细菌感染的检查方法与法治原则.ppt

支原体、衣原体、立克次体,主讲老师：江振友,支原体属和脲原体属,支原体（Mycoplasma）,1.能在人工培养基中生长2.能独立生活3.最小原核细胞型微生物4.无细胞壁5.二分裂繁殖6.多形态性,“油煎蛋样”菌落,分类,柔膜体纲(Mollicutes)支原体目(MycoPlasmatales)下分3个科：支原体科（MycoPlasmataceae）；2个属:支原体（Mycoplasma）脲原体（Ureaplasma）无胆甾原体科（Acholeplasma-taceae），生长时不需要外源性胆固醇；螺原体科（Spiroplasmataceae），生长至一定阶段呈螺形。,人体分离:20种，其中8种是致病或条件致病菌:肺炎支原体(M.pneumoniae,Mpn)生殖支原体(M.geuitalium,Mg)人型支原体(M.hominis,Mh)发酵支原体(M.fermentants,Mf)穿透支原体(M.penetrans,Mpe)梨支原体(M.pirum,Mpi)关节炎支原体(M.arthritidis,Mart)解脲脲原体(U.urealyticum,Uu),支原体与细菌L型比较,肺炎支原体,形态与结构大小:可通过滤器,光镜下可观察细胞壁:无形态:球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等细胞膜:三层:1.蛋白质2.脂质(胆固醇较多)3.蛋白质染色:姬姆萨染色法:淡紫色或蓝色核酸:二种(DNA和RNA),生长繁殖,繁殖方式:二分裂方式球体延伸、分节断裂、出芽、分枝繁殖周期:3小时营养要求:较高,含动物血清、酵母浸液酸碱度:pH7.880气体环境:5CO2或5CO2与95N2温度与时间:37,3d10d菌落特征:“油煎蛋”状菌落,表252支原体与脲原体的某些生物学特性,抗原构造,主要抗原成分:1.蛋白质P1蛋白抗原:表面抗原致病:粘附2.脂质中的糖脂抗体:产生补体结合抗体生长抑制抗体代谢抑制抗体,抵抗力,理化因素:比细菌敏感(因无细胞壁)热:弱,50经30min死亡20可长期保存耐碱酸和有机溶剂:较敏感(消毒剂、清洁剂)四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素:敏感青霉素:不敏感,致病性,外源性感染上呼吸道感染:感冒、咽炎、气管炎支原体性肺炎（Mycoplasmalpneumonia）(原发性非典型肺炎)（primaryatypicalpneumonia）临床表现和胸部X线:肺炎链球菌引起的典型肺炎不同类似病毒性肺炎,世界各地,密集人群,儿童及青少年多见秋冬季发病率高,每隔35年出现一次流行飞沫传播潜伏期2W3W,感染起病缓慢临床主要症状:发热（约39）、头痛、持续性顽固咳嗽、胸痛等。病人带菌、排菌状态可持续6W8W肺外合并症（神经系统、消化系统及心脏等）发病率高，严重者可致死致病性:粘附是先决条件也和超敏反应有关(共同抗原),免疫性,抗体：多种(CF抗体、生长抑制抗体、杀支原体抗体等)呼吸道sIgA:有一定作用非特异冷凝集素:1.和自身免疫有关2.患者阳性率为50，常用于辅助诊断。,微生物学检查法,病原分离特异核酸的检测血清学诊断抗原检测冷凝集试验,病原分离,标本：咽拭子或痰液培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液）SP-4培养基（提高分离率3040）气体环境：510CO2温度与时间：37，l2W可疑菌落：1.糖发酵2.溶血性3.血细胞吸附4.