基因复习

2012年基因工程期末总复习一、单项选择题1、克隆扩增的目的是I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因AIBIIICIIIIDIIIIII2、T4DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A、2OH和5PB、2OH和3PC、3OH和5PD、5OH和3P3、识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为A、同工酶B、同尾酶C、同裂酶D、同位酶4、在基因工程中，可用碱性磷酸酶A、防止DNA的自身环化B、进行DNA的5，末端标记C、制备突出的3，末端D、上述说法都正确5、噬菌体外包装目的基因片段的大小应为A、小于噬菌体DNA的50B、小于噬菌体DNA的75C、大于噬菌体DNA的105D、为噬菌体DNA的751056、TI质粒中起转移作用的区域是A、ORI区B、TDNA区C、CON区D、VIR区7、要克隆并表达一外源基因，请从下边选出最合适的载体A、PBR322B、COSMIDC、酵母人工染色体D、PET288、PCR产物能和T载体相连的原因（）A、相同的酶切位点B、末端有AC、末端是粘性D、末端有T9、提取DNA或质粒时所用的饱和酚上层覆盖的液体是（）A、水B、无菌水C、硫酸D、TRISHCL10、PCR的BUFFER中含有镁离子的作用（）A、促进TAQ酶的活性B、稳定DNAC、降低退火温度D、抑制RNA酶活性11、双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于A、DNA的降解反应B、聚合单体2和5位的脱氧C、DNA的聚合反应D、特殊的DNA连接酶12、关于碱解法分离质粒DNA，下面说法不正确的是A、溶液I的作用是悬浮菌体B、溶液的作用是使DNA变性C、溶液的作用是使DNA复性D、质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性13、CDNA第一链合成所需的引物是A、POLYAB、POLYCC、POLYGD、POLYT14、评估基因文库完备性的数学公式是A、NLN（P1）/LN（F1）B、NLG（P1）/LG（F1）C、NLN（1P）/LN（1F）D、NLG（1P）/LN（1F）15、若某质粒带有LACZ标记基因，则筛选方法是在筛选培养基中加入A、半乳糖B、葡萄糖C、蔗糖D、5溴4氯3吲哚基BD半乳糖苷（XGAL）16、高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是、表达产物浓度过高、表达产物不能正确折叠、表达产物不含糖基侧链、表达产物难以形成二硫键17、1976年，美国的HBOYER教授首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌，并获得表达，此文中的“表达”是指该基因在大肠杆菌A、能进行DNA复制B、能传递给细菌后代C、能合成生长抑制素释放因子D、能合成人的生长素18、胚胎干细胞的建立与培养的步骤中，错误的是A、取任何时期的胚胎，并用培养基培养B、分散内细胞团（INNERCELLMASS，ICM）C、识别ICM克隆D、收集干细胞并培养传代19、科学家应用哪一种关键的细胞工程技术，培育出著名的“克隆羊”多利A、细胞和组织培养B、细胞融合C、动物胚胎移植D、细胞核移植20、下列报告基因属于显色或发光的报告基因是A、CAT基因B、BAR基因C、GFP基因D、SPT基因21、下列何种技术能有效地打破物种的界限，定向地改造生物的遗传性状，培育新的农作物优良品种（）A、基因工程技术B、诱变育种技术C、杂交育种技术D、组织培养技术22、甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（）以下A、5B、10C、20D、3023、在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于（）A、目的基因的提取和导入B、目的基因的导入和检测C、目的基因与运载体结合和导入D、目的基因的提取和与载体结合24、下列五个DNA片段中含有回文结构的是A、GAAACTGCTTTGACB、GAAACTGGAAACTGC、GAAACTGGTCAAAGD、GAAACTGCAGTTTC25、以下不是表达载体所必须的条件是A、必须具备很强的启动子B、必须具备很强的终止子C、启动子不需要受控制D、所产生的MRNA必须具有翻译的起始信号26、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法正确的是A、在不同的宿主中具有不同的复制机制B、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D、在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率27、载体的功能是I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力A、IB、IIIC、IIIID、IIIIII28、设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的A、5端特定序列互补B、5端任意序列互补C、3端特定序列互补D、3端任意序列互补29、提取DNA或质粒时菌体经酚和氯仿的抽提之后的中间层是（）A、DNAB、蛋白质C、脂肪D、多糖30、PCR扩增反应中常需要下列哪种金属离子A、CA2B、FE3C、MG2D、MN231、切口移位是指在作用下，使带上放射性标记。A、DNA聚合酶I，RNAB、DNA聚合酶I，DNAC、DNA聚合酶，RNAD、DNA聚合酶，DNA32、饱和酚上层覆盖的液体作用是（）A、防止酚被污染B、提高酚的作用能力C、避免酚被氧化D、促进酚溶解33、构建CDNA文库时，首先需分离细胞的（）A、染色体DNAB、线粒体DNAC、总MRNAD、TRNA34、基因工程技术中的目的基因主要来源于A、自然界现存生物体内的基因B、自然突变产生的新基因C、人工诱变产生的新基因D、科学家在实验室中人工合成的基因35、在蓝白斑筛选时，可能是阳性克隆的是（）A、蓝斑B、白斑C、绿斑D、都有可能36、关于重组蛋白在大肠杆菌中合成后定位的叙述中，错误的是A、定位在细胞核内B、定位在周质空间C、定位在内膜或外膜D、定位在细胞质37、苏云金芽孢杆菌的抗虫基因之所以能在棉花的叶肉细胞中准确地表达出来，主要是因为A、目的基因能在植物细胞核中进行复制B、目的基因与棉花DNA的基本结构相同C、不同生物共用一套遗传密码D、不同生物具有相同的一套遗传信息38、1993年，我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉，其抗虫基因来源于（）A、普通棉花的基因突变B、棉铃虫变异形成的致死基因C、寄生在棉铃虫体内的线虫D、苏云金芽孢杆菌体内的抗虫基因39、在基因诊断技术中，所用的探针DNA分子中须存在一定的放射性同位素，后者的作用是A、为形成杂交DNA分子提供能量B、引起探针DNA产生不定向的基因突变C、作为探针DNA的示踪元素D、增加探针DNA的分子量40、以下不能说明细胞全能性的实验是A、胡萝卜韧皮部细胞培育出植株B、紫色糯性王米种子培育出植株C、转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株D、番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株41、基因工程的操作步骤制备重组DNA分子，转化受体细胞，筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达，获取目的基因。正确的操作顺序是（）A、B、C、D、42、限制性内切酶的特点是（）A、只能识别GAATTC序列B、识别特定的核苷酸序列和具有特定的酶切位点C、识别黏性末端D、切割质粒DNA的标记基因43、带有多个不同种复制起始区的质粒是A、穿梭质粒B、表达质粒C、探针质粒D、多拷贝质粒44、下面有关限制酶的叙述错误的是A、一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生粘末端B、同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同C、限制酶是外切酶而不是内切D、一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端45、下列哪种克隆载体对外