蔬菜农药残留的快速检测方法原理及检验标准

。蔬菜农药残留快速检测方法的原理及检验标准1、当前蔬菜中的农药残留1.1。农药是一把“双刃剑”，在促进农业生产中发挥着极其重要的作用。然而，由于农药固有的化学性质和农药使用不当，农产品中农药残留已经严重超标，严重危害了广大人民群众的健康。1.2。在中国的农药中，70%是有机磷农药，而在中国生产和使用的有机磷农药中，70%是剧毒和高毒的，其中大部分被禁止用于蔬菜作物。2、农药中毒事件经常被报道，调查原因2.1、农产品未按照规定的剂量、频率、方法或安全间隔施用，或不准在蔬菜上施用剧毒、剧毒农药；2.2。目前，农药残留的标准测定需要通过有机溶剂萃取、纯化和大型分析仪器来进行。监管不到位，因为廉价蔬菜无法在任何时间、任何地点或快速被发现。3、农药分类：3.1。矿物源农药3.1.1。有效成分来自矿物无机物和石油杀虫剂。3.1.2、代表硫酸铜、硫磺、硫磺混合物、磷化铝、磷化锌和石油乳液等。3.2、生物农药3.2.1包括植物源农药、动物源农药和微生物源农药。3.2.2。植物种类包括植物毒素、植物内源激素、植物衍生的昆虫激素、拒食剂、引诱剂、驱虫剂、灭菌剂、增效剂、植物防御素、易于培养的生物量等。3.2.3。从动物资源开发的杀虫剂包括动物毒素、昆虫激素、昆虫信息素和天敌。3.3。按行动方式分类3.3.1、胃毒素农药(敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、马拉硫磷)3.3.2。接触农药(对硫磷、敌敌畏、甲胺磷、马拉硫磷)3.3.3、系统杀虫剂(乐果、甲胺磷、氧化乐果、久效磷)3.3.4熏蒸杀虫剂(甲基溴、磷化铝、敌敌畏)3.3.5、特定农药(乙烯利、产毒素素、除虫脲)4.根据化学结构，目前使用的农药大致可分为以下几类：有机氯、有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、杂环化合物、其他(苯氧羧酸、脲化合物)等。A.有机磷敌敌畏、甲拌磷、乐果、对氧磷、对硫磷、喹硫磷、对硫磷+、敌百虫、氧化乐果、磷酰胺、甲基嘧啶、马拉硫磷、辛硫磷、亚氨基磷、甲胺磷、地安农、甲基毒死蜱、毒死蜱、倍半硫酸、扑草净、乙酰甲胺磷、磷酰胺、甲基对硫磷、杀螟松、水胺硫磷、水胺硫磷等。B.有机氯化合物Alpha-666、beta-666、gamma-666、delta-666、op -DDE、pp-DDE、op-DDD、pp-DDT、op-DDT、异菌脲、五氯硝基苯、林丹、长春唑胺、三氯杀螨醇、功夫、亚硝胺、百菌清、三唑酮、氯菊酯、氯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等。C.氨基甲酸酯涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威、叶蝉粉、灭多威、灭多威等。D.昆虫病原细菌的酯类联苯菊酯、二氧甲氰菊酯、功夫除虫菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、戊酸酯、甲氰菊酯、氟氯氰菊酯、呋喃西林、呋喃西林、地塞米松等。5.最大残留限量标准最大残留限量(MRL)农产品和畜产品中农药残留的法定最高允许浓度，也称为最大残留限量，以每千克农产品和畜产品中农药残留的毫克(毫克/千克)表示。目的：控制食品中过量农药残留，确保消费者安全，对超标产品采取措施，即禁止食用。实施和指导合理用药，监测农产品超标，表明未按照规定用药。为了减少国际贸易争端，每个国家都有自己的MRL。食品中农药最大残留限量标准A.英国2763-2014规定了387种农药的最大残留限量。国家标准作为加强农药管理的措施。其中，针对农药残留超标和易发生的问题，新标准重点提高了蔬菜、水果、茶叶等鲜活农产品的限量标准。水果农药残留限量增加473项，蔬菜(包括食用菌)农药最高残留限量增加431项。6.禁止和限制高毒农药管理办法6.1农业部、工业和信息化部、环境保护部、国家工商行政管理局和国家质量监督检验检疫总局于2011年6月15日发布第1586号公告，决定进一步禁止和限制使用剧毒农药。6.2。停止接受22种农药的新的田间试验申请、注册申请和生产许可证申请，包括去氧肾上腺素、倍硫磷、甲基硫环己基氨基甲酸酯、磷化钙、磷化镁、磷化锌、硫磷、香豆磷、治蛾磷、特丁虫、扑草净、甲拌磷、甲基异氟醚、克百威、灭多威、灭多威、涕灭威、磷化铝、氧乐果、水胺硫磷、溴甲烷、硫丹等。