动物的克隆PPT演示课件

第3节、动物的克隆,第二章克隆技术,1,植物的克隆,外植体,脱分化,再分化,胚性细胞,特点：细胞质丰富、液泡小而细胞核大。,2,一、动物细胞的培养和克隆形成,1、广义的动物组织培养(组培)包括：,2、动物组织培养技术的发展：,1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。,1903年，皮肤及白细胞培养于腹水及血清中，存活1个月。,1907年，美，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，观察到细胞的阿米巴运动，创立了悬浮培养法。,细胞培养、组织培养和器官培养。,3,3、动物细胞培养过程,4,思考题,1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？,、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？,、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？,、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？,、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？,没有,是,成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖,先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理,胰蛋白酶水解蛋白质,细胞间的成份是蛋白质,5,思考题,、细胞膜的主要成份是什么？,、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？,、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？,、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？,蛋白质和磷脂,能,注意时间的控制,不能，因为两的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近,胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛,6,思考题,11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？,12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？,13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？,易于培养细胞贴壁，进行生长增殖,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。,将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。,这样的过程叫做传代培养,7,4、原代培养、传代培养：,5、细胞系、细胞株：,细胞系是泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。,通过一定的选择或纯化后，细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。,连续细胞系,有限细胞系,致瘤性,不死性,连续细胞株,有限细胞株,海拉(HeLa)细胞系电镜照片,8,细胞悬浮液,10代细胞,50代细胞,无限传代,原代培养,传代培养,细胞株,细胞系,如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？,随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖,(遗传物质改变),9,植物细胞和动物细胞培养的比较,获得细胞或细胞分泌蛋白,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,快速繁殖、培育无病毒植株等,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,液体培养基,固体培养基,细胞增殖,10,11,6、动物细胞培养技术的应用,（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。,（3）用于检测有毒物质。,（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。,（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。,12,7、克隆培养法：,把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体(纯系)的技术。,提高细胞克隆形成率的措施：,适宜的培养基、动物血清、滋养细胞、激素刺激、调节pH等。,应用：,研究遗传规律和生理特性的重要材料。,13,卵裂,动物细胞分化程度,14,受精卵,胰岛细胞,细胞的专门化，有利于提高各种生理功能的效率。,15,三、动物的克隆繁殖,1、动物细胞全能性的表现程度：,低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。癌细胞仍能逆转为正常细胞。,无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。,16,2、动物难以克隆的根本原因：,基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。,一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。,如：哺乳动物的红细胞只有少量的线粒体。,17,3、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖：,胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。,18,绵羊“多莉”克隆过程：,19,克隆羊成功的分子细胞生物学机理：,体细胞克隆成功的意义：,1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受精卵时期的功能。,2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。,应用：,为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。,重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。,20,体细胞核移植技术的应用前景,21,世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：,写出、所指的细胞工程各称：。实施细胞工程时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。多莉面部的毛色是，判断依据：。继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有。请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义：。,22,细胞工程常用的技术手段小结：,植物组织培养,植物体细胞杂交,动物的克隆：,植物的克隆：,1.动物细胞培养,2.动物细胞融合,3.单克隆抗体,5.胚胎移植,4.核移植,6.胚胎分割移植,23,24,解决某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁殖速度问题。,4、动物胚胎分割移植,25,26,二、动物的细胞融合技术及其应用,诱导方式,物理法：离心、振荡、电融合技术,化学法：聚乙二醇,生物法：灭活的仙台病毒,1、细胞融合与细胞杂交：,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接,细胞融合，形成杂种细胞,27,2.杂交瘤技术和单克隆抗体制备：,(1).传统抗体生产方法：,抗原,动物体内