含量较少。但是，对于操作方法、收率、精制结果等都没有详细记载 另外，在美国专利第4374829 号说明书中记载了依那普利在水中形成其可药用盆，通过浓缩水分、冷冻干燥等方法，获得其盆的方法。但是，由于这些操作需要很长时间，所以存在浪费时间、生产率低下、浪费大量能量及操作复杂等缺点，在商业规模的生产中必须进行多方面的改善， 因此，希望出现种有利于以高收率、高质量且经济的使依那普利马来酸盆直接从水性溶液中析出晶体的方法 般的，上述依那普利（I ）的马来酸盆可以通过下述方法得到：在适当溶剂（优选水性溶液）中将依那普利与马来酸混合，使之生成依那普利马来酸盆，通过浓缩、冷冻干燥等手段，先形成高浓度的浆，再得到其晶体。但是，知果不附加特殊操作直接从该水性溶液中获得晶体时，由于溶解度的问题，所以很难得到大量晶体。特别是依那普利的马来酸盆旦溶解于水性溶液中，再采用重结晶方法精制时，由于该马来酸盆本身的溶解度特性，所以提高晶体量是很困难的。为了在重结晶时提高晶体的量，就必须增大溶液与析出结晶时溶解量的差，例知冷却析出晶体时，由于依那普利马来酸盆因温度差而产生的溶解度变化基本上很小，所以不能期望析出大量晶体，必须与浓缩同时进行，通过减少母液量，从而增加析出晶体的量。但是，这种操作需要的时间长，所以存在浪费时间、生产率低下、浪费大量能量、操作复杂等问题，因而不能说是种很好的方法。进步的说，由于即使是在高温下，依那普利马来酸盆的溶解度般也很低，所以溶液的量相对就会增加，这样就导致了溶解设备巨大、生产率低下、废水量增加等缺点，因而必须进步改善以适应商业规模的生产另外，经过这些溶解、浓缩操作使受热过程增加，导致生成杂质增加的重大问题，因而是不优选的。但是，目前尚不知道克服这些缺点的有效手段另外，在溶剂中，由依那普利和马来酸形成依那普利马来酸盆，使该马来酸盐析出晶体时，存在副反应产生二酮呱嗓衍生物及残留致4. 基衍生物的问题因此，本发明的目的在于提供种通过将依那普利的马来酸盆以高浓度在水性溶液中溶解，以高收率、高质量使依那普利马来酸盆直接从该溶液中析出晶体，适合工业生产、简便而且经济、有效的方法。而且，本发明的目的还在于提供种以高收率、高效率由依那普利和马来酸得到高质量依那普利马来酸盆的方法。发现：( i ）作为使依那普利马来酸盆以高浓度溶解于水性溶液中得到溶液的方法，使用碱在pH4 以上的条件下使之溶解是有效的，( 11 ）将高浓度溶解依那普利马来酸盐的（i ) PH 为4 以上的水性溶液与酸混合，通过降低PH ，优选调节为PHZ 3 ，可以得到依那普利马来酸盐的较大溶解度差，( 111 ）结果，只降低（i ）水性溶液的PH ，即使不再附加其它操作，也能够直接、简便、高收率、高质量且经济、有效地使依那普利马来酸盆析出晶体，这时使用由酸生成的中性盆（特别是无机盐）的盆析效应有助于增大晶体的析出量，以及（iv ）通过使用上述方法，抑制了生成式（H ）所示二酮味嗓衍生物的副反应，同时得到式（I 工I ）所示N （l ( s ）发基3 苯丙基）L 丙氨酞L 脯氛酸（下面也称作轰基衍生物（111 ) ）等杂质含量少的依那普利马来酸5. 工业实用性： 采用本方法，量的马来酸依那普利晶体可以从水性溶液中简单且高收率的析出高质也就是说，采用本发明的方法，可以抑制生成二酮呱嗓衍生物仃I ）的副反应杂质，从而精制马来酸依那普利同时有效除去轰基衍生物（111 ）类，从而精制依那普利二，制剂学研究常规马来酸依那普利的片剂、胶囊剂和颗粒剂。然而，常规的口服制剂由于制备技术所固有的特点，使得服用后存在着溶散时限长、溶出度低、吸收较差、肝肠首过效应和生物利用度较低等问题，从而影响药效的发挥，也直接影响着治疗的效果。高血压和心血管病人都需要服用后起效速度快，服药次数少，药物作用持久，由于存在着溶散时间长的缺点，使得常规的片剂、胶囊剂等口服制剂用于急性发作的病症受到局限。