源DNA的装载量最大（）A、粘粒B、酵母人工染色体（YAC）C、质粒D、噬菌体46、以下关于TI质粒的说法错误的是A、可从农杆菌转到植物细胞中B、在植物细胞中作为染色体外质粒C、在植物中导致肿瘤D、需要细菌的VIR基因帮助转移47、T载体不具备的特点是（）A、环状结构B、有多克隆位点C、具有抗氨苄基因D、具有LACZ基因片段48、提取DNA或质粒时沉淀DNA时加入醋酸钠的目的（）A、改变溶液PH值B、保护DNAC、增加溶液离子强度D、促进DNA沉淀49、以下关于蛋白质工程的说法正确的是A、蛋白质工程以基因工程为基础B、蛋白质工程就是酶工程的延伸C、蛋白质工程是用蛋白酶对蛋白质进行改造D、蛋白质工程只能生产天然蛋白质50、提取DNA或质粒时酚和氯仿的比值（）A、约11B、约12C、约13D、约1351、SOUTHERN印迹是用DNA探针检测DNA片段，NORTHERN印迹则是A、用RNA探针检测DNA片段B、用RNA探针检测RNA片段C、用DNA探针检测RNA片段D、用DNA探针检测蛋白质片段52、用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为A、染色体DNA断成了碎片B、染色体DNA分子量大，而不能释放C、染色体变性后来不及复性D、染色体未同蛋白质分开而沉淀53、CDNA法获得目的基因的优点是、能纠正密码子的偏爱性、不含内含子、操作简便、表达产物可以分泌54、构建基因文库极为重要的原则是防止外源DNA片段之间的连接，其方法是IDNA片段分级分离II除去DNA片段末端的磷酸基团III用TDT酶增补人工粘性末端、II、III、IIIII、IIIIII55、人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是A、提高受体细胞在自然环境中的耐药性B、有利于对目的基因是否导入进行检测C、增加质粒分子的分子量D、便于与外源基因连接56、外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分离A、IIIB、IIIC、IIIIIID、IIIII57、关于甲醇酵母表达系统的优点的叙述中，错误的选项是A、具有强有力的AOXI（乙醇氧化酶）启动子B、可以对表达的蛋白质进行加工和修饰C、可低密度发酵培养D、营养要求低，培养基廉价58、下列实践与基因工程无关的是A、利用DNA探针检测饮用水是否含病毒B、将植物的叶绿体移入植物以提高光合作用效率C、选择“工程菌”来生产胰岛素D、培育转基因抗虫棉59、下列哪种生物不能作为生物武器（）A、伤寒杆菌B、炭疽杆菌C、乳酸菌D、天花病毒60、下列报告基因属于显色或发光的报告基因是A、CAT基因B、BAR基因C、GFP基因D、SPT基因61、限制性酶SALI识别的序列是GTCGAC，酶切后在5侧产生4个碱基突出，限制性酶XHOI识别的序列是CTCGAG，酶切后也在5侧产生4个碱基突出。如果将SALI酶切过的插入片段与XHOI酶切过的质粒载体混合，再进行连接反应，那么产生的连接产物所具有的性质是。A使用SALI或XHOI处理，插人物都会释放出来BSALI处理可以使插人物释放出来，但XHOI不行CXHOI处理可以使插人物释放出来，但SALI不行D无论使用SALI或XHOI处理，插人物都不会释放出来62CHIP分析用于确定。ADNA结合蛋白的免疫原性B与蛋白质结合的带有放射性的DNA的泳动性C一种蛋白质在染色体上的结合位点D种抗体识别特定DNA序列的能力63有人构建了能在酵母中表达双杂交蛋白的克隆。第一个杂交蛋白由GAL4的DNA结合结构域和蛋白质X融合而成，第二个杂交蛋白由一种称为VPL6的病毒蛋白质的激活结构域和蛋白质Y融合而成。当这两个杂交蛋白在缺乏GAL4的酵母细胞中表达的时候，GALL基因表现为组成型表达。这是因为。A在GALL启动子附近的VPL6激活结构域的浓度降低BVPL6激活结构域导致GAL4的DNA结合结构域的构象发生改变，从而促进启动子元件靠近，有利于TFD的结合C蛋白质X直接招募介导子复合物D蛋白质X招募YVPL6杂交蛋白，后者再招募其他蛋白质64、一种真菌接触到某种药物以后被诱导产生一种特定的酶。对此你提出了一种假设进行解释。为了证明你的假设，你需要设计一系列的实验进行验证。以下实验中对你验证没有帮助的是。