革兰氏染色的机理和步骤

1.革兰氏染色的机理和程序机理：葡萄糖和葡萄糖-主要是由于连续波化学成分在乙醇渗透性和抗脱色能力上的差异造成的。它主要由肽聚糖的厚度和结构决定。g有一层很厚的CW:肽聚糖，脂肪含量很低。乙醇脱色时，CW脱水，孔径减小，渗透率降低，不易脱色，初始染色后呈蓝紫色。G- CW:肽聚糖层薄，脂质含量高。当乙醇脱色时，脂质被乙醇溶解，渗透性增加，细胞被重新染成红色。步骤：涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑出菌体并均匀地涂在水中。固