依那普利注射液虽具有起效快的优点，但由于注射液往往容易产生过敏反应或不良反应等，同时也还存在着操作难度大，患者痛苦也大，制造和医疗成本高，患者经济负担重以及使用不方便的缺点，使得其应用也受到一定限制，因此尚有必要寻找一种既万便使用叉能尽快起效作用时间长的依那普利的口服制剂。马来酸依那普利缓释滴丸生物利用度高，快速显效，作用时间更持久，服药次数少，毒副作用更小，且价格便宜，使用携带方便。以依那普利为药物活性成分，按照一定的比例，加入作为基质的可药用载体制成1.配方1.1依那普利化学名N-(S)-1-乙氧羰基)-3-苯丙基-L-丙氨酷-L-脯氨酸(Z)或N-(5)-1-(乙氧碳基)-3-苯丙基-L-丙氨酷-L-脯氨酸(2)0(盐根)，分子式C2oH28N205，1.2基质：亲水性骨架材料和疏水性骨架材料。亲水性骨架材料聚乙二醇4000.聚乙二醇6000.聚乙二醇10000。甘油明胶、聚氧乙烯单硬脂酸脂、羧甲基淀粉钠等可药用载体中的任意一种或两种以上的混合物。疏水性骨架材料-硬脂酸、单硬脂酸甘油酪、虫蜡等可药用载体中的任意一种或两种以上的混合物。13处方组成按照重量百分比计算，本发明所涉及的依那普利(或其在医学上可被接受的盐类)缓释滴丸由10-40%依那普利和60-90%的基质组成，基质包括40-70%亲水性骨架材料和10-40%疏水性骨架材料。2制备万法21先称取所述的亲水性骨架材料和疏水性骨架材料，置于加热容器内加热并搅拌使之溶融，加入相应比例的依那普利，充分搅拌，在保温条件下，将熔融或混融的药液滴入盛有二甲基硅油或植物油或液体石蜡的冷凝柱中，成形后取出，即得。22上述制备方法中，所述加热熔融时的温度为5O一85C。23上述制备方法中，所述冷凝液是大于等于150#的二甲基硅油或液体石蜡或植物油中。24上述制备方法中，所述冷凝液上部的温度是3040。C，底部的温度为-4lO。C。2.5制备实例 以总重量1OO9计，称取基质PEG400040%，PEG600020%，PEGlO00010%，硬脂酸 10%，单硬脂酸甘油酪 10%，原料依那普利 10%;将基质于置于加热容器内加热并搅拌使之溶融，加入相应比例的依那普利，充分搅拌，在保温条件下，将熔融或混融的药液滴入盛有二甲基硅油的冷凝柱中，其中，加热熔融时的温度为70。C，冷凝液上部的温度为30。C，底部的温度为-4。C;成形后取出，所得产品，2小时累积释放百分率为40%-63%，6小时累积释放百分率为64%-81%,10小时累积释放百分率为82%93%,12小时累积释放百分率为91%100%，释放度较好，溶散时限合格，圆整度较好。3.有益效果及稳定性 作为第二代的转换酶抑制剂依那普利，通过抑制血管紧张素的合成，导致血管阻力降低，而达到降压功效。临床应用与卡托普利相同，主要用于治疗高血压和充血性心力衰竭，是目前治疗高血压的一线安全药物。与卡托普利不同的是其作用强，剂量小，作用时间持久，用药间隔可延长。一次口服lOmg的片剂或胶囊即可降低血压，12小时起效，4一6小时作用达高峰。常用量5lOmg，日服一次即可。为加快起效时间，必要时可用静脉注射。本药治疗中度或重度高血压，其降压作用可剂量增大到8Omg/天，约60%高血压患者单用本药即可奏效。依那普利对常规治疗无效的充血性心力衰竭有效，252Omg/天可增加心输出量，降低肺楔压，增加病人活动耐力。由于依那普利结构中不含疏基，不良反应也较卡托普利少而轻。因此，自问世以来，依那普利治疗高血压和充血性心力衰竭万面，取得了令人满意的疗效，是一个公认的前景良好且发展较快的药物。利用现有技术得到的常规口服剂型，由于存在溶散时限长、溶出速率低，吸收较慢，起效时间较长，以及肝肠首过效应等缺陷，从而在一定程度上影响着药效的发挥，也直接影响着治疗的预期效果。而注射液又往往容易产生过敏反应或不良反应等，同时也还存在着操作难度大，患者痛苦也大，制造和医疗成本高，患者经济负担重以及使用不方便的缺点。本发明所涉及的药物制剂，利用亲水性骨架材料和疏水性骨架材料作为基质与依那普利原料药制成固体分散剂，使药物呈分子、胶体或微晶状态分散于基质中，药物的总表面积增大，且基质既有水溶性和脂溶性的，对药物既具有润湿作用，能使药物迅速溶散成微粒或溶液，提高了生物利用度，发挥高效、速效等作用，同时对药物又具有缓释释药，服药次数少，达到长效作用。