停止批准含有上述农药的新登记证和农药生产许可证(生产批准文件)。6.3。撤销早期柑橘树中的氧化乐果和水胺硫磷、柑橘树、苹果树、茶树和十字花科蔬菜中的灭多威、柑橘树和黄瓜中的噻吩、苹果树和茶树中的硫丹以及草莓和黄瓜中的甲基溴的注册。6.4。本公告发布前生产的产品标签不能再更改，但不能继续用于已被取消注册的作物。6.5。从2011年10月31日起，去氧肾上腺素、辛硫磷、甲基硫氰菊酯、磷化钙、磷化镁、磷化锌、硫代磷酸酯、蝇毒磷、甲胺磷和特丁磷等10种农药的注册证书和生产许可证(生产批准文件)将被吊销(收回)并停止生产。6.6。从2013年10月31日起，停止销售和使用。鉴于上述情况，开发有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测方法，加强农药残留的快速检测十分必要。7.农药残留的检测方法主要有两种：7.1。色谱检测方法：色谱检测法用于农药残留的定量分析，可为农药残留执法提供依据。色谱(包括气相色谱、液相色谱、气相色谱-质谱等。)。优点：灵敏度高、准确、定性定量；缺点：成本高，操作复杂，时间长。7.2、快速测试方法：快速检测方法只能用于农药残留的定性分析，易于在基层推广。它是我国控制剧毒农药残留的有效方法，也是我国和我省使用最广泛的农药残留快速检测方法。一、测速仪器方法的主要优点：1.该方法具有快速方便、预处理简单、成本低等优点，适用于现场定性测定，尤其适用于蔬菜生产基地、批发市场和农产品检测部门的快速检测工作。2.该方法可对农药残留蔬菜进行粗略筛选，并对部分农药残留高的蔬菜进行场外控制，以避免农药残留引起的中毒。b、测速仪器方法的主要缺点：1.酶试剂容易失活，导致反应不稳定，检测结果误差大，重复性差。实际应用中的确认率约为60%70%。2.有一个检测盲区。只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，但不能检测有机氯、除虫菊酯和其他高毒性农药。3.不适用于检测14种易假阳性的农产品，如葱蒜、芫荽、韭菜、西红柿、胡萝卜、茭白、香菇、辣椒等。8.速度计有两种检测方法：1、快速测试卡法(纸法)2.酶抑制率法(分光光度法)9.两种快速检测方法的技术原理9.1。根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶活性的原理设计9.3。如果蔬菜含有能抑制乙酰胆碱活性的有机磷和氨基甲酸酯类农药，这种酶不能水解，因此没有颜色反应。9.4。向溶液中加入乙酰胆碱酯酶和显色剂，以判断是否存在有机磷和氨基甲酸酯类农药残留。10、快速测试卡法(纸法)1.试剂1.1、固有胆碱酯酶和醋酸吲哚酚试剂纸(快速检测卡)。将1.2和pH7.5的缓冲溶液：15.0克磷酸氢二钠和1.59克无水磷酸二氢钾分别用500毫升蒸馏水溶解。2.工具2.1。恒温箱有条件地装有37和2的恒温装置。3.分析步骤3.1、总体确定方法3.1.1。选择有代表性的蔬菜样品，擦去表面的泥土，切成约1cm的块，将5g放入带盖的瓶中，加入10毫升缓冲液，摇匀50次，静置2分钟以上。3.1.2。拿一张快速测试卡，用白色药片蘸取提取物，放置10分钟以上进行预反应。条件允许时，将其放入37的恒温装置中10分钟。预反应后的片剂表面必须保持湿润。3.1.3。将速度达3分钟的卡片对折，用手捏3分钟或使用恒温装置3分钟，使红色药片和白色药片重叠反应。3.1.4、每批测定应设置空白对照卡的缓冲区。3.2。表面测定(粗筛法)3.2.1擦去蔬菜表面的泥土，在蔬菜表面滴23滴缓冲液，在滴点处用另一块蔬菜轻轻擦拭。3.2.2拿一张快速测试卡，告诉它蔬菜上的液滴在白色药片上。3.2.3、放置10分钟以上进行预反应，条件允许时，放置在37恒温装置中10分钟。预反应后的片剂表面必须保持湿润。3.2.4将快速测试卡对折3分钟，用手捏3分钟，或用恒温装置恒温3分钟，使红色药片重叠反应。3.2.5、每批测定应设置空白对照卡的缓冲区。结果确定：1.结果表明，该酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制(阳性)，而未被抑制(阴性)。2.与空白对照卡相比，白色药片不变色或微淡蓝色都是阳性结果。