生物制品及其质量控制要点

1、生物制品及其质量控制，中国药品生物制品检定所，2、主要内容，1、生物制品定义2、生物制品种类3、生物制品的基本属性和特征4、生物制品的管理5、生物制品GMP现场检测点，3、1、生物制品定义生物制品(BiologicalProducts )，一般或基因工程、细胞工程、 应用蛋白质工程、发酵工程等生物技术得到的微生物、细胞以及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制成，是用于疾病预防、治疗和诊断的药品。 4、2、生物制品分类根据生物制品的组成和性质可分为：疫苗(Vaccines )抗毒素和免疫血清(AntitoxinandAntisera )的血液制品(BloodProducts ) 细胞因子和重组DNA产品(cytokinesandecombinantdnaproducts )诊断产品(diagnosticreasons )其他产品，5、细菌类疫苗是由细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活性疫苗： BCG苗、人用炭疽杆菌、 人用鼠疫疫苗等灭活疫苗：霍乱菌体疫苗、钩端螺旋体疫苗等亚单位疫苗：脑膜炎球菌多糖类疫苗、伤寒Vi多糖类疫苗等重组DNA疫苗：重组疟疾疫苗、重组幽门螺旋杆菌疫苗等6、病毒立克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次克次狂犬病疫苗等亚单位疫苗：乙肝疫苗等重组DNA疫苗：乙肝疫苗等重组DNA疫苗，组合7、疫苗，由2种以上的疫苗抗原原液制备的多种具有免疫原性的疫苗。 例如吸附百白破联合疫苗麻风病腮连疫苗，8、抗毒素和免疫血清，由特定抗原免疫动物血清制备主要产品：白喉抗毒素破伤风抗毒素抗狂犬病血清等9、血液制品，由从健康人血浆或特异免疫人血浆中分离、纯化或重组技术制备的血浆蛋白成分或血细胞成分制品主要产品：人血白蛋白人免疫球蛋白人凝血因子等10种细胞因子和重组DNA产品，健康人血球增值、分离、纯化或重组技术制备的多肽类或蛋白类制剂。 主要产品：干扰素(IFN )干扰素(IL )集落刺激因子(CSF )红细胞生成素(EPO )等11，诊断产品，体外诊断产品由特定抗原、抗体或生物物质制成，肠伤寒、副伤寒等细菌诊断菌液，沙门氏菌属诊断血清，HBsAg诊断试剂盒等。 体内诊断产品抗原制成的体内诊断用试剂，例如BCG-PPD、顺式试剂毒素、标记单克隆抗体等。 12、其他产品均以相关生物材料或特定方法制备，如上述5种以外的生物制品，如过敏原、微生态制剂、重组DNA制品、基因治疗制品、单克隆抗体、某细胞治疗制剂等。 13、生物制品按用途分类，预防类生物制品疫苗、类毒素、被动免疫制剂诊断类生物制品免疫学诊断试剂、基因诊断试剂、生化试剂治疗类生物制品血液制剂、细胞因子制剂、酶和激素、特异抗体、非特异免疫治疗制剂、基因和细胞治疗制品等14、预防类生物制品、 解毒疫苗与灭活疫苗的比较，15，3，生物制品的基本属性和特点(1)，其起始材料均为生物活性物质生物制品的生产加工全过程为生物学过程，无菌操作过程部分生物制品的生产过程为有毒或有菌过程的生物制品多为蛋白质或多肽类， 分子量大，分子结构复杂，不稳定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破坏。、16、3、生物产品的基本属性和特点(二)，其质量控制和质量检定采用生物学分析方法，其有效价格和生物活性检定是其变异性生物产品的原材料、中间品、成品、运输、储存，甚至使用保存在“冷链”系统中的特别是预防产品的使用对象不是患者， 作为健康人群的生物产品质量控制在实施生产全过程监控的生产现场检测中，必须充分考虑这些特点。17、4、生物产品管理、 生物产品国家管理的6个基本功能1 .完整疫苗和生物产品审查程序和审查标准的法规文件2 .审查结论以实验和临床试验数据为基础3 .国家质量管理当局对疫苗和生物产品的出厂销售实施国家批发制度4 .进行疫苗和生物产品质量评价的法定实验检定机构和实验实验需要实施的5 .对生物产品生产企业实施GMP定期检查的6 .生物产品的有效性和副作用发售后检查。 18、生物产品在国家批发药品管理法实施办法中有规定，国家对规定的生物产品实行国家批发制度。 