与常规口服制剂相比，本滴丸具有溶散时间短，作用时间持久的优点，同时可舌下含服，从而克服了片剂起效缓慢、肝肠首过效应以及刺激胃肠等缺点。与注射液相比，避免了药物及其溶剂和辅料直接进入血液循环的过程，可有效地减少急性毒副作用发生，使用安全，作用持久、应用范围/;同时降低了操作难度，减小了患者痛苦，降低了制造和医疗成本高。本滴丸制剂体积小、重量轻，更适用于随身携带。含入口腔后，与唾液接触即迅速溶化，并由口腔黏膜吸收，不仅起效快，作用时间持久，而且不受进食的影响，即饭前饭后均可含化服用。本制剂每个滴丸所含的药物剂量准确，适于不同疾病、不同病情、不同年龄的患者更灵活准确地掌握用药剂量。制备本制剂-滴丸的生产工艺设备简单、操作方便;工序少、生产周期短、自动化程度高、劳动强度低、生产效率高;生产车间无粉尘、有利于劳动保护和环保;制备滴丸需要采用高科技手段和设备，主药在基质中分散均匀，剂量准确，丸重差异较片剂小，生产成本低于同品种片剂的50%。本制剂由固体药物与基质加热、熔融成液态后，滴入不相混溶的冷凝液中制成。因此，药物稳定性高，不易水解、氧化，且操作是在液态下进行，无粉尘污染，不易受晶型的影响，从而保证了药品的质量，增加了稳定性。4.包装本实用新型采用撕拉盖结构与瓶塞一体成型，使得无法在不破坏瓶塞的情况下打开包装瓶，从而实现防盗功能。此外，在瓶塞上带有密封环，起到防潮功能。总之，该滴丸包装瓶集成了防潮和防盗双重功能，且成本低廉、简单易用。规格30mg/丸。三、质量标准的研究1、名称马来酸依那普利拼音名：Malaisuan Yinapuli英文名：Enalapril MaleateC20H28N2O5C4H4O4 492.52 本品为N-(S)-1-乙氧羰基-3-苯丙基-L-丙氨酰-L-脯氨酸顺丁烯二酸盐。2、性状本品为白色或类白色结晶性粉末；无臭，微有引湿性。本品在甲醇中易溶，在水中略溶，在乙醇或丙酮中微溶，在三氯甲烷中几乎不溶。比旋度 取本品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中含50mg的溶液，依法测定(附录 E)，比旋度为41至43.5。3、鉴别(1)取本品约20mg，加稀硫酸1ml，滴加高锰酸钾试液，红色即消失。(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集587图）一致。4、检查(1)酸度 取本品0.1g，加水10ml使溶解，依法测定pH值应为2.02.8。(2)有关物质取本品适量，加流动相使溶解并制成每1ml含马来酸依那普利2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，用流动相稀释制成每1ml中含40g的溶液，作为对照溶液；另分别取马来酸依那普利对照品与依那普利拉对照品适量，加水溶解分别制成每1ml中各含0.1mg的溶液，取依那普利双酮对照品适量，加流动相超声使溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，取上述三种溶液用水稀释制成每1ml含马来酸依那普利、依那普利拉与依那普利双酮各为0.02mg 的混合溶液。照高效液相色谱法(附录 D)测定， 用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-磷酸盐缓冲溶液(0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调pH为2.2)(25:75)为流动相，检测波长为215nm，柱温为50。取混合溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按依那普利峰计算不低于300，拖尾因子应不大于2.0。