菌种培养基PPT演示课件

第3章菌种培养基,1,培养基：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微生物培养提供除营养外的其它所必须的条件。,发酵培养基的作用：,满足菌体的生长促进产物的形成,培养基,2,发酵培养基的要求：,培养基能够满足产物最经济的合成。发酵后所形成的副产物尽可能的少。培养基的原料应因地制宜，价格低廉；且性能稳定，资源丰富，便于采购运输，适合大规模储藏，能保证生产上的供应。所选用的培养基应能满足总体工艺的要求，如不应该影响通气、提取、纯化及废物处理等。,3,第一节培养基的类型及功能,培养基按其组成物质的纯度、状态、用途可分为三大类型,一、按营养物质来源分为,合成培养基:原料其化学成分明确、稳定,适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化规律,培养基营养单一，价格较高，不适合用于大规模工业生产,天然培养基：采用天然原料,原料来源丰富(大多为农副产品)、价格低廉、适于工业化生产,原料质量等方面不加控制会影响生产稳定性,半合成培养基：在天然培养基中加入一些化学药品补充无机盐成分,4,二、按物理状态分为,固体培养基：适合于菌种和孢子的培养和保存，也广泛应用于有子实体的真菌类，如香菇、白木耳等的生产。,半固体培养基：即在配好的液体培养基中加入少量的琼脂，一般用量为0.5%0.8%，主要用于微生物的鉴定。,液体培养基：80%90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分，是发酵工业大规模使用的培养基。,四、按生产用途（从发酵生产应用考虑）培养基按其用途可分为孢子（斜面）培养基、种子培养基和发酵培养基三种。,三、按培养基用途分为：基础培养基、选择性培养基、加富培养基、鉴别培养基,5,孢子培养基,要求：能使菌体生长快，产生孢子数量大、质量好，且不会引起菌种变异。特点C、N源不宜多，否则只长菌丝，少长或不长孢子；无机盐浓度要适当控制，否则会影响孢子的颜色和孢子量。,6,种子培养基,要求营养丰富、完全，氮和维生素的含量高些；培养基中加入一些易于吸收利用的快C、N源，便于孢子发芽生长，保证球形；pH要稳定；最后一级尽可能接近发酵培养基，常加入少量发酵合成期才大量需要的物质。,7,发酵培养基,目的：使接种菌丝生长并能高效表达，获得高的发酵产量，同时组分尽可能单一，以保证高的得率。要求营养丰富完全，有利于产物合成；不能大量加入快C、快N源，应和慢C、N源相结合；在产物分泌期间，pH稳定；加入适量合成所需的物质，如前体等，进行定向发酵；采用中间补料，以提高发酵单位；原料的考虑成本问题,8,培养基有哪些化学成分组成？这些成分的来源有哪些（尤其是C、N源）？各成分的作用是什么？在应用天然C、N源时应注意什么问题？,第二节发酵培养基的成分及来源,9,一、碳源,1、作用,提供微生物菌种的生长繁殖所需的能源和合成菌体所必需的碳成分。,提供合成目的产物所必须的碳成分。,2、来源,糖类、油脂、有机酸、正烷烃,10,3、工业上常用的糖类,葡萄糖,所有的微生物都能利用葡萄糖。但是会引起葡萄糖效应。,工业上常用淀粉水解糖，但是糖液必须达到一定的质量指标。,11,不同的制糖工艺生产的糖液质量差别很大,12,糖蜜,糖蜜是制糖生产时的结晶母液，它是制糖工业的副产物。,糖蜜主要含有蔗糖，总糖可达50%75%。一般糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜葡萄糖蜜。,13,不用加工方法对甘蔗糖蜜的影响,14,糖蜜使用的注意点：,除糖份外，含有较多的杂质，其中有些是有用的，但是许多都会对发酵产生不利的影响，需要进行预处理。,例：谷氨酸发酵,有害物质：胶体成分（起泡、结晶）、钙盐（结晶）生物素（发酵控制）,预处理：澄清脱钙脱除生物素,例：柠檬酸发酵,有害物质：铁离子含量高（导致异柠檬酸的生成）,预处理：黄血盐,15,淀粉、糊精,使用条件：微生物必须能分泌水解淀粉、糊精的酶类,缺点：难利用、发酵液比较稠、一般2.0%时加入一定的-淀粉酶成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。,优点：来源广泛、价格底难利用，可以解除葡萄糖效应,16,二、氮源,氮源主要用于构成菌体细胞物质（氨基酸，蛋白质、核酸等）和含氮代谢物。常用的氮源可分为两大类：有机氮源和无机氮源。,1、无机氮源,种类：氨盐、硝酸盐和氨水,特点：微生物对它们的吸收快，所以也称之谓迅速利用的氮源。但无机氮源的迅速利用常会引起pH的变化如：(NH4)2SO42NH3+2H2SO4NaNO3+4H2NH3+2H2O+NaOH,17,无机氮源被菌体作为氮源利用后，培养液中就留下了酸性或碱性物质，这种经微生物生理作用（代谢）后能形成酸性物质的无机氮源叫生理酸性物质，如硫酸胺，若菌体代谢后能产生碱性物质的则此种无机氮源称为生理碱性物质，如硝酸钠。正确使用生理酸碱性物质，对稳定和调节发酵过程的pH有积极作用。