《平面色谱技术》PPT课件.pptVIP

5.平板色谱一般分离过程,将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。,比移值（R)：溶质移动距离与流动相移动距离之比,1）纸色谱,载体：滤纸（纤维素），可吸附22%水，其中6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子之间的偶极作用）形成固定相,纸色谱属于分配色谱-正相和反相分配纸色谱,2)薄层色谱,薄层分离机制主要应用范围氧化铝板吸附脂肪和芳香化合物、生物硅胶板吸附碱、甾类、萜类改性硅胶C2,C8,C18RP正相、反相非极性物质、极性物质CN板正相、反相农药、酚类、甾类NH2板正相、反相、核苷酸、农药、酚类、甾类、阴离子交换维生素类、嘌呤衍生物纤维素分配氨基酸、梭酸乙酰纤维素正相、反相蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂阴、阳离子交换氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺分配黄酮类、酚类葡聚糖凝胶凝胶过滤蛋白质、核苷酸,2.薄层色谱操作技术,1)薄层板,(1)载体：硅胶：表面带有硅醇基，pH=4.5，经150活化脱水后，46个硅醇基/nm2,(2)薄层参数：厚度：普通薄层高效薄层制备薄层0.25mm0.2mm0.52mm活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增加而减弱,硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系,不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况,(3)粘合剂与添加剂,粘合剂a.煅石膏（CaSO42H2O)：120140烘烤24h,过200目筛，密闭备用。b.羧甲基纤维素钠（-a)：0.21.0%,添加剂a.荧光指示剂ZnSO4:Mn254nmZnSCdS:Ag366nmb.酸、碱或缓冲液c.硝酸银溶液：饱合化合物炔烃反式烯烃顺式烯烃,(4)薄层的制备方法手工制板a.软板b.硬板(含粘合剂),匀浆,涂布,凉干,活化,预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板a.普通薄层预制板-硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板b.高效薄层预制板-氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维素、纤维素-硅胶、硅藻土-硅胶等）,(5)薄层板的活化吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质R值就小。活化：105120干燥0.51h级活度的标定：a.氧化铝薄层活度的标定染料溶液的配制：称取偶氮苯30mg和对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各20mg溶于四氯化碳50ml中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液20l点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的R，由下表中确定薄板的花度级别。,氧化铝薄层的活度级别,b.薄层活度的标定染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹）各20mg溶于1ml氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙酸乙酯（9：1）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述级氧化铝的活度相当。,（6）薄层板的预处理常用方法：用氯仿-甲醇(1:1)或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在110干燥0.51h，干燥器中保存备用。除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。,（7）烧结薄层板和棒状薄层机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用,2）点样：（1）样品溶液的制备纯品的溶解样品的提取与净化a.溶剂提取法b.液液萃取法c.液固萃取法-亲脂型和亲水型固体萃取剂,溶剂的选择a.溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；b.溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；c.溶剂的沸点要适中。,(2)点样样品浓度0.011.00%点样体积经典薄层15l高效薄层0.10.5l点样过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。点样直径经典薄层0.01ng（2）蒸气检出法（3）试剂显色法显色方法a.喷雾显色b.浸渍显色c.超压衍生化d.展层-显色法显色试剂,a.通用显色剂a)硫酸组成：硫酸-水（1:1），硫酸-甲醇或乙醇（1:1），1.5M硫酸与0.51.5M硫酸铵。方法：喷后110烤15min,不同有机物显不同颜色。b)0.5%碘的氯仿溶液c)中性0.05%高锰酸钾溶液易还原化合物在淡红背景下显黄斑。d)5%磷钼酸乙醇溶液方法：喷后120烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气熏，则背景变无色。,b.专属显色剂,（4）定性斑点的R值斑点的显色特性斑点的原位光谱扫描a.薄层色谱-紫外可见光谱扫描b.薄曾色谱-三维光谱扫描与其它分析技术的联用a.与其它色谱法：GC、HPLCb.与电化学法联用：阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴定法c.与光谱法联用：原子吸收、拉曼光谱、IR、MS、NMR（）定量,平板色谱简单、方便、及操作费用低，可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开。采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开，即按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开，进一步改善分离效果。试样一般不需要经过预处理即可分离。,.平板色谱特点及应用,缺点：分离效率较低，不适用挥发性试样分离。定性定量不便。应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种预试方法。,合成药物的分析方面的应用药物的定性检鉴别纯度检查合成药制剂的含量测定稳定性考查药物代谢研究合成工艺的监控及反应机制的研究,谢谢！,各组分在薄板上的位置常用比移值（Rf）来表示。A，B为样品溶液点样的位置，如图1所示：,1、比移值（Rf）,A物质的Rf=;B物质的Rf=;所以Rf值与K之间关系可用下式表示：Rf=1/1+K（Vs/Vm）,在一定色谱条件下，Rf值为常数，其值在01之间，若某组分Rf