马来酸峰与依那普利拉峰的分离度应符合要求，依那普利拉、依那普利与依那普利双酮各峰的分离度应大于4.0。取对照溶液20l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的15，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至依那普利峰保留时间的3倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰(马来酸峰除外)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。A-辅料，B-样品，C-对照品 (3)乙腈 取本品，精密称定，加二甲基甲酰胺制成每1ml含100mg的溶液，作为供试品溶液。另取乙腈适量，精密称定，加二甲基甲酰胺制成每1ml约含40g的溶液，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法(附录 P )测定。用聚乙二醇20M为固定相的毛细管柱，氢火焰离子化检测器，初始柱温60，保持2分钟，以每分钟10升至200，保持5分钟，进样口温度200，检测器温度250。理论板数按乙腈峰计算不低于10 000。精密量取供试品溶液与对照品溶液各1l，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，供试品中含乙腈量应符合规定。(4) 干燥失重 取本品，在50减压干燥4小时，减失重量不得过0.5(附录 L)。(5)炽灼残渣 取本品1g，依法检查(附录 N)，遗留残渣不得过0.1%。(6)重金属 取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查(附录 H 第二法)，含重金属 不得过百万分之二十。(7)溶出度 30分钟，限度为标示量的75%，应符合规定（高效液相色谱法）(8)释放度测定: 复方马来酸依那普利滴丸体外释放重现性好,1h马来酸依那普利释放均不低于90%.5、含量测定取本品约0.3g，精密称定，加冰醋酸15ml与无水二氧六环(取二氧、六环500ml，加入经干燥的4A分子筛10g，放置过夜，即得)5ml，微温使溶解，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/ L)相当于49.25mg的C20H28N2O5C4H4O4。精密度实验和重复性实验的RSD值分别为0.41%和0.85%。平均回收率为100.5%,RSD值为0.52%;6、含量限度 本品含马来酸依那普利应为标示量的90.0%110.0%。7、其他类别：为抗高血压药。规格：30mg贮藏：遮光，密封保存。有效期：18个月三临床前研究 （一）主要药效学研究1.实验动物健康SD大鼠，清洁级，白色；健康Beagle/比格犬 ，普通级，购自北京大学实验动物中心。2.主要试剂马来酸依那普利滴丸剂，分别配制成不同浓度的马来酸依那普利水溶液及含0.5%羧甲基纤维素的混悬液备用;以0.5%羧甲基纤维素溶液作对照液，生理盐水，肝素，3%戊巴比妥钠3方法 （1） 正常血压麻醉大鼠:取SD大鼠50只，雌雄各半，体重为200250g，按区组随机方法分为4组。腹腔注射3%戊巴比妥钠45mg/kg麻醉，分离颈总动脉，动脉插管，经CYSY压力换能器(航天工业部634)连接于LMS一ZB型二导记录仪(成都仪器厂)连续记录平均动脉压及心率。稳定10分钟，记录上述指标作为O分钟测定值，然后分别灌胃给予马来酸依那普利1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg，羧甲基纤维素钠对照液，灌胃容积均为0.5ml/100g。于给药后30、60、90、120、150、180、210及240分钟时再各测定大鼠血压及心率1次，所得数据分别计算平均数及标准差，给药前后数值进行配对t检验，给药组与对照组进行两组间t检验。