提取和鉴定DNA.ppt

专题5课题1DNA的粗提取与鉴定,DNA的粗提取与鉴定一，教学目标1.知识目标理解DNA的理化特性及根据其理化特性而提取和鉴定的原理。2、能力目标（1）初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。（2）在对实验原理、步骤的理解和分析过程中发展学生的科学思维。3、情感、态度、价值观在科学实验过程中培养学生严谨比较细致、实事求是的科学态度。二.教学重点DNA的粗提取与鉴定方法及其相关原理三.教学难点DNA的粗提取与鉴定方法及其相关原理,【自主学习】,阅读课本P54,一、实验原理,、DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。,、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出杂质较少的DNA。,、DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。,二、目的要求,初步掌握DNA粗提取和鉴定方法，观察提取出来的DNA物质。,三、材料：,鸡血细胞液（5-10ml），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/l的NaCl溶液，二苯胺试剂。,取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml，置于烧杯中，将新鲜鸡血180ml注入，同时用玻璃棒搅拌，以免凝血，然后倒入离心管中用1000r/min的离心机离心2min，此时，血细胞沉淀于离心管的底部，除去上清液，就可以得到鸡血细胞液。,问：提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？,四、方法步骤：,1、制备鸡血细胞液,鸡血细胞液,答：上清液是血清，不含有血细胞，而DNA存在于鸡血细胞中，所以要把上清液除去。,加入浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）：防止鸡血细胞液凝固。,新鲜鸡血,2、提取鸡血细胞的细胞核物质,将制备好的鸡血细胞液5-10ml，注入烧杯中，加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞的细胞膜和核膜加速破裂，过滤，取其滤液。,鸡血细胞液,加入蒸馏水20ml。目的是：使细胞吸水涨破，释放出细胞中的DNA.,纱布,将物质的量浓度为2mol/l的NaCl溶液40ml加入到滤液中，搅拌使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。,3、溶解细胞核内的DNA,DNA溶解液,加入浓度为2mol/L的NaCl溶液40ml,沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，这时会有丝状物出现，随着蒸馏水的加入逐渐增多，一直到NaCl浓度约为0.14mol/l时，不再继续增加。,4、析出含DNA的黏稠物,加入蒸馏水。目的是：降低NaCI的浓度，析出DNA。,获得DNA的黏稠物(白色乳状),在溶液中加入冷却的体积分数为95%酒精溶液50ml，溶液中出现杂质较少的丝状物（它的主要成分就是DNA）。,5、进一步提取含杂质较少的DNA,加入冷却体积分数为95%的酒精溶液50ml,含DNA的滤液,杂质较少的丝状物,6、DNA的鉴定,取两支20mL的试管，各加入浓度为2molL的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。,加入2mol/lNaCl溶液5mL,不加入丝状物,加入4mL的二苯胺试剂,蓝色,加入2mol/lNaCl溶液5mL,加入丝状物,加入4mL的二苯胺试剂,二苯胺,讨论：,1、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？2、加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？3、如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。,洗涤剂是一些离子去污剂，它能溶解细胞膜，有利于DNA的释放。,适度的食盐溶液有利于DNA的溶解,当细胞处于清水中时,细胞内液浓度高于细胞外液,细胞会渗透作用吸水,当吸水量增加到一定程度,而动物细胞没有细胞壁的保护,就会导致细胞过度吸水涨破。,4、滤液中可能含有哪些细胞成分？5.为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？,可能含有蛋白质（核蛋白）、多糖和RNA等杂质。,用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。,实验录像,课后作业：,二苯胺:白色至浅灰色的晶体，有挥发性，毒性作用与苯胺相似.,A液:1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加15mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。B液:乙醛的体积分数为0