,所以选择合适的无机氮源有两层意义：满足菌体生长稳定和调节发酵过程中的pH,18,2、有机氮源,来源：工业上常用的有机氮源都是一些廉价的原料，花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟。,成分复杂：除提供氮源外，有些有机氮源还提供大量的无机盐及生长因子。,例玉米浆：可溶性蛋白、生长因子（生物素）、苯乙酸较多的乳酸硫、磷、微量元素等,19,氮源使用的一些相关问题：,有机氮源和无机氮源应当混合使用,早期：容易利用易同化的氮源无机氮源中期：菌体的代谢酶系已形成、则利用蛋白质,有些产物会受氮源的诱导和阻遏,例：蛋白酶的生产,有机氮源选取时也要考虑微生物的同化能力,开发效果好、有针对性的有机氮源仍然是令人感兴趣的课题,20,三、无机盐的微量元素,1、作用：各种不一样,2、来源：C、N源，以盐的形式补充,3、用量：根据具体的产品，以实验决定,4、使用注意点,A.对于其它渠道有可能带入的过多的某种无机离子和微量元素在发酵过程中必须加以考虑,21,例：铁离子青霉素发酵中，铁离子的浓度要小于20g/ml发酵罐必须进行表面处理,B、使用时注意盐的形式（pH的变化）,例：黑曲酶NRRL-330，生产-淀粉酶，P对酶活的影响pH酶活不加4.25120分钟加K2HPO45.4530分钟加KH2PO44.6275分钟,22,四、生长因子、前体和产物促进剂,从广义上讲，凡是微生物生长不可缺少的微量的有机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。,1、生长因子,如以糖质原料为碳源的谷氨酸生产菌均为生物素缺陷型，以生物素为生长因子，生长因子对发酵的调控起到重要的作用。,有机氮源是这些生长因子的重要来源，多数有机氮源含有较多的B簇维生素和微量元素及一些微生物生长不可缺少的生长因子。,23,前体指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接彼微生物在生物合成过程中合成到产物物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。,2、前体,青霉素：分子量356,苯乙酸：分子量136,24,作用：前体有助于提高产量和组份。,用量：前体的用量可以按分子量衡算，具体使用有个转化率的问题。,例：6000单位/ml的青霉素G,需要多少苯乙酸青霉素6000*0.6（微克）36mg/ml苯乙酸（36*136）/356=13.8mg/ml=1.38%实际使用时的转化率在46-90%之间例某厂单耗为：0.337（kg/10亿青霉素）转化率为：13.8/(0.337/0.6)*36=68%,25,用法：前体使用时普遍采用流加的方法。前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07%。前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化，流加也有利于提高前提的转化率。,26,3、产物促进剂所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。,27,促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因是多方面的。有些促进剂本身是酶的诱导物；有些促进剂是表面活性剂，可改善细胞的透性，改善细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产；也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用；有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。,28,五、水,对于发酵工厂来说，恒定的水源是至关重要的，因为在不同水源中存在的各种因素对微生物发酵代谢影响甚大。,水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。,对于酿造行业，水的重要性不言而喻。,对于常规发酵，可靠、持久，能提供大量成分一致清洁的水。,29,第三节发酵培养基的设计和优化,目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。,30,四个原则,目的明确,营养协调,物理化学条件适宜,经济节约,以粗代精以野代家以废代好以简代繁,四种方法,生态模拟,查阅文献,精心设计,试验比较,31,一、培养基成分选择的原则,菌种的同化能力,代谢的阻遏和诱导,合适的C、N比,1000.22.0,pH的要求,32,培养基的设计,了解菌种菌种名称、营养、生活史、生长环境、生理生化特性培养基种类的确定营养类型：主要底物，降解特点生长环境：温度、pH、渗透（无机盐）、耗氧情况菌代谢产物的化学结构、性质、途径；合成条件天然替代品的确定及其预处理,33,培养基的设计（续）,基本培养基的确定来源广泛、价廉；适于生长、繁殖、产物积累；不同阶段有不同的基本培养基；用量的计算：C、N及前体。