国家批发国家药品监督管理部门批准国家药品检定机构，对规定的生物产品在发货前或进口时按批次进行审查和发行，审查或检定不合格的不允许销售或进口。19、生物产品国家批发分为三种类型：只审查某产品每批批记录汇总，符合要求发行批发证明书二、审查批记录汇总，检验和审定部分批产品，审定，符合要求发行批发证明书三、审批记录摘要和批审，审批和批审批符合要求签发批发证明书。 20，图-1细菌疫苗的过程和环境区域区分图，10000级，100000级，21，毒种筛选#， 种子批次的#确立和检定毒种接种#培养细胞，原液合并，半成品*配置，病毒灭活，病毒收获过滤#，细胞培养的扩大，病毒原液的保存，分注*，包装，检定，图-2病毒疫苗的过程和环境区域划分的形象，原代细胞的制备和传代细胞的复活， 减毒活性疫苗、10000级、100000级、22、细菌和病毒类疫苗的质量控制要点1 .所有原辅材料均相当于中国药典或中国生物制品主要原辅料质量标准2.采用强毒菌株(鼠疫、霍乱、炭疽等)、芽胞菌和强毒病毒株，在专业生产过程中， 专用生产设备和隔离实施，作业人员需要安全防护设施3 .使用生产的菌株或病毒株，原始种子批，主代种子批， 必须建立生产种子批次三级种子批次系统的病毒疫苗生产用细胞也必须构建上述三级细胞批次系统4 .在疫苗及疫苗原液、中间品合并、分离、纯化等各加工工序后进行无菌试验和鉴别试验.23， 细菌和病毒类疫苗质量控制要点5 .细菌类和病毒类灭活疫苗在加入灭活剂后，必须进行灭活菌和灭活试验，确保完全灭活6 .原材料、半成品及成品按现行中国生物制品规程相关标准检定7 .产品安全、 用于有效价格或免疫力试验等项目的实验动物应符合清洁水平8 .从起始材料到使用，全过程均需无菌操作，产品应在28保存9 .生物产品的生产用水均为注射用水。. 24、血浆合并、病毒灭活、精洗、除菌除热原、低温乙醇法、超滤浓缩、入库、外包材料、血浆、内含材料、图-3血液制品工艺与环境区域划分图像、除菌过滤、分包、粗洗、10000级、100000级、25、 血液产品质量控制要点1 .经生产用具、严格清洗、除热原处理、除菌处理2 .原料血浆通过乙型肝炎、丙型肝炎、HIV、梅毒、ABO定型诊断试剂检测，保存在-20以下3 .生产技术在低温乙醇法分部提取各组的过程中除去病毒/需要灭活工艺步骤4 .原液、半成品、成品符合当前中国生物制品规程相应标准5 .所用血源检测和成品检测的乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒等检测试剂均为国家批量检测试剂。26，细胞复苏，扩大培养，大罐培养，粗纯，扩大培养，发酵，粗纯，接种，除菌除热原，精洗，粗洗，内包材料，菌种，细胞种子，原液，除菌过滤，除菌过滤，*调制及除菌过滤，*分注，包装，入库，外包装，包装，入库，外包装， 图-4重组产品的工艺流程和环境区域划分的形象原核表达，真核表达，10000级，100000级，27， 重组DNA产品质量控制要点1 .生产工程或工程细胞株建立原始种子批、原始种子批、生产种子批系统，定期进行质粒稳定性检测2 .发酵用培养基不含抗生素； 生产用细胞培养液不含血清和抗生素3 .在发酵培养过程中，应根据工艺要求控制培养温度、pH、溶解氧、辅助材料和培养时间4 .根据其工艺要求，通过初步纯化和高度纯化达到规定的质量要求5 .重组产品原液， 应进行蛋白质含量、比活性、纯度、有效价、SDS-PAGE法、高效液相色谱法、分子量、外源性DNA残留量、宿主蛋白残留量、等电点、紫外光谱肽图(至少每年测定一次)、n末端氨基酸序列(至少每年测定一次).28、 重组DNA产品的质量控制要点6 .半成品和成品应按现有中国生物制品规程相关标准检定7 .工程菌株以菌落形态、克染色、抗生素性、电镜检查、生化反应、表达量、 应进行质粒酶切图谱等检测8 .工程细胞应进行外源因子(细菌、真菌、支原体、病毒)检测、致病性实验、细胞鉴别试验、表达量测定等9 .重组DNA产品生产，应用于其生产的工程株和工程设计.29，菌种筛选#，组装，图-5酶联免疫诊断试剂工艺和环境区域划分的示意图，抗原包复微丸，酶联抗体，其他成分，阳性对照*，100000级，隔离区，30，酶联免疫诊断试剂质量控制点1 .