特异抗血清生长抑制试验等,特异核酸的检测,（1）聚合酶链反应(PCR)：优点：特异性好敏感性高快速、简便靶基因：16SRNA基因P1蛋白基因方法：套式PCR(nPCR)复合PCR限制性片段长度多态性分析(RFLP)随机引物PCR(RAPD)（2）基因探针根据碱基严格互补配对的特性特异性强，敏感性不如PCR技术,血清学诊断,（1）补体结合试验（CFT）：双份抗体效价升高4倍以上诊断（2）间接血凝试验（IHA）：测抗体,23周高峰（3）酶联免疫吸附试验(ELISA)：测IgM、IgG和IgA敏感性高（4）间接免疫荧光试验：检测IgM、IgG特异性较强,抗原检测,方法1:间接法或直接法抗体:荧光标记多克隆抗体或单克隆抗体检测标本:呼吸道分泌物中抗原86%可阳性方法2:双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测标本:呼吸道分泌物中抗原可检出105CFU/ml方法3:酶联免疫吸附试验捕获法抗体:抗P1单克隆抗体检测标本:P1蛋白可检出104CFU/ml特异性强,3小时即可,冷凝集试验,辅助诊断非典型肺炎针对红细胞膜抗原冷凝集素属IgM5d10d出现，2W3W高峰辅助诊断效价:64128倍以上双份效价升高4倍以上特异性和敏感性较低,防冶,药物:四环素类(近年来耐药性增加)大环内酯类:首选(红霉素、克拉霉素、阿奇霉素)喹诺酮类疫苗:减毒活疫苗基因工程疫苗,其它支原体,寄生部位:鼻咽腔及泌尿生殖道粘膜属于正常菌群,引起条件性感染口腔支原体:慢性呼吸道感染唾液支原体:齿槽溢脓生殖支原体:生殖道、呼吸道和关节腔的炎症,流产、早产和新生儿肺炎发酵支原体:类风湿性关节炎AIDS相关(分离率明显升高)人型支原体:渗出性咽炎、非淋菌性尿道炎(nongonococcalurithritis,NGU),卵巢脓肿、产褥败血症,脲原体属(Ureaplasma),从支原体分出的独立的新属正常菌群:绝大多数有致病性:解脲脲原体（U.urealyticum,Uu)1954年从NGU患者的病灶处分离类似肺炎支原体能水解尿素,生物学性状,形态:圆形或球杆状染色:革兰染色阴性温度和酸碱度:37,pH6.0菌落:很小(15m60m,放大200倍),称T株（Tinycolonystrain）敏感性:敏感:四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、0.05%醋酸铊、125g/ml5-碘-2脱氧尿苷不敏感:青霉素生化特性:水解尿素产氨,致病性,存在:人和动物的口腔、呼吸道、泌尿生殖道血清型:解脲脲原体(Uu)有14个血清型传播途径:性接触传播、母婴传播所致疾病(STD)泌尿生殖道感染:NGU、盆腔感染、宫颈炎、阴道炎、输卵管炎、慢性前列腺炎、附睾炎、男女不孕症、反复流产、早产、死胎新生儿疾病:呼吸道病变、肺炎、脑膜炎,引起男性不孕的原因：Uu吸附于精子表面，使其运动受阻，并蔽盖了精子识别卵细胞的部位Uu产生神经氨酸样物质，干扰精子与卵细胞结合。Uu与精子膜有共同抗原，从而产生抗精子抗体,立克次体属和巴尔通体属,立克次体属,立克次体特征：比细菌小,能通过滤器,光镜可见以节肢动物为传播媒介,有储存宿主专性细胞内寄生(胞浆内),原核细胞微生物二分裂繁殖有两种核酸(DNA和RNA)，酶系统不完整多数人畜共患对抗生素敏感所致疾病:发热出疹性疾病对人致病的:立克次体属东方次体属埃立克体属柯克斯体属,立克次体分类及其致病情况见表26-1,生物学性状,大小:(0.3m-0.6m)(0.8m-2.0m)形态:类似球杆菌,多形性(球形、哑铃形