培养基的优化单因子实验正交实验响应面分析方法,34,（一）、理论转化率与实际转化率,理论转化率是指理想状态下根据微生物的代谢途径进行物料衡算，所得出的转化率的大小。,实际转化率是指实际发酵过程中转化率的大小,如何使实际转化率接近于理论转化是发酵控制的一个目标,二、成分含量的确定,35,例:如在酒精生产中葡萄糖转化为酒精的理论转化率计算如下：葡萄糖转化为酒精的代谢总反应衡算式为：C6H12O62C2H5OH+2CO2葡萄糖转化为酒精的理论得率为：Y=246/162=0.57,36,37,（二）、实验设计,培养基成分的含量最终都是通过实验获得的,合理的实验方法,多因子实验：均匀设计、正交实验设计、响应面分析等。,多因子实验,38,当培养基成分确定后，剩下的问题就是各成分最适的浓度，由于培养基成分很多，为减少实验次数常采用一些合理的实验设计方法。,三、培养基设计的步骤,根据前人的经验和培养基成分确定时一些必须考虑的问题，初步确定可能的培养基成分；,通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分；,39,类胡萝卜素高产菌Y11的培养基的优化,郭秒,食品与工业发酵，2004,类胡萝卜素的作用：色素、营养保健,发酵培养基的设计和优化,40,原培养基:,发酵培养基的设计和优化,41,初步确定可能的培养基成分(以碳源为例),发酵培养基的设计和优化,42,通过单因子实验确定适宜的培养基成分(以碳源为例),考虑到成本：乙酸钠是较为合适的碳源,进一步：乙酸钠的浓度2%比较好,发酵培养基的设计和优化,43,结果：,碳源：乙酸钠0.2%,氮源：氯化铵0.2%酵母膏0.03%,无机盐:复合无机盐0.05%,发酵培养基的设计和优化,44,正交设计确定优化的配方,发酵培养基的设计和优化,45,发酵培养基的设计和优化,46,改进后培养基,原培养基,改进后培养基的发酵结果,发酵培养基的设计和优化,47,四、摇瓶水平到反应器水平的优化配方,摇瓶、反应器培养基研究的两个层次,摇瓶培养基设计的第一步,反应器最终的优化的基础配方,48,例：,青霉素发酵,发酵摇瓶：玉米浆4%，乳糖10%，(NH4)SO40.8%轻质碳酸钙1%。,发酵罐:葡萄糖流加控制总量10-15%，玉米浆总量4-8%补加硫酸、前体等。,摇瓶发酵培养基和罐的基础培养差别很大,发酵培养基的设计和优化,49,摇瓶优化配方：菌种筛选，反应器研究的基础,发酵培养基的设计和优化,50,发酵罐：反应器水平,可以得出最终优化的基础配方,发酵培养基的设计和优化,51,pH控制摇床：反应器水平上的摇瓶研究,发酵培养基的设计和优化,52,五、培养基设计时注意的一些相关问题,原料及设备的预处理,原材料的质量,发酵特性的影响,在抗生素发酵生产中往往喜欢所谓的“稀配方”，因为它既降低成本、灭菌容易、且使氧传递容易而有利于目的产物的生物合成。如果营养成分缺乏，则可通过中间补料方法予以弥补。,53,灭菌,在大规模发酵中应该尽可能的采取连续灭菌的操作，而且保证灭菌条件的稳定是保证发酵稳定的前提。,有时避免营养物质在加热的条件下，相互作用，可以将营养物质分开消毒。,有些物质由于挥发和对热非常敏感，就不能采用湿热的灭菌方法。,Na2HPO4+CaCO3CaHPO4+Na2CO3,54,第四节种子培养工艺的确定方法,一、培养条件二、菌种扩大培养,55,温度pH值氧种龄接种量,一、培养条件,56,种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养，最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。,种子扩大培养的概念:,二、菌种扩大培养,57,种子扩培的目的：,接种量的需要,菌种的驯化,缩短发酵时间、保证生产水平,种子的要求：,总量及浓度能满足要求,生理状况稳定,活力强，移种至发酵后，能够迅速生长,无杂菌污染,58,工业微生物菌种培养的类型,静置培养法通气培养法在静置和通气培养两类方法中又可分为液体培养和固体培养两大类型，其中每一类型又有表面培养与深层培养之分。,59,主要培养方法及特点,1种子扩大培养阶段（1）液体培养法（2）表面培养法（3）固体培养法,60,2大规模生产阶段,（1）表面培养（2）固体培养（3）液体深层培养（4）载体培养,61,发酵工业的种子制备,62,种子制备原理与技术,优良种子应具备的条件生长活力强，延迟期短；生理状态稳定；浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求；无杂菌污染，保证纯种发酵；适应性强，生产能力稳定。,63,种子罐级数的确定,种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数。级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。