（2）清醒肾性高血压大鼠:取SD雄性大鼠，体重为200250g，腹腔注射氯胺酮注射液(北京制药厂产品)50mg/kg(1ml/kg)麻醉，从左侧肋缘下切口，分离左肾动脉，以4号针头为保留直径，双线结扎，抽出针头，造成肾动脉狭窄，并于手术后10天切除右肾，造成肾性高血压大鼠模型图。于切肾后68周，选取平均动脉压高于20kPa的大鼠，随机分成4组(每组10只)进行实验。血压测定方法:采用直接测量法，先以戊巴比妥钠麻醉大鼠，进行颈动脉插管，插管的另端经颈背部皮肤引出，管内充满肝素生理盐水(肝素为500u/ml)，并每8小时经此管推注肝素生理盐水0.2ml以防凝血。24小时后，在大鼠清醒状态下，将背部动脉插管连于压力换能器，在二道生理记录仪上记录血压和心率，然后分别灌胃给予所试药物,马来酸依那普利为1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg，羧甲基纤维素钠对照液，给药容积均为0.5ml/l00g，于给药前(0小时)和给药后1、2、4、8、12和24小时分别测定各大鼠血压和心率。所得数据分别计算平均数及标准差，给药前后数值进行配对t检验。（3）正常血压麻醉狗:取比格犬30只，雌雄各半，体重为1020kg，按区组随机方法分成4组，静脉注射3%戊巴比妥钠30mg/kg麻醉。分离股动脉，进行股动脉插管，经MPU一0.5压力换能器旧本)测定平均动脉压，并以血压触发心率记数器，于RM一6200型四道生理记录仪（日本光电)连续记录血压及心率。稳定10分钟，测定血压和心率作为给药前(0分钟)测定值，然后通过胃管胃内给予马来酸依那普利0.1，0.3，1mg/kg，羧甲基纤维素钠对照液，给药容积均为1mg/kg，并于给药后30、60、90、120、150、180、210及240分钟时各测定血压、心率1次，所得数据分别计算平均数及标准差，并进行两组间或配对t检验。（4）清醒肾性高血压狗:取比格犬，雌雄不限，体重为1020kg，静脉注射3%戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，从左侧肋缘下切口，分离出左肾动脉，8号丝线结扎，使肾动脉狭窄成原肾动脉直径的1/3，制成肾性高血压犬模型，并于颈部分离左颈动脉，制成颈动脉皮桥，以备测定血压之用。手术后动物常规饲养，待各狗舒张压升高至12kPa以上时进行实验。狗血压测定:采用压脉听诊法，以连于水银检压计的压脉带裹住动脉皮桥，按常规听诊方法测定收缩压和舒张压以及心率。给药方法为口服(将药物加入肉汤中，喂服)。将狗随机分为4组，每组6只，分别给予所试药物及对照液，马来酸依那普利0.lmg/kg，0.3mg/kg，1mg/kg，羧甲基纤维素钠对照液，并于给药前(0小时)和给药后l、2、4、8、12和24小时分别测定收缩压、舒张压和心率。各组资料分别计算平均值及标准差，给药前后数值进行配对t检验，给药组与对照组间进行两组间t检验。4结果与统计（1）正常血压麻醉大鼠:无论与给药前(0分钟)或对照组比较，在给药后60分钟开始显著降低低于给药前(P0.05)，并持续至240分钟;麻醉大鼠血压(P0.05或0.01)，降压作30、60及90分钟时，血压也显著低于对照组。降压作用持续240分钟尚未恢复。各药组的心率无论与给药前或对照组相比，均无显著改变；对照组各时间的血压和心率也无明显变化。表1 马来酸依那普利一次灌胃对正常麻醉大鼠血压和心率的影响（xs）指标 给药后 对照组 马来酸依那普利（mg/kg） 时间（min） 3 10平均血压（kPa）心率 