使用抗原和抗体的纯度，带状， 有效价格和稳定性等符合当前国家标准，来源必须固定2 .辣根过氧化物酶R2不应低于3.0.微板CV(% )在10%以下4 .选择最佳浓度进行抗原或抗体包复，选择最佳浓度进行酶标5 .酶标后抗体加入保护剂、31、菌种筛选#、组装、图-6PCR诊断试剂工艺与环境区划图、PCR成分1、PCR成分2、PCR成分3、阳性对照*、100000级、隔离区、32、 PCR诊断试剂质量控制要点1 2.PCR试剂生产区和检定区严格分为3.PCR引物设计合理，引物合成需要固定场所和专用设备纯度达到当前国家标准4.DNA聚合酶的活性和稳定性达到当前国家标准，有一定来源的5.PCR检测方法确定33、5、生物产品GMP检测要点，保护环境和操作者免受交叉污染，严格划分，尽量使独立空调局部负压，工厂完全消毒和清扫场所严格动物使用和动物管理环境温度，34、1 .强毒和弱毒“强毒”是指生物产品生产和检定用细菌株和病毒株，其致病力强， 是指传染力强、感染概率高、感染后症状重、危及生命健康并引起传染病流行的细菌株和病毒株。 “弱毒”是指生物产品的生产和检定用细菌株和病毒株，是指经天然或人工改造方法去除或关闭其毒性因子，减弱其致病力，一般不会感染或发病的细菌株和病毒株。 强毒株和弱毒株不能混杂，其生产和检定工作场所要严格分开，有专用设备。 生物产品GMP认证检测要点，35，2 .病毒和活的“活毒”，在生产活疫苗的第一阶段，生产活疫苗时，大量培养生产用细菌和病毒株，大量生产过程和生产场所，生产设备，器材中的活细菌和活病毒“死毒”制造灭活疫苗时，在第一阶段生产出大量活菌和病毒后，在第二阶段向生物中加入一定量的甲醛和灭活剂，杀死所有细菌和病毒称为“死毒”。 “活毒”和“死毒”的生产场所、生产设备和器材要严格分开。36，3 .“消毒前”和“消毒后”“消毒前”是破伤风梭菌、白喉菌繁殖培养时产生大量破伤风毒素和白喉毒素，人体有致病性的阶段是“消毒前”。 “脱毒后”是指在毒素中加入一定量的甲醛和适当的脱毒剂，去除毒素的毒性，不具有致病性，保持抗原性和免疫原性，称为“脱毒后”。 “脱毒前”和“脱毒后”的生产场所、生产设备和器材必须严格分离。37，4 .血液制品，抗血清，人和动物组织制成的产品，其生产所使用的原材料是人血浆，动物免疫血清，人和动物器官，组织和组织液等，含有很多人和动物的不同蛋白质和细胞活性物质，具有很强的致敏原物质，经过相应的处理和加工，会引起人体过敏和血清病。 因此，血液制品、抗血清、人和动物组织生产制品时，需要专用的生产场所、生产设备和器材，不得与其他生物制品混合。 38，5 .芽孢杆菌产品是含炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌等芽孢杆菌产品，芽孢杆菌是微生物对外周环境抵抗力最强的生命单位。 芽孢杆菌在自然界活了几十年和一百年，在100下能耐2小时以上，在70%的酒精下活了20年，低温和干燥对此毫无帮助。 芽孢杆菌产品的生产场所、生产设备和器材必须专用，与其他产品的生产严格分开。39、6 .卡介苗和结核菌制品生产场所应严格分开，其生产设备、器材、生产用菌种应专用，不得混杂。 1930年德国Lubeck地区，251名婴儿误用结核菌液，不是减毒的BCG苗，而是72名婴儿死亡，病死率为28.68%，142名婴儿感染结核病，感染率为56.5%，被称为“Lubeck疫苗接种事故”。40、7 .卫生部于1985年在卫生药第11号文献中国医学微生物菌毒种保藏管理办法号中，将一种、两种菌种和毒种规定为“强毒微生物”。 一种：鼠疫菌、霍乱菌、天花病毒(消灭)、黄热病病毒、马脑炎病毒、Lassa病毒、Mstburg病毒、Ebola病毒、猴疱疹病毒等。 两种：布氏杆菌、炭疽杆菌、肉毒杆菌、麻风病菌、结核分枝杆菌等。 狂犬病(街毒)、流行性出血热病毒、登革热病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、艾滋病病毒(当时未列入名单)等。、41、8 .强毒操作区空气净化特殊要求应设置气门和缓冲区远离其他地区，形成一个地区的通过两个链门， 进入更衣的在生物安全盘内操作的操作区具有高压灭菌设备，相对于操作部的外部保持相对的负压，缓冲相对的压力-30Pa-40Pa、相对的压力-15Pa-20