《医学免疫学教学资料》免疫诊断与免疫治疗

免疫诊断Immunodiagnosisp229-240,1,免疫诊断(Immunediagnosis),概念利用免疫学原理进行临床疾病的诊断或辅助诊断,2,抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的可见性,一、抗原或抗体的检测（一）、抗原抗体反应的特点,利用已知抗体检测病人的未知抗原，如HBVsAg利用已知抗原检测病人的抗体，如抗HIV抗体、抗核抗体等,3,抗原抗体反应的影响因素：,亲和力（affinity)亲合力(avidity）,4,抗原抗体比例合适温度酸碱度电解质,抗原抗体反应的影响因素：,5,（二）、检测抗原或抗体的方法,1.凝集反应（agglutination)：颗粒性抗原与相应抗体结合形成凝集团块,直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗体,6,7,2.沉淀反应(precipitation)：可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物,单向免疫扩散：可用于检测血清中Ig的含量双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析免疫比浊：,8,单向免疫扩散,9,双向免疫扩散,10,Ag,+,-,免疫电泳,11,4.用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应,12,13,直接免疫荧光,14,间接免疫荧光,15,酶免疫测定：酶标记抗体进行的抗原抗体反应酶联免疫吸附试验(ELISA)：将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。,双抗体夹心法检测待测抗原间接法检测待测抗体BAS-ELISA（生物素-亲和素系统-ELISA）酶联免疫斑点试验(ELISPOT)免疫组化技术,16,17,18,19,20,二、免疫细胞的测定分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的免疫功能包括CD分子测定、淋巴细胞转化、吞噬实验、细胞毒实验等,21,（一）、淋巴细胞的分离与类型鉴定分离方法：密度梯度离心单个核细胞,磁珠分离：抗体与磁珠交联免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞悬液荧光激活细胞分选仪分离法（FACS）抗原肽-MHC分子四聚体技术,22,磁珠分离法,23,流式细胞分选仪（FACS）,24,GreenFluorescenceIntensity,GreenFluorescenceIntensity,Unstainedcells,NumberofCells,流式细胞仪,25,26,（二）、免疫细胞功能测定：,T细胞功能测定B细胞功能测定吞噬细胞功能测定,27,T细胞功能测定,T细胞增殖试验细胞毒试验细胞因子检测皮肤试验,28,淋巴细胞转化，镜下观察,3H-TdR掺入法：氚标记的胸腺嘧啶核苷2.MTT法3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑,29,细胞毒实验：细胞形态：台盼蓝染色51Cr的释放LDH释放,凋亡细胞检测法：细胞形态：琼脂糖电泳FACSTUNEL,30,31,细胞因子的检测,生物活性检测法CTLL细胞株IL-2依赖免疫学检测：ELISAELISPOT,32,33,34,B细胞功能测定,Ig定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、ELISAB细胞增殖试验抗体形成细胞测定：溶血空斑实验ELISPOT,35,吞噬细胞功能测定,趋化功能测定（Boyden小室）吞噬功能测定（硝基蓝四氮唑NBT、荧光标记的生物颗粒）,36,三、免疫学检测方法的应用,疾病的诊断：感染性疾病超敏反应性疾病自身免疫病免疫缺陷病肿瘤免疫学监测：,37,第二十三章免疫学防治Immunoprophylaxisandimmunotherapyp241-251,38,一、免疫预防,疫苗的基本要求:安全有效实用,自然免疫：机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。疫苗（vaccine）：一些能够诱导机体产生特异性免疫的人工主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等统称为疫苗。人工主动免疫:用疫苗接种机体使之产生特异性免疫,从而预防感染的措施。人工被动免疫：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。,39,灭活疫苗：狂犬病、伤寒、流感疫苗减毒活疫苗：脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗类毒素：细菌的外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理白喉、破伤风亚单位疫苗：重组乙型肝炎病毒表面抗原疫苗结合疫苗：b型流感杆菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗、肺炎球菌疫苗DNA疫苗：重组载体疫苗：麻疹、疱疹、肿瘤疫苗、甲乙型肝炎,疫苗的种类,40,新型疫苗,合成肽疫苗：疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食用的植物细胞基因组中，使其在植物的可食用部分稳定表达，通过摄取食物达到免疫接种的目的。