ASOUTHERN印迹BNORTHERN印迹CWESTERN印迹D测定被诱导的酶的活性65如果要用PCR扩增以下DNA模板中的基因L，需要的一对引物序列是。5CTTCGAAATTC基因1TCTCCCGATCGG基因2AAGATCAAATCCTTTGCTCT3A正向引物是TTCGAAATTC，反向引物是GATCGGGAGAB正向引物是CCTTTGCTCT，逆向引物是TCCCGATCGGC正向引物是GAATTTCGAA，逆向引物是TCTCCCGATCD正向引物是GATCGGGAGA，逆向引物是TTCGAAATTC66P53是一种抑癌基因。如果你想知道它是否在癌细胞和健康细胞内表达，你需要。A对这些细胞的染色体DNA进行SOUTHERN印迹B对从这些细胞内纯化的MRNA进行NORTHERN印迹C利用酵母双杂交技术进行EASTERN印迹D对P53蛋白进行免疫共沉淀，以寻找相关的蛋白质67克隆来自人基因组DNA500KB的片段，选用的最佳载体应该是。ABACB入噬菌体CYACD黏粒载体68用来转化双子叶植物的克隆载体是。AYACBTI质粒CPBR质粒D黏粒69所有与定点突变有关的方法都需要使用。APCRB单链DNA噬菌体C套式系列DNAANESTEDSETOFDNAD人工合成的含有所需要突变的寡DNA70在植物转化的二元载体系统中，外源基因位于。A与选择性标记基因相同的质粒上B与VZR基因相同的质粒上C两个质粒都有B两个质粒都没有71下列最可能是限制性酶识别位点的碱基序列是。AAGTCBACCTCACGTDATCG72假定你从乌龟的基因组里克隆到一个单拷贝基因，经研究发现，其中部含有一个ECOR工切点。如果你使用切口平移的方法对克隆的基因的全序列进行了同位素标记，然后，将标记的DNA变性，再用得到的单链DNA作为探针，对经ECOR工完全消化过的乌龟基因组DNA进行SOUTHERN印迹实验，那么在经过放射自显影以后，最后你能得到的条带数目是。A0B1C2D3E473可以用来确定一种MRNA5端序列的方法是。A使用EDNA探针进行NORTHERN印迹B将基因组DNA序列与通过RTPCR得到的EDNA序列进行比较C使用引物延伸或5EDNA末端快速扩增5RACED将MRNA与蛋白质进行序列比较74使用YIP载体对酵母细胞进行转化将导致在转化体内的质粒DNA。A通过同源重组整合到基因组DNAB出现多个拷贝约30个C经过细胞分裂以后不能稳定地维持D在细胞核能进行自主复制75将3端有突出的双链DNA修成平端需要。ADNA聚合酶的延伸反应BDNA聚合酶的校对反应C限制性酶直接将突出切除D逆转录酶催化的逆转录反应76、如果你要用CHIP实验，测定一种激活蛋白是否与小鼠组织培养细胞中的某一个基因的增强子结合，你不需要使用的实验材料是。A细胞浸透性交联试剂B激活蛋白的抗体C目的基因的抗体D去交联方法77、如果有人给你少量埃及木乃伊的骨头碎片，叫你分析在当时的古埃及是否流行一种特定的遗传疾病，那么以下不会给你提供任何有关信息的实验是。A使用重复序列设计的引物进行PCRB使用不同的限制性酶进行RFLPCNORTHERN印迹DSOUTHERN印迹78、PCR实验不需要的成分是。ARNA引物B耐热的DNA聚合酶CDNA模板DDNTP79、如果在珠蛋白基因的第一个外显子内的MST酶切位点发生碱基替换，则后果将是。A使用RFLP分析将会产生新的限制性片段B将导致珠蛋白的一个VAL被GLU取代C将导致剪接异常D只能在同源合子中检测到80以下技术可以用来研究蛋白质和核酸之间的相互作用的是。ASOUTHERN印迹BNORTHERN印迹CWESTERN印迹D电泳迁移滞后实验EMSA81、使用PST工和XHO工同时切割，则产生1300BP、1000BP、500BP和200BP个片段，那么，PSTI酶切片段的次序是。AABCBACBCBCADBAC82以下用来确定人肝细胞所有的基因的表达水平的技术手段是。ASOUTHERN印迹BNORTHERN印迹CWESTERN印迹D基因芯片83、如果你制备插入片段平均大小为10KB的某种生物的基因组文库，这种生物的基因组大小为20M双倍体，那么，要达到高于99的可能性从文库中获得一个特定克隆所需要的最低克隆数目是。A100B200C1000D1000084在大肠杆菌中用于表达外源基因的载体在启动子下游通常含有SD序列，这个序列的作用是。A为核糖体提供识别位点B提供转录位点C增强启动子活性D提高RNA稳定性85、WESTERN杂交是用于下列杂交技术中的哪一个。