定稿动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件

-，1，2.2动物细胞工程，选择3个现代生物技术专题，2细胞工程，教学目标，重点和难点，问题讨论，教学过程，知识结构，教学反馈，课后练习，教学参考，2.2.2动物细胞和单克隆抗体的融合，2.2如果牛细胞与植物细胞杂交得到绿色奶牛，不就是需要阳光挤出牛奶吗？动物细胞能融合吗？细胞融合是正常的生命活动。两个细胞正在融合并受精。思考：1。什么是动物细胞融合？2.促进细胞融合的方法有哪些？3.细胞融合技术的最大优势是什么？4.植物体细胞杂交和动物细胞融合有什么异同？电场法(高效、损伤小、易操作)(离心、振动、电刺激)、聚乙二醇(聚乙二醇)、灭活病毒(灭活仙台病毒)、连接：病毒以促进细胞融合、6、灭活病毒颗粒粘附于细胞表面、细胞膜被病毒颗粒穿透、细胞膜被连接、细胞融合形成、杂交细胞形成、-7、灭活病毒诱导细胞融合的原理、病毒表面所含的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上的糖蛋白相互作用、 使细胞相互聚集，重新排列细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子，打开细胞膜，融合细胞。 灭活是指使用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但不破坏这些病原体的抗原结构。-，8，主要用于制备单克隆抗体，获得杂交植物，主要用途，物理和化学方法，(同左)，灭活病毒，物理(离心，振动，电刺激)，化学(聚乙二醇)，诱导方法，分散后诱导细胞，诱导细胞融合，去除细胞壁后诱导细胞，诱导原生质体融合，细胞融合方法，细胞膜流动性，细胞膜流动性，植物细胞全能性，细胞融合原理，动物细胞融合，植物细胞杂交，比较项目，植物细胞杂交和动物细胞融合的比较， 动物细胞融合的概念，动物细胞融合也叫细胞杂交，这是指两个或两个以上的动物细胞结合形成一个细胞的过程，而单核细胞融合后形成的具有原始两个或两个以上细胞遗传信息的细胞称为杂交细胞。 哪些细胞产生抗体？效应器B细胞(浆细胞)。2.B淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？每个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.抗原侵入人体后，是否只有一种抗体会引起人体的免疫反应？在免疫反应过程中，动物会产生超过一百万种的特异性抗体。4.简要描述获得抗体的传统方法？抗原动物体抗体抗原杂质抗体杂质，二，单克隆抗体，刺激，浆细胞，11，6。如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？单个B淋巴细胞的体外培养和分泌抗体的提取。7.体外培养的淋巴细胞能无限增殖吗？如何解决这个问题？用这种方法获得的抗体有什么缺陷？低产量、低纯度和低特异性12，1975英国科学家米尔斯坦和科尔假设：13，B淋巴细胞特征：1。b淋巴细胞受抗原刺激后会产生抗体。2.动物体内的b淋巴细胞能产生超过一百万种抗体，而且每种抗体对特定抗原都有特异性免疫。3.每个B淋巴细胞只能产生一种特异性抗体。14、单克隆抗体制备过程中，特异性抗体试验阳性，-15，-16，为什么整个制备过程要经过两次筛选？第一次筛选获得杂交瘤细胞(多个)，第二次需要首先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的条件下开始培养，然后筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于细胞群是从单个杂交瘤细胞中克隆出来的，因此产生的抗体必须是具有单一化学性质和强特异性的单克隆抗体。单克隆在这里指的是单细胞克隆，除了被克隆的不是B淋巴细胞而是杂交瘤细胞。，-，17，融合细胞在选择性培养基中培养后，活细胞为杂交瘤细胞。然而，这些杂交瘤细胞并不是所有能够分泌所需抗体的细胞，通常通过“有限稀释法”来选择。用多孔细胞培养板稀释和培养杂交瘤细胞，使得每个孔中不允许超过一个细胞通过培养增殖。然后检测每个孔的上清液中细胞分泌的抗体(通常使用酶联免疫吸附测定法)，其中上清液可以与特异性抗原结合的培养孔是阳性孔。不能保证阳性孔中的细胞来自单个细胞，选择阳性孔中的细胞继续有限稀释，这通常需要进行3-4次，直到每个孔中增殖的细胞肯定是单克隆细胞。这个过程就是杂交瘤细胞的克隆培养。植物细胞杂交与动物细胞融合的比较。免疫原理、细胞融合原理和动物细胞培养原理，2、为什么选择小鼠骨髓瘤细胞和B细胞融合？这样融合的杂交瘤细胞继承了亲代细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且具有无限增殖的能力，从而获得大量特异性强、纯度高、灵敏度高、产量大、易于标准化生产的单克隆抗体，-20。单克隆抗体-21的优势。单克隆抗体的应用。1.可用作诊断试剂：具有准确、高效、简便、快速的优点。2.它可以用来治疗疾病。3.它可以用来运载药物(作为“生物导弹”，运载与疾病相应的药物)。)“生物导弹”=单克隆抗体药物，-，22，-，23，知识结构，两个过程，动物细胞培养过程，单克隆抗体制备过程，三个“一”，诱导细胞融合的新方法灭活病毒，新细胞杂交瘤细胞，一个优点单克隆抗体的强特异性和高敏感性的优点，-，24，3。思考和探索1。植物细胞杂交技术和动物细胞融合技术有什么区别？2.在制备单克隆抗体时，为什么要将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？表明植物细胞杂交技术基本上与动物细胞融合技术相同，只是在植物细胞融合之前必须除去细胞壁，然后进行植物细胞融合。动物细胞融合是两个细胞的直接融合。表明哺乳动物感染抗原后，在它们的体内会形成相应的B淋巴细胞，它们可以分泌相应的抗体来凝结或杀死这些抗原。在动物免疫反应的过程中，每一种类型的B淋巴细胞都会分泌出一种特定的抗体。为了获得大量的特异性抗体，能够分泌单一抗体的B淋巴细胞必须大量增殖。b淋巴细胞有能力产生单一抗体，但不能在体外增殖。骨髓瘤细胞是可以在体外无限增殖但不能产生抗体的癌细胞。因此，一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞，它将具有双亲细胞的特征它可以在体外培养条件下连续增殖，同时它可以产生某些特定的抗体。1.其他成功的动物细胞融合的例子有哪些？为了知道更多的例子，我们需要经常查阅更多的科学报告。为什么我们需要用多个细胞而不是两个来融合动物细胞？根据目前常用的细胞融合方法，无论通过物理、化学还是生物方法，融合率都不能达到100%。仅合并两个细胞效率太低，无法获得融合细胞。更重要的是，即使这两种细胞已经融合，它们也不一定是研究者所期望的细胞类型。目前，动物细胞融合技术最有价值的应用是单克隆抗体的制备。我们以单克隆抗体的制备为例来说明这个问题。我们知道体内产生了超过一百万种特异性抗体，但是每个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。如果只有一个脾细胞(包括B淋巴细胞)与一个肿瘤细胞杂交，我们不能确定脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的。如果大量脾细胞和肿瘤细胞融合，可以从融合细胞中筛选出能够分泌所需抗体的杂交瘤细胞。如何进行杂交瘤细胞的抗体检测和克隆培养？融合细胞在选择性培养基中培养后，活细胞为杂交瘤细胞。然而，这些杂交瘤细胞并不是所有能够分泌所需抗体的细胞，通常通过“有限稀释法”来选择。用多孔细胞培养板稀释和培养杂交瘤细胞，使得每个孔中不允许超过一个细胞通过培养增殖。然后检测每个孔的上