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第二章沉淀法,一、基本原理,根据各种物质的结构差异性（蛋白质分子表面疏水和亲水基团之间比例的差异性）来改变溶液的某些性质（如pH，极性，离子强度，金属离子等）进而导致有效成分的溶解度发生变化。,二、沉淀的类型,可逆沉淀反应:在温和条件下沉淀的蛋白质可以重新溶解形成溶液。蛋白质胶体溶液的稳定性被破坏。又称为非变性沉淀。如：等电点沉淀法、盐析法、有机溶剂沉淀法不可逆沉淀反应：在剧烈条件下，沉淀的蛋白质不能再重新溶解形成溶液。又称为变性沉淀。蛋白质胶体溶液的稳定性不仅被破坏，且蛋白质的结构和性质也被破坏了。如：加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀,常用的沉淀类型,蛋白质:盐析法有机溶剂沉淀法蛋白质沉淀法聚乙二醇沉淀法选择性沉淀法结晶沉淀法核酸步骤:DNP/RNP复合物的解聚多糖等杂质的消除DNA与RNA的分离核酸沉淀,（一）盐析法,盐浓度增高到一定数值后，水活性降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜相继被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出。常用盐：硫酸铵少量多次缓慢加入盐析的影响因子:蛋白质浓度,离子强度和离子类型,pH,温度.,常用的脱盐方法是凝胶过滤法和透析法,后者的原理是分子扩散运动.一般选用的透析液均为低离子强度的中性缓冲液.,（二）等电点沉淀法,利用蛋白质在等电点时溶解度最低以及不同的蛋白质具有不同等电点一这特性，对蛋白质进行分离纯化的方法,（三）有机溶剂沉淀法,原理：1.脱水;2.有机溶剂的介电常数比水小,导致溶剂的极性变小，使溶质溶解度降低。优点:比盐析法析出的沉淀容易过滤或离心分离，分辨力比盐析法好，溶剂也容易除去。注意：低温下操作,因为有机溶剂加入水溶液时,产生放热反应会引起蛋白质变性。,（四）蛋白质沉淀法,所用的试剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用。常见试剂：碱性蛋白质,凝集素和重金属等.碱性蛋白质：多价阳离子,除能有效地沉淀核酸物质外,还能沉淀某些蛋白质。重金属沉淀法：在低温下进行凝集素：与糖蛋白有明显凝集作用。,（五）聚乙二醇沉淀法,PEG和右旋糖苷硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用.沉淀的条件温和,不会引起蛋白质变性.,（六）选择性变性沉淀法,选择一定的条件使溶液中存在的某些杂蛋白变性沉淀而不影响所需蛋白质的方法,（七）结晶,不同
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