、长杆状或丝状等)染色:Giemsa染色法:紫色或蓝色马氏染色法(Macchiavellostain):红色排列:散在于细胞浆中、核旁成堆(斑点热立克次体在胞浆或核内)培养:专性细胞内(活细胞内)寄生培养方法:鸡胚卵黄囊内接种组织细胞培养动物接种,抵抗力:热、消毒剂:较弱(56,数分钟,0.5%石碳酸、0.5%来苏,75%酒精中数分钟)抗生素:敏感:氯霉素和四环素不敏感:磺胺类低温、干燥:较强(-20或冷冻干燥半年以上)抗原构造：群特异性抗原,种特异性外膜抗原外斐反应(Weil-Felixreaction):斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些X菌株有共同的耐热多糖类抗原。利用这些变形杆菌菌株代替立克次体抗原，进行定量非特异凝集反应（交叉凝集反应），以检测人或动物血清中的相应抗体。协助诊断斑疹伤寒,恙虫病,滴度超过1:160有意义.,致病性,传播方式：普氏立克次体：头虱和体虱（肠上皮细胞）人是唯一宿主斑点热立克次体：第一宿主是蜱（唾液腺）第二宿主是啮齿类动物,致病机理过程:侵入-小血管内皮细胞中繁殖-破坏细胞-细胞肿胀、浸润、堵塞血管腔形成血栓-皮肤:斑疹-实质器官:相应临床表现毒性物质:内毒素磷脂酶A,所致疾病1.流行性斑疹伤寒(epidimictyphus)不属于人畜共患病病原体:普氏立克次体(R.prowazekii)媒介:人虱宿主:人季节:冬春季症状:521d潜伏期-高热、头痛、肌肉痛等-45d:皮疹-神经、心血管和其他器官病后免疫:持久,与地方性斑疹伤寒有交叉免疫,2.地方性斑疹伤寒(endemictyphus)(鼠型斑疹伤寒),属于人畜共患病病原体:斑疹伤寒立克次体(R.typhus)宿主:鼠为天然贮存宿主传播方式:鼠蚤或虱-鼠间-人-人虱-人疾病:较轻，缓慢，持续时间短，很少侵害中枢神经系统病后免疫:持久，并与流行性斑疹伤寒有交叉免疫,3.恙虫病(scrubtyphus),病原体:恙虫病东方次体(O.tsutsuganushi)传播:寄生于恙螨体内，可经卵传代。人若进入恙螨的孳生地，可能受感染(亦称“丛林热”)症状:1014d潜伏期-突然高热，被叮咬处:发红,丘疹,水疱,溃疡，周围红晕，上有黑色痂皮，称为焦痂(特征)。附近的淋巴结肿大，皮疹。治疗拖延肺炎、脑炎、DIC。,微生物学检查法,(一)血清学诊断1.外斐反应(非特异性)诊断:立克次体和东方次体效价在1：160以上，或病程中效价增长2.补体结合(CF)反应(特异性)所用抗原:可溶性抗原(群特异抗原)洗涤过的颗粒抗原(种特异抗原)诊断:斑疹伤寒群、斑点热群、恙虫病、Q热(二)立克次体分离鉴定动物:小鼠(恙虫病)雄性豚鼠(斑疹伤寒),防治原则,1.灭虱、灭蚤、灭鼠2.改进环境、个人卫生3.死疫苗4.广谱抗生素有效,巴尔通体属(Bartonella),特点:1.形态结构与立克次体相似2.可以人工培养而非严格细胞内寄生模式种:杆状巴尔通体(B.bacilliformis),生物学性状,形状:1.血涂片:球形、椭圆形或弓形杆状；单个或成群,偶见链状2.组织中:内皮细胞原浆中,单体或圆形团块，G-，常用Giemsa或镀银染色法。3.培养中:单鞭毛培养条件:1.需氧2.常用10%兔血清和0.5%血红蛋白的半固体培养基3.可在无细胞培养基中生长4.28-37,10d以上,致病性,自然宿主:人媒介:节肢动物（疣肿白蛉）所致疾病:1.奥罗亚热-秘鲁疣(Oroyafever-verrucaperuviana)病原体:杆状巴尔通体阶段:第1阶段:发热，贫血(奥罗亚热)第2阶段:以血管损害为基础的肉芽肿(秘鲁疣)诊断方法:1.