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文档简介
.,技能训练常用培养基的制备,.,熟悉培养基制备的基本程序会制备常用的培养基,实训目标,高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等,仪器材料,.,方法步骤,(一)肉汤培养基(二)琼脂培养基(三)半固体培养基(四)血液琼脂培养基,.,制备培养基方法步骤,计算称量溶化调PH分装灭菌无菌检验备用,(一)肉汤培养基(二)琼脂培养基(三)半固体培养基(四)血液琼脂培养基,.,(一)肉汤培养基,1成分牛肉膏35g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。2制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后,加热溶解。矫正pH至7.47.6,过滤分装。置高压蒸气灭菌器内,121.3灭菌20min即成。3用途可供一般细菌生长,同时也是制作一般培养基的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养,亦可供溶血性的观察和保存菌种。,.,(二)固体琼脂培养基1计算:,1000ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g,再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。营养琼脂粉的量=31.315n/1000(g)其中:15代表一个平板需要营养琼脂约15ml;n代表要做的培养基平板的数量,.,2称量:,用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量,用量筒量出相应的蒸馏水的量,要尽量准确。,.,3溶化:,将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中,于电炉上加热溶化,边加热边搅拌,沸腾时立即从电炉上拿下,等泡沫消失后再放在电炉上加热,注意不能让琼脂溢出,煮沸23次。,.,4分装:倒平板或倒试管,若做平板培养基应倒于培养皿中,每板约15ml左右,以刚好覆盖平皿底为易。若做斜面培养基应倒入试管中,量为试管的1/3,包扎:,加塞后,试管通常每7支一起,包上一层牛皮纸或两层报纸,用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。以活结形式扎紧,以便使用时容易解开。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。,灭菌时包牛皮纸,.,5灭菌:用高压灭菌器灭菌,包扎好,直立放入内筒中,在121.3灭菌20-30min。灭菌完毕后,将平板培养基拿出平放于桌面,凝固前勿动;将试管培养基摆成斜面,凝固前勿动。,.,6无菌检验:,随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时,若无菌生长则为合格。,7备用:,将合格的培养基放入冰箱,在0-4中保存备用。,.,(三)半固体培养基,肉汤培养基中加入0.3%0.5%琼脂粉制成,用于菌种的保存或观察细菌的运动性。,.,(四)血液琼脂培养基,将灭菌的营养琼脂冷至4550,以无菌操作,加入5%10%的无菌血液(或脱纤
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