0306090120150180210240030609012015018021024016.81.817.11.716.91.116.3士2.016.0士2.115.9士2.115.9士1.915.7士1.915.7士1.9388士67388士66370士71378士70359士76366士75349士71344士73356士8316.5士2.315.9士1.615.1士1.513.5士1.7.13.2士2.3.13.2士2.412.4士2.712.5士2.112.8士2.5362士59356士63349士63351士64354士72351士66349士66347士62348士6016.4土2.014.4士2.811.6士3.111.6士2.411.1士1.610.9士2.311.3士2.311.2士2.111.1士2.3376士32380士41363士63351士59353士43341士29352士57358士68343士42*P0.05 * p0.01与0分钟比较 #p0.05 # p0.01与对照组比较（2）正常血压麻醉狗:马来酸依那普利0.3mg/kg，1mg/kg组血压分别在给药后60150和60120分钟时显著低于给药前水平(P0.05或0.01)，而0.1mg/kg组则无降压作用，与对照组比较，各给药组心率均无明显改变;与对照组给药前后相比亦无显著变化表2 马来酸依那普利一次灌胃对正常血压麻醉狗血压和心率的影响（xs）指标 给药后 对照组 马来酸依那普利（mg/kg） 时间（min） 0.1 0.3 1平均血压（kPa）心率0306090120150180210240030609012015018021024016.8士1.916.9士2.016.9士2.016.8士2.116.8士2.416.8士2.416.8士2.416.8士2.316.8士2.3211士42211士42204士38199士34199士23195士24193士23187士24202士2416.4士1.716.4士1.716.1士1.516.1士1.216.1士2.016.5士1.516.5士1.516.4士1.916.5士1.5189士26191士27187士30182士21178士25183士26186士24186士24189士2717.4士2.916.8士2.416.7士2.7.16.3士2.7.16.4士3.1，16.3士2.9.16.5士3.316.5士3.316.5士3.3170士33166士28168士34169士47169士48173士49167士48173士48165士4016.4士1.615.9士2.015.6士1.9.15.3士1.914.8士2.013.9士1.714.4士2.114.7士2.0.14.9士2.1191士48199士57199士54193士54189士49191士42189士41190士36193士34*P0.05 * p0.01与0分钟比较 # p0.01与对照组比较(3)清醒肾性高血压大鼠:与给药前相比，马来酸依那普利1mg/kg，3mg/kg，10mg/kg均有显著降压作用(P0.05或0.01)，其降压持续时间随剂量增加而延长，分别维持4、8和12小时。对照组血压在给药前后则无显著改变表3 马来酸依那普利一次灌胃对高血压大鼠血压和心率的影响（xs）指标 给药后 对照组 马来酸依那普利（mg/kg） 时间（h） 3 10平均血压（kPa）心率 01248122401248122421.2士1.520.8士1.320.5士1.720.5士1.920.3士2.020.7士2.020.5士1.9381士58391士52382士59386士63397士46402士39390士4221.7士1.919.6士2.819.2士3.219.1士2.419.3士2.720.0士2.920.7士2.0367士49386士51364士43378士32362士37389士30375士3622.7士2.519.6士2.5.19.2士2.818.4士3.218.7士2.818.7士2.022.1士2.8404士55405士63394士47425士41419士32412士61395士49(4)清醒肾性高血压犬:与给药前比较，马来酸依那普利0.lmg/kg组收缩压和舒张压分别在给药后2一12和2小时显著降低(p0.05或0.01)，0.3mg/kg组分别在服药后1一12和2一4