血涂片2.用半固体培养基分离培养,2.细菌性血管瘤(bacillaryangiomatosis)病原体:亨氏巴尔通体(B.henselae)罗卡利马巴尔通体(B.rochalimaea)易感人群:免疫力低下（尤其AIDS）病变组织学特征:毛细血管增生等(血管瘤)培养基:巧克力色琼脂含5%兔血的心脑浸汁琼脂3.猫抓病(cat-scratchdisease)(猫抓热)病原体:亨氏巴尔通体症状:猫抓伤后2w,发热,淋巴结肿大，破溃排脓，亦可头痛、咽痛或出现结膜炎特点:自限性疾病检查法:病变组织切片镀银染色免疫荧光染色,衣原体属,衣原体（Chamydia）,特点:1.能通过细菌滤器,光镜下可观察2.有独特发育周期3.不能人工培养,不能独立生活,为专性细胞内寄生4.原核细胞型和病毒的区别:有细胞结构细胞壁类似G-两种类型的核酸(DNA和RNA)有核糖体以二分裂方式繁殖,有独特的发育周期对多种抗生素敏感(四环素和红霉素),分类,存在:人类、哺乳动物及禽类体内分类依据:1.抗原构造2.包涵体糖原的有无3.对磺胺类药物的敏感性分类(4个种):1.沙眼衣原体（C.trachomatis）（人）亚种（1）沙眼生物变种（Biovartrachoma）14个血清型（2）性病淋巴肉芽肿变种(Biovarlymphogranunlomavenereum,LGV)4个血清型（3）鼠生物变种（Biovarmouse）2.鹦鹉热衣原体（C.psittaci）（人）3.肺炎衣原体（C.pneumonia）（人）4.家畜衣原体(C.pecorum),表27-13种致病性衣原体的比较,生物学性状,生活周期包括原体和始体两阶段光镜下：两种形态：原体（elementarybody）始体（initialbody）原体（elementarybody）1.形状：球形，0.20.4m电镜下：核质致密和少量核糖体细胞壁坚韧存在于细胞外2.功能:（1）有很强的感染性（吸附）（2）发育成始体：吸附-被吞噬-胞膜在原体周围形成空泡-原体在空泡中增大-始体,始体（initialbody）1.形状：球形，较原体大(0.81.5m)，无致密核质，有纤细网状结构-也称为网状体（reticulatebody）2.发育周期:原体-始体-空泡内-二分裂-子代原体-包涵体（inclusionbody）-原体成熟-释放-再感染(2448h)(无细胞外周期)3.是繁殖型，无感染性染色：1.Macchiavello染色法或Giemsa染色法原体：红色或紫色始体：深蓝色2.碘染色法：沙眼衣原体原体：褐色（因包涵体含糖原）,培养,方法：1.鸡胚卵黄囊2.各种传代细胞(Hela细胞,McCog细胞)3.动物实验：某些可感染小鼠培养时间：4872h后观察：包涵体原体颗粒始体颗粒,抗原构造,1属特异性抗原成分：脂多糖方法：CF试验和IF法2种特异性抗原成分：外膜蛋白（MOMP）方法：IF法和中和试验(NT)3血清型特异性抗原成分：MOMP方法：单克隆抗体微量免疫试验血清型:(1)沙眼生物变种:14个（A-K、Ba、Da,Ia）(2)LGV:4个(L1、L2、L2a和L3),抵抗力,热:敏感，6010min或3748h寒冷：-50数年化学消毒剂：0.5%石炭酸，24h75%乙醇，半分钟抗生素：利福平、四环素、红霉素、磺胺敏感青霉素:不敏感,致病机理,致病物质：内毒素相似的物质致病机理：1.抑制细胞代谢，使细胞溶解2.引起超敏反应3.形成肉芽肿传播途径：眼眼眼手眼性接触传播产道感染呼吸道感染(不通过节肢动物传播),所致疾病,1.沙眼（trach