,64,确定方法,菌种的性质(如菌种传代后的稳定性)瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度发酵罐中种子培养液的最低接种量种子罐与发酵罐的容积比生产规模随工艺条件的改变作适当的调整,65,种子质量的判断方法,通常检测的培养液中参数pH是否在种子要求的范围之内糖、氨基氮、磷酸盐的含量菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观有无杂菌污染其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气等,66,种子制备,步骤：斜面培养基中活化；扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培养，完成实验室种子制备；一级种子罐，制备生产用种子；视情况确定扩大级数，完成生产车间种子制备；种子转种至发酵罐。,67,种子制备过程,实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养等或液体摇瓶培养。生产车间种子制备阶段：种子罐扩大培养。,68,69,实验室种子制备,无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅速，可用固体培养基培养孢子。菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇瓶液体培养法。不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度下活化即可。,70,种子扩大培养阶段液体培养法：液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。表面培养法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。,71,生产车间种子制备,实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进行扩大培养。种子罐培养:（一）获得足够的菌种数量，（二）种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养条件，使菌体适应发酵环境。,72,种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子以满足发酵的需求。,73,种龄与接种量,接种龄种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。种子培养期应取菌种的对数生长期为宜，菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而且会降低产量。,74,大量地接入培养成熟的菌种的优点：缩短生长过程的延缓期，因而缩短了发酵周期，提高了设备利用率节约发酵培养的动力消耗有利于减少染菌机会,75,放射形土壤杆菌多糖（ARPS）发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响,76,接种种龄和接种量,接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体的体积的比例。接种量过多，菌丝生长过快、溶氧不足，衰老细胞增加等，发酵后劲不足。种量过少延长发酵周期，形成异常形态，而且易造成染菌。以生产菌种在发酵罐中的繁殖速度为依据。接种量的大小直接影响发酵周期。,77,在放射形土壤杆菌多糖（ARPS）发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响,78,影响种子质量的因素,原材料质量培养温度湿度通气与搅拌,斜面冷藏时间培养基pH,79,原材料质量,原材料质量波动引起种子质量不稳定。原材料质量波动的主要原因：无机离子含量不同（微量元素Mg2+、Cu2+、Ba2+能刺激孢子的形成，磷含量太多或太少也会影响孢子的质量）。,80,培养温度,温度过低，菌种生长发育缓慢。温度过高会使菌丝过早自溶。,在制备土霉素生产种子过程中，高于37培养时，孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。,81,湿度,湿度低，孢子生长快；湿度大，孢子生长慢。,制备土霉素生产菌种龟裂链霉菌孢子时发现，在含有少量水分的试管斜面培养基下部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅速蒸发呈干瘪状，孢子稀少,82,通气与搅拌,足够的通气量，以保证菌种代谢正常，提高种子的质量。搅拌可提高通气效果，促进生长繁殖，过度搅拌导致培养液大量涌泡，液膜表面的酶易氧化变性，泡沫过多增加染菌机会，增加能耗。丝状微生物不宜剧烈搅拌。,83,斜面冷藏时间,对孢子的生产能力有较大影响冷藏时间越长，生产能力下降越多,链霉素生产中，斜面孢子在6冷藏两个月后的发酵单位比冷藏一个月的降低18，比冷藏3个月的降低35。,84,培养基,培养种子的目的：扩大培养，增加细胞数量；同时也必须培养出强壮、健康、活性高的细胞。