第十一章-薄层色谱PPT课件

第十一章薄层色谱法,学习目标,1掌握薄层色谱法基本原理，熟悉固定相和展开剂的选择原则；2掌握薄层色谱法的操作方法；3.了解薄层色谱法的定性和定量方法。,主要内容,11-1基本原理11-2操作方法11-3定性和定量方法,11-1基本原理,一、分离原理二、吸附剂（固定相）三、展开剂（流动相）,.,5,吸附薄层色谱法（TLC)的定义,TLC:将吸附剂均匀地铺在玻璃板、塑料板或金属薄片表面上形成薄层，经点样、展开与显色后，根据结果进行定性或定量的方法。,一、分离原理,色谱过程：吸附剂对各组分具有不同的吸附能力，展开剂对各组分的溶解、解吸能力也不相同。各组分在两相吸附-解吸过程中迁移速度不同，而最终被分离开来。,比移值Rf,Rf取值范围:01Rf最佳范围:0.150.85,在固定条件下，Rf值为常数定性依据,.,8,比移值的意义,Rf理想范围:0.150.85分配系数K越大保留时间越Rf值越分配系数K越小保留时间越Rf值越,长,小,短,大,即K或kRf,相对比移值Rs消除系统误差的影响,.,10,课堂练习,样品和对照品经过薄层色谱分离后，样品斑点中心距原点8.0cm，对照品斑点中心距原点6.0cm，展开剂前沿距原点10.0cm。试求样品Rf值和Rs值？,二、吸附剂（固定相）,吸附剂的选择从两方面考虑：被分离物质的性质和吸附剂的吸附性能力的强弱极性强的物质吸附弱的吸附剂；极性弱的物质吸附强的吸附剂；最常用的吸附剂是硅胶、氧化铝和聚酰胺,.,12,1.硅胶,硅胶结构：硅胶具有多孔性的硅氧交联骨架,水合硅醇基，失去吸附活性,硅醇基（吸附中心）吸附极性基团,.,13,被分离物质的结构与性质：,极性大的物质强吸附极性小的物质弱吸附常见官能团的极性由小到大的顺序：烷烃烯烃醚硝基化合物酯酮醛硫醇胺醇酚羧酸,.,14,加热到500oC时，交联内部的结构水不可逆的失去，硅醇结构变为硅氧烷结构。,硅胶的活化,通常将硅胶在105-110烘约0.5-1h，可逆除去硅胶表面吸附的水，使硅胶恢复吸附能力。,硅胶的活性与含水量有关含水量高，活度级数高，吸附力弱薄层色谱常用硅胶有硅胶H、硅胶G、硅胶HF254、GF254等品种适用于分离酸性和中性物质，如：有机酸、氨基酸、萜类、甾体等的分离。,.,16,2氧化铝,氧化铝H、氧化铝G、氧化铝HFz等型号氧化铝又可分为碱性氧化铝、酸性氧化铝和中性氧化铝氧化铝的吸附性比硅胶弱，但它能显示出与硅胶不同的分离能力,3.聚酰胺,聚酰胺为有机吸附剂，聚酰胺分子内的配胺基能与酚类、酸类、醌类及硝基化合物等形成氢键，由于这些化合物中酚羟基数目及位置的不同，而导致聚酰胺对其产生不同的吸附力，遂使其分离。,三、展开剂（流动相）,一般遵循“相似相溶”原则：极性大的物质极性大展开剂极性小的物质极性小展开剂,三、展开剂（流动相）,薄层色谱法中常用的溶剂，按极性由强到弱的顺序排列是：水酸吡啶甲醇乙醇丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯三氯乙烷四氯化碳环已烷石油醚,.,21,选择TLC分离条件的一般原则：,组分：极性大吸附剂：极性小展开剂：极性大,三、展开剂（流动相）,酸性组分加酸，可防止拖尾现象碱性组分加碱，可防止拖尾现象选择展开剂采用试验的方法常选择用混合溶剂作为展开剂,如何调节Rf值在0.15-0.85？通过调节展开剂的极性：若Rf值都太小，则展开剂的极性；若Rf值都太大，则展开剂的极性。还可改变吸附剂的活性：若Rf值都太小，则吸附剂的活性；若Rf值都太大，则吸附剂的活性。,思考,增大,减小,减小,增大,11-2操作方法,一、制板二、点样三、展开四、斑点定位,一、制板,薄层铺板的厚度及均匀性对样品的分离效果和Rf值的重复性影响极大，一般厚度以0.25mm为宜。硬板的制备1)载板；2)匀浆的制备；3）制板；4）晾干；5）活化,(1)载板,多用玻璃板，也可用塑料膜和金属铝箔。要求：表面光滑，平整清洁，没有划痕。用前先把玻璃板用洗液浸泡或用肥皂水洗净，再用水清洗干净，最好用95乙醇擦一次。烘干备用。规格根据载玻片的不同一般有4cm20cm、10cm20cm、20cm20cm及2.5cm7.5cm等几种,(2)匀浆的制备,1份吸附剂+3份黏合剂放在研钵中，向同一方向研磨，研磨至均一且无气泡，此时呈胶状物，色泽洁白为佳。为防止由于搅拌带入气泡，可加入少量的乙醇,（3）铺板,倾注法：将匀浆立即倾入玻璃板上，倾斜薄层板，使吸附剂流至薄层板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜薄层板，使吸附剂回流然后是另外两个方向，重复操作，然后再稍加振动，使载板薄层均匀。,（4）晾干：自然晾干（5）活化：将晾干的板子放在烘箱中于105110活化0.51h，取出，放入干燥器中，备用。一般硅胶活化1h，而氧化铝活化30min即可,.,30,二、点样,要求斑点集中，点样量适中溶解固体样品的溶剂有挥发性，避免用水，否则易使斑点扩散；液体样品可直接点样。点样位置距薄层底边约1.5-2.5cm处，采用多次点加法。点样量应适中，原点直径宜为2-3mm。点样工具：玻璃毛细管，微量注射器，自动点样器。在同一薄板上，多个样品点的距离应大于1.5cm。点样不能距边太近，避免边缘效应。点样时间要短，避免薄板暴露在空气中时间过长而吸水降低活性。,.,32,边缘效应,定义：同一薄板的同一物质，在色谱展开过程中，靠边缘处斑点的Rf值与中心区域斑点的Rf值不等，此种现象称为边缘效应。产生原因：色谱缸中混合展开剂蒸汽未达到饱和，溶剂在硅胶板的边缘极性较大。,.,33,边缘效应,减少边缘效应的办法色谱缸密闭性要好，展开剂应先饱和后再展开；点样尽量靠中心，不要离边缘太近。,.,34,点样,三、展开,饱和：将薄层板样点一端放入缸内，注意切勿使样点浸入展开剂中，密闭,先让缸内溶剂蒸气饱和510min.开始展开：展开剂前沿上升到样点上方810cm时取出薄层板，放平，铅笔标明溶剂前沿位置,展开,四、显色（斑点定位）,1.直接观察:有色斑点2.有些组分在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组分斑点描绘出来。3.化学显色:常用的方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等,TLC的特点,welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience,1.分离效能强；2.灵敏度高；3.展开快；可以同时展开多个样品；4.预处理简单；5.设备简单，操作方便；6.上样量比较大，可点成条状。,11-3定性和定量方法,一、定性方法测出斑点的R