ADNADNABRNARNACDNARNAD抗体抗原结合二、多项选择题1、基因工程的四大基本元件是A、供体B、受体C、载体D、工具酶2、下列有关连接反应的叙述，正确的是（）、连接反应的最佳温度为37、连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10、连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1MM、连接酶通常应过量25倍3、属于定点突变的技术有（）A、寡核苷酸引物介导法B、易错PCR法C、大引物突变法D、盒式突变4、表达载体所必须的条件是A、必须具备很强的启动子B、必须具备很强的终止子C、启动子不需要受控制D、所产生的MRNA必须具有翻译的起始信号5、以下属于显色或发光报告基因的是（）A、葡萄糖苷酶基因B、荧光素酶基因C、绿色荧光蛋白基因D、RNA聚合酶基因6、基因工程的操作步骤包含（）A、制备重组DNA分子B、转化受体细胞C、获取目的基因D、筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达7、下列说法不正确的是（）A、DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的B、限制性内切酶的切口一定是GAATTC碱基序列C、质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体D、利用载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”8、SOUTHERN印迹法的步骤是A、用限制酶消化DNAB、DNA与载体的连接C、用凝胶电泳分离DNA片段，转移至硝酸纤维素膜上D、用一个标记的探针与膜杂交9、关于甲醇酵母表达系统的优点的叙述中，正确的是A、具有强有力的AOXI（乙醇氧化酶）启动子B、可以对表达的蛋白质进行加工和修饰C、可低密度发酵培养D、营养要求低，培养基廉价10、以下关于报道基因的论述哪一些是不正确的A、以一个易检测的启动子区替换一个不易检测的启动子区B、可用于测定启动子活性C、不能用于测定的启动子何时、何处被激活D、是用一个突变的操纵区替换一个正常的操纵区11、基因工程的受体细胞有A、大肠杆菌B、枯草杆菌C、支原体D、动植物细胞12、PBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件A、AMPR和TETRB、LACZ标记C、ORI复制子D、多克隆位点13、碱裂解法分离质粒DNA，其作用表述正确的是A、溶液的作用是悬浮菌体B、溶液的作用是使DNA变性C、溶液的作用是使DNA变性D、质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性14、重组蛋白在大肠杆菌中合成后定位于A、定位在细胞核内B、定位在周质空间C、定位在内膜或外膜D、定位在细胞质15、关于报告基因应满足的条件中，正确的是A、选择物美价廉易得的B、在选择压力下，转化细胞能继续生长C、抗性基因产物对转化细胞的生长发育无抑制作用D、抗性基因无论是显性或隐性基因均可以16、可以用来测定蛋白质和DNA分子之间相互作用的技术有。ANORTHERN印迹BDNA芯片CCHIPD电泳迁移滞后实验ESOUTHERN印迹17在基因克隆中可以用来作为融合蛋白纯化标签的有。A多HISB谷胱甘肽S转移酶C麦芽糖结合蛋白MALTOSEBINDINGPROTEIN,MBPEMYCFFLAG18制备CDNA文库所需要的工具酶有。A多腺苷酸聚合酶B逆转录酶C核酸酶SLD限制性酶EDNA连接酶19可以用来检测一个克隆基因是否在宿主细胞内表达的方法有。ASOUTHERN印迹BNORTHEM印迹CWESTERN印迹DPCREDNA序列分析20、肯定用到寡DNA的分子生物学技术有。APCRB双脱氧法测序C限制性酶消化分析D基因组文库构建E定点突变21在基因克隆中可以作为报告基因的有。A编码氯霉素乙酰转移酶的基因B编码荧光素酶的基因C编码谷胱甘肽S转移酶的基因D编码绿色荧光蛋白的基因E编码半乳糖苷酶的基因22酵母人工染色体必须具有的元件包括。A着丝粒B抗生素抗性标记C端粒DARSEORIC23可以将特定目的基因失活的技术有。