为了使细胞迅速进行分裂或菌丝快速生长。,85,有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充足氮源和生长因子，无机氮源比例大；各种营养物质的浓度不必太高；供孢子用的种子培养基，可添加易被吸收利用的碳源和氮源；应考虑与发酵培养基的主要成分相近。,种子培养基特点,86,pH,选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适当的菌量。培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的pH，以便种子能尽快适应新的环境。,87,种子质量的控制措施,菌种稳定性的检查测定其生产能力，从中挑选高产菌株，并及时对退化菌种进行复壮。提供适宜的生长环境种子无杂菌检查，保证纯种发酵。,种子液生化分析项目主要有：营养基质的消耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等,88,种子制备的放大原理与技术,细菌发酵时的种子扩大培养；细菌发酵过程中种子扩大培养的主要目的是为了获得大量的活力强的种子；种龄对于生芽孢的种子尤其重要。若接种物含大量芽孢，将给后续发酵带来较长迟滞期。,89,梭状芽孢杆菌发酵丁醇丙酮时种子扩大培养的程序,举例：,90,酵母发酵时的种子扩大培养,酿酒酵母的扩大培养最初采用纯种进行酵母发酵并设计出酵母繁殖流程，他将每一步的接种量规定为10，并控制繁殖条件与酿造时一致。现代的流程中，接种量为1%或更低，控制的条件也与酿造时不同。,91,面包酵母时的种子扩大培养的程序,92,丝状真菌发酵的种子扩大培养,丝状真菌既可以利用孢子，也可以利用菌丝体作为接种物接种到发酵罐进行发酵。,93,在固化的培养基上产生孢子“滚瓶”技术应用于产黄青霉的孢子生产在固体培养基上产生孢子在谷类的颗粒表面形成大量的孢子在液体深层培养基中产生孢子,利用孢子作为接种物,灰黄霉素产生菌展青霉一试验表明在良好的通气条件下，培养基中含氮是在0.050.1（w/v）之间时，可以产生大量的孢子,94,丝状真菌的菌丝体作为接种物,不能产生无性孢子的用繁殖体菌丝作为接种物，如生产赤霉素的菌种藤仓赤霉。问题：难以获得均一的接种物。接种前将菌丝打成碎片，形成大量的菌丝段，它具有大量的生长点。,95,放线菌发酵时的种子扩大培养,斜面培养，制备孢子悬浮液作初级种子可用培养摇瓶菌丝体作为初级种子,96,种子制备过程举例,一、谷氨酸生产的种子制备,制备过程,斜面菌种,一级种子培养,二级种子培养,发酵,97,1、斜面(AS1.299),培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化钠0.5琼脂2%，pH7.0-7.2,培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细。,培养条件：32，生长18-24小时。,生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次。,98,2.一级种子（摇瓶）,培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml，32培养12小时。,培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆2.5%，K2HPO40.1%,培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基。,99,3.二级种子(种子罐),培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%），32培养7-10小时。,培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%。,培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基。,100,种子的质量要求：,108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列pH7.0-7.2时结束，6.887.0-7.2活力旺盛,101,二、青霉素生产的种子制备,制备过程,安培管,斜面孢子,大米孢子,一级种子,二级种子,发酵,102,一、斜面孢子,培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等。,培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细。,培养条件：25、7天,注意湿度50%左右。,103,二、大米孢子,培养基：大米及氮源（玉米浆）。,培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点少）有利于孢子的生长。,培养条件：25、7天，控制湿度。,大米孢子的要