,41,疫苗的现状：,常规使用的疫苗的成功率：脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗BCG百日咳疫苗,42,许多疾病无有效疫苗：病毒：HIV，疱疹病毒细菌：葡萄球菌，A组链球菌真菌：假丝酵母原生动物：疟疾，利什曼病蠕虫感染：血吸虫病,43,人工被动免疫:给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂,以治疗或紧急预防感染的措施.种类：抗毒素免疫球蛋白细胞因子与单克隆抗体,44,佐剂（adjuvant)：预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质。,增加局部抗原浓度刺激单核-巨噬细胞系统，增强抗原处理和提呈能力刺激淋巴细胞增殖分化,常用佐剂：氢氧化铝ISCOMs（免疫刺激复合物）含CpG寡核苷酸细胞因子,45,我国计划免疫程序,46,疫苗的应用,传染病抗肿瘤计划生育,47,二、免疫治疗（Immunotherapy）利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗疾病目的所采取的措施。免疫抑制、免疫增强主动或被动特异或非特异,48,（一）、分子治疗分子疫苗：合成肽疫苗、重组载体疫苗和DNA疫苗抗体3.细胞因子4.微生物抗原疫苗5.基因治疗,49,1）多克隆抗体在临床应用的多克隆抗体包括：胎盘球蛋白、丙种球蛋白、破伤风抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴细胞抗血清、抗Rh抗体、抗SARS病毒抗体等2）鼠源单克隆抗体在临床应用的鼠源单克隆抗体：抗CD3（OKT3）：抗器官移植排斥抗CD20：治疗B细胞淋巴瘤3）基因工程抗体基因工程抗体已经成为治疗性抗体的主流产品。包括：嵌合抗体（chimericAb)人源化抗体（humanizedAb）人抗体,抗体药物,50,基因工程抗体,鼠源单克隆抗体治疗存在的主要问题是HAMA（Humananti-mouseantibody）反应，导致疗效下降，副作用增加。,51,抗细胞因子及其受体抗体抗TNF及其受体的抗体治疗类风湿关节炎抗IL-2及其受体治疗自身免疫病和抗移植排斥抗VEGF抗体治疗肿瘤抗EGFR2、EGFR1抗体治疗肿瘤,52,抗CD分子抗体抗CD20嵌合抗体治疗B细胞淋巴瘤抗CD33治疗急性髓性白血病抗CD52治疗淋巴瘤抗CD11a治疗银屑病,53,抗体靶向治疗（Antibody-targetedTherapy）,以抗体为载体，携带同位素、毒素、药物等分子，选择性杀伤靶细胞的技术。,54,I131标记抗CD20单抗治疗B细胞淋巴瘤抗癌药物（calicheamicin）偶联的抗CD33治疗白血病I131标记鼠源抗HAb18（CD147）单抗治疗肝癌（四军医大）,55,抗体药物的主要问题,临床用量大成本高，价格昂贵生产工艺复杂，硬件设备高投入治疗性免疫靶标的鉴定有很大难度存在临床风险,56,美国FDA已批准生产和临床使用的单克隆抗体（截至2011年）,57,批准上市的重组细胞因子药物,IFN白血病、肝炎、Kaposi肉瘤IFN类风湿关节炎、慢性肉芽肿、生殖器疣G-CSF自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、再生障碍性贫血GM-CSF自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、再生障碍性贫血Epo慢性肾衰导致贫血、癌症或癌症化疗导致的贫血、失血后贫血IL-2癌症、免疫缺陷、疫苗佐剂IFN多发性硬化症IL-11放化疗所致血小板减少症SCF与G-CSF联合应用与外周血干细胞移植PDGF糖尿病导致的皮肤溃疡EGF外用药治疗烧伤、溃疡（仅在中国上市）bFGF外用药治疗烧伤、外周神经炎（仅在中国上市）TNF局部灌注治疗晚期骨髓瘤（仅在德国上市）TNF突变体晚期肿瘤（仅在中国上市）Tpo治疗血小板减少症（仅在中国上市）,重组蛋白质药物,58,批准上市的重组可溶性受体药物,可溶性TNF受体-Ig（Enbrel）：治疗类风湿关节炎（Amgen),2006年销售额超过45亿美元,可溶性CD152-IgCTLA4-Ig）:商品名Abatacept，治疗自身免疫病（Bristol-MyersSquibb）,2005年12月批准上市,59,重组蛋白质药物的主要问题,半衰期短，需要反复给药能够诱导抗体产生,60,基因治疗,将正常人体基因通过invivo或exvivo的途径导入病人体内，通过体内表达正常基因治疗疾病。,61,AshantideSilva,wasthefirstpatienttobetreatedwithgenetherapy.,重症联合免疫缺陷（SCID）的基因治疗腺苷脱氨酶（ADA）基因治疗(1990),62,63,XSCID的IL-2受体链基因治疗性联SCID的发病是由于IL-2R基因缺陷2000年法国科学家在Science首次报道2例成功基因治疗的结果；至2002年法、英、美共治疗14例，12例成功。,第一例成功接受IL-2R基因治疗的男孩RhysEvans,64,XSCID基因治疗原理,65,基因治疗的主要问题,病毒载体的安全性靶基因选择基因导入效率基因的可调控表达,66,（二）、免疫细胞治疗,将免疫细胞输入病人体内进行治疗的方法1）造血细胞输入治疗，包括骨髓移植(自体或异体）、脐带血移植、外周血干细胞移植等。2）免疫效应细胞输入治疗，即过继性免疫（Adoptiveimmunity）例如LAK（lymphokineactivatedkiller）细胞TIL（tumorinfiltratinglymphocyte）树突状细胞（DC）治疗等,67,免疫细胞治疗的主要问题,疗效不稳定，不同个体反应不同只能采取个体化治疗，不能工业生产，质量控制有难度成本高，价格昂贵,68,（三）、生物应答调节剂和免疫抑制剂,天然动植物药物,免疫增强剂：黄芪、茯苓、枸杞等,69