《生物芯片技术》课件.ppt

第十章生物芯片技术,大连医科大学赵春艳,第十章生物芯片技术,生物芯片（biochip）的概念指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中的靶分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。,第十章生物芯片技术,生物芯片的主要特点：高通量、微型化和自动化生物芯片的分类：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室,第十章生物芯片技术,1.基因芯片（Genechip）又称DNA芯片,是根据核酸杂交的原理，将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。,第十章生物芯片技术,2.蛋白质芯片(proteinchip)利用抗体与抗原特异性结合即免疫反应的原理，将蛋白质分子（抗原或抗体）结合到固相支持物上，形成蛋白质微阵列，即蛋白质芯片。,第十章生物芯片技术,3.芯片实验室(labs-on-chip)高度集成化的集样品制备、基因扩增、核酸标记及检测为一体的便携式生物分析系统实现生化分析全过程集成在一片芯片上完成，从而使生物分析过程自动化、连续化和微缩化芯片实验室是生物芯片技术发展的最终目标,第十章生物芯片技术,第二节蛋白质芯片,第一节DNA芯片,第一节DNA芯片,第一节DNA芯片,DNA芯片技术包括四个主要步骤芯片的设计与制备样品制备杂交反应和信号检测结果分析,第一节DNA芯片,第一节DNA芯片,二、样品的制备,三、杂交与结果分析,四、基因芯片技术在医学中的应用,一、芯片制备,一、芯片制备,基因芯片制备主要包括两个方面探针的设计：根据应用目的不同，设计不同的固定于芯片上的探针探针在芯片上的布局：选择合适的方式将探针排布在芯片上,一、芯片制备,（二）DNA芯片的制备,（一）探针的设计,（一）探针的设计,1.表达型芯片探针的设计不需要知道待测样品中靶基因的精确序列的特异性应放在首要位置2.单核苷酸多态性检测芯片探针的设计等长移位设计法3.特定突变位点探针的设计叠瓦式策略,一、芯片制备,一、芯片制备,图102,（二）DNA芯片的制备,1.载体选择与预处理2.基因芯片制备（1）原位合成（insitusynthesis）光导原位合成法原位喷印合成分子印章多次压印合成（2）点样法,一、芯片制备,一、芯片制备,图103,二、样品的制备,样品的制备过程包括：核酸分子的纯化扩增标记,三、杂交与结果分析,（一）杂交反应：与传统的杂交方法类似（二）杂交信号的检测：最常用荧光法（三）数据分析：芯片杂交图谱的处理与存储由专门设计的软件来完成,四、基因芯片技术在医学中的应用,1.基因表达分析2.基因型、基因突变和多态性分析3.疾病诊断：遗传性、感染性、肿瘤4.药物筛选5.指导用药及治疗方案6.预防医学,四、基因芯片技术在医学中的应用,第二节蛋白质芯片,第二节蛋白质芯片,蛋白质芯片（proteinchip）又称蛋白质微阵列，是指以蛋白质或多肽作为配基,将其有序地固定在固相载体的表面形成微阵列；用标记荧光的蛋白质或其它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白质之间或蛋白质与其它分子之间的相互作用关系。,第二节蛋白质芯片,根据制作方法和应用的不同，蛋白质芯片分为两种:蛋白质功能芯片细胞中的每一种蛋白质占据芯片上一个确定的点，主要是高度平行地检测天然蛋白质活性。蛋白质检测芯片将能够识别复杂生物溶液（如细胞提取液）中靶多肽的高度特异性配体进行点阵，这种芯片能够高度并行的检测生物样品中的蛋白质。,第二节蛋白