白色平板电脑变成天蓝色或与空白对照卡相同，这是负面结果。3.对于阳性结果的样品，可以使用其他分析方法来进一步确定具体的农药品种和含量。快速测试卡法(纸片法)的注意事项1.一些蔬菜，如生姜、洋葱、大蒜、辣椒和西红柿，含有破坏酶活性或使蓝色产品褪色的物质。处理这类蔬菜时，不要放太多的汁液，不要切得太多，提取时间也不要太长。必要时，可以用表面测定法提取或测定整个蔬菜。对于一些叶绿素含量高的蔬菜，也可以提取整株(体)蔬菜，以减少色素的干扰。2.试纸上的萃取液不应过多或过少溢出试纸，以免使反应不完全。3.最好在每批样品处理完毕后将样品放在一起，并蒸干太久。4.当温度低于37时，加入液体后，酶反应速度变慢，反应时间相对延长。为了确定延长的时间，空白控制卡在用(体温)手指捏了3分钟后会变成蓝色，然后可以向下操作。请注意，在可比性之前，样品放置时间应与空白对照卡相同。5.空白控制卡不变色的原因是：一是片剂表面的缓冲液少，预反应片剂表面不够湿，二是温度太低。6.如果条件允许，农药速测卡放置在10以下，储存效果会更好。最好在开封后三天内用完每一小袋产品。如果没有用完，可以放入装有变色硅胶吸水剂的瓶子中，密封保存。如果发现农药速度计卡上的红色药片从鲜红色变为暗栗色，则表明纸张未能吸收水分。PR-3便携式快速检测仪4.再次按下“开始”键，开始单片机的“时间1”倒计时。5.当听到连续的“哇，哇，哇”声时，屏幕显示“CLOS”，并提示关闭前盖，进入“TEMP2”倒计时；6、当听到6“哇。哇，哇”的声音，做完这个操作后，打开上盖观察试卷的颜色变化；7.试纸显示蓝色为阴性，浅蓝色为弱阳性，白色为阳性。8.测试完成后，向上取出试卷进行下一次测试。酶抑制率法(分光光度法)1.试剂分别取1.1和pH8.0的缓冲溶液：11.9克无水磷酸氢二钾和3.2克磷酸二氢钾，用1000毫升蒸馏水溶解。1.2。显色剂：分别取160毫克二硫代二硝基苯甲酸和15.6毫克碳酸氢钠，溶于20毫升缓冲溶液中，于4冰箱保存。1.3。基质：取25.0毫克硫代乙酰胆碱，加入3.0毫升蒸馏水溶解。摇匀后放入4冰箱备用。保质期不得超过两周。1.4乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性用缓冲液溶解，3分钟的吸光度变化Ao值应控制在0.3以上。摇匀后储存在4的冰箱中备用。贮存期不得超过四天。1.5。可以选择由上述试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的Ao值应控制在0.3以上。2.工具2.1。分光光度计或相应的测量仪器和常量天平。3.分析步骤3.1。样品处理：选择有代表性的蔬菜样品，洗净表面的泥土，切成约1cm见方的碎片，取1g样品，放入烧杯或萃取瓶中，加入5mL缓冲液，摇匀1-2分钟，倒出萃取液，静置3-5分钟备用。3.2。对照溶液试验：先在试管中加入2。5mL缓冲液，加入0.1毫升酶液、0.1毫升显色剂，摇匀，在37放置15分钟以上(每批样品的控制时间应一致)。加入0.1毫升底物，摇匀。这时，测试溶液开始发生颜色反应。应立即放入仪器的比色池中，记录反应3分钟的吸光度变化值Ao。3.3。样品溶液测试：先向试管中加入2.5毫升样品提取液。其他操作与对照溶液的测试相同。记录反应3分钟的吸光度变化值At。结果的表达和计算1.试验结果应根据以下公式计算：2.抑制率(%)=(Ao-At)/Ao1003.公式中：ao.反应3分钟后对照溶液的吸光度变化值：4.At反应3分钟后，改变样品溶液的吸光度值：结果确定1.结果用酶抑制程度(抑制率)表示。当蔬菜样品提取物对酶的抑制率大于或等于50%时，表明蔬菜中存在高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药，样品呈阳性。阴性结果的样品需要检测两次或更多次。对于阳性结果的样品，可以使用其他方法进一步确定具体的农药品种和含量。酶抑制率法中的注意事项1.葱白、大蒜、萝卜、韭菜、芹菜、芫荽、茭白、蘑菇和番茄汁含有影响酶的植物次生物质，容易产生假阳性。当处理这样的样品时，可以提取整个植物(体)蔬菜。对于一些叶绿素含量较高的蔬菜，也可以采用全株(体)蔬菜提取法来减少色素的干扰。2.当温度低于37时，酶的反应速度会变慢。加入酶溶液和显色剂后，反应时间应相对延长。为了确定延长的时间，应使