A定点突变BRNA干扰C反义RNAD基因敲除E基因治疗24用于在大肠杆菌细胞进行分子克隆的载体必须具有。AECORI切点B复制起始C选择性标记D端粒EDNAA蛋白结合位点25在下列所提供的酶中，可直接用于制备放射性同位素标记的DNA探针的有。A大肠杆菌DNA聚合酶IB多核苷酸激酶CT4DNA连接酶DTAQDNA聚合酶E限制性酶三、简答题1、解释互补筛选的原理2、利用双脱氧末端终止法（SANGER法）测定DNA一级结构的原理3、PCR的基本反应过程包括哪些反应体系需要什么条件4、以PET28A载体，BL21（DE3）受体为例，简述基因表达步骤。5、简述TI载体介导的转基因植物基本程序。6、简述以质粒为载体构建GENELIBRARY的基本步骤7、影响外源基因表达的因素有哪些8、鉴定转基因植物的外源基因是否整合的方法有哪些，请简单描述其中一种方法。9、说明SOUTHERN杂交的原理和方法。10、如何使下列基因中的位点AT突变成GCAT11、对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面12、大肠杆菌中表达外源基因的表达方式有哪些各种方式的特点13、简述以逆转录病毒做载体的转基因动物技术。14、引物设计的一般原则是什么15、以下为双脱氧终止反应，经琼脂糖凝胶电泳和放射自显影所得到的X胶片图，根据此图，分析其结果1、简述双脱氧终止法进行DNA测序的原理2、根据上图，写出该DNA片段的序列AGCT16、基因组文库和CDNA文库有什么区别克隆到这两个文库中的基因的结构主有什么主要区别两种文库各具有什么优点17、限制性内切酶可发生哪两类切割请简述这两类切割可能产生的三种末端形式。18列出一个理想的克隆载体的特征。19请简述几种鉴定方法鉴定重组质粒和重组噬菌体的插入片段是否正确插入。20、将DNA片段克隆到质粒载体中时，载体自连常常会影响实验结果。请给出两种能防治载体自连的方法。四、论述题1、论述基因工程的基本步骤。2、试述蛋白质工程中定点突变或定向进化中的一种技术的原理和步骤。3、论述重组子的筛选与鉴定方法。4、在PCR扩增时，PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带，为什么有何对策5、论述噬菌体载体的克隆原理及一般步骤6、论述寡聚核苷酸引物介导的定点突变技术。7（A）简述培育转基因动物的技术手段可能有哪些实际的用途（B）培育转基因动物技术有哪些潜在的缺点和问题8PCR与细胞内DNA复制两者有哪些主要的相同点和不同点，各举出5个。9基因工程中常用互补来筛选重组质粒，请说明其原理。10如果要在实验室里克隆人生长激素（HGH）基因并制备人生长激素（HGH）（A）如果在细菌中克隆并表达如人生长因子基因这一类基因时，可能会遇到哪些技术问题（B）请再设计另外两种能避开这些潜在问题的实验路线。11如果你分离到一种癌基因的全基因组DNA克隆包括上游序列、所有的内含子和外显子以及下游序列，现在想研究一些潜在的抗癌药物对此癌基因的表达产生的抑制情况，那么，你如何使用GFP作为报告基因，测定某一种组织在不同的药物作用以后这种癌基因表达水平的变化12假定小鼠有A和B两种细胞，其中A细胞仅仅比B细胞多表达一种蛋白质X，那么，你如何快速地得到这种蛋白质的CDNA13质免疫沉淀CHIP分析有何用处这种技术需要哪些特有的试剂它与凝胶迁移率变动分析和DNA酶工足迹分析有何不同14有人在使用CHIP技术，研究一种固醇类激素与它结合的受体可能在离一个基因转录起始点330BP的序列结合。他对DNA进行交联处理，然后用超声波将其断裂成平均大小为600BP的片段，然后使用这种激素受体的抗体，免疫沉淀DNA蛋白质复合物，在去交联之后，使用与转录起始点相距400BP长的序列在可能受到激活的转录的基因的中部序列的两侧序列互补的引物进行PCR。然而，当他对扩增产物进行电泳分析的时候，在受激素处理的样品中并没有发现400BP的产物。于是，他得出这种激素并不能诱导受体与潜在的调控序列结合。可是不久，另外一个研究者使用其他方法证明，这种激素受体复合物的确能够与这个基因上游潜在的结合位点结合。如果他的实验操作没有任何问题，你认为是什么原因导致他的实验失败15如果将右图所示的质粒用限制性酶BAMH工消化后，与人DNA的BAMHI消化产物进行连接，然后再将连接产物转化大肠杆菌。1你如何选择含有质粒的细菌菌落2假定想利用这种质粒作为载体高表达一种外源基因，你将选择哪一个限制性酶切位点作为外源基因的插入位点在这个位点上含有外源基因的所有质粒都能正常地表达吗3如果使有双酶切ECORI和BAMHI消化质粒和还有外源基因的DNA，然后再将消化产物进行连接和转化，这与单酶切相比有哪些好处16有人使用PCR扩增一个2KB长的基因，他在准备扩增反应的时候，犯了一些错误。根据你学过的分子生物学知识，你认为这些错误对PCR的结果有何影响他是否需要重新准备反应系统1在反应系统中，他除了加了DNTP，还加人了DDNTP。2DNA模板的量比原计划多加了两倍。3他使用了大肠杆菌的DNA聚合酶代替丁AQDNA聚合酶。4他设置的扩增循环是LMIN，37C；1MIN，50C；LMIN，72C。5他使用的引物序列与基因的编码链两侧的序列完全相同。6他在PCR缓冲溶液中用了MN2代替MG2。五、分析题1、打算将一个CDNA克隆到一个表达载体，以便在ECOLI中大量制备相应的蛋白质。这个CDNA的两侧具有BAMHI的位点，因此计划将它从BAMHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行载体用BAMHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去5磷酸；接着将处理过的载体同用BAMHI切割的CDNA片段混合，加入DNA连接酶后进行温育，连接之后，将DNA同已处理过的可以接受DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了4个对照对照1将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照2将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照3将经切割但未用碱性磷酸酶处理并用连接酶连接但没有CDNA片段的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；对照4将经切割并用碱性磷酸酶处理过并用DNA连接酶连接但没有CDNA片段的载体转化过的细菌细胞涂布在培养子板上。在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落表1。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长表1。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子表1。从实验平板上挑出12个菌落，分离了质粒DNA，并用BAMHI进行切割，其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个CDNA片段，实验终于获得成功。1你如何看待第一次的实验结果对照1的目的是什么2影响第二次实验结果的原因是什么对照2的作用何在3对照3和4各有什么作用为什么要用碱性磷酸酶处理载体表1CDNA克隆的结果实验结果制备的样品123对照1只有细胞TMTC00对照2未切的载体TMTC01000对照3省去磷酸酶处理，无CDNATMTC0435对照4无CDNATMTC025实验样品TMTC034注TMTCTOOMANYTOCOUNT，多到无法计数。2、番茄果实成熟过程中，某种酶（PG）开始合成并显著增加，促使果实变红变软。但不利于长途运输和长期保鲜。科学家利用反义RNA技术，可有效解决此问题。该技术的核心是，从番茄体细胞中获得指导PG合成的信使RNA，继而以该信使RNA为模板人工合成反义基因并将之导入离体番茄体细胞，经组织培养获得完整植株。新植株在果实发育过程中，反义基因经转录产生的反义RNA与细胞原有MRNA（靶MRNA）互补形成双链RNA，阻止靶MRNA进一步翻译形成PG，从而达到抑制果实成熟的目的。请回答（1）反义基因像一般基因一样是一段双链的DNA分子，合成该分子的第一条链时，使用的模板是细胞质中的信使RNA，原料是四种_，所用的酶是_。（2）开始合成的反义基因第一条链是与模板RNA连在一起的杂交双链，通过加热去除RNA，然后再以反义基因第一条链为模板合成第二条链，这样一个完整的反义基因被合成。若要以完整双链反义基因克隆成百上千的反义基因，所用复制方式为_，若要大量扩增DNA分子通常采用的技术是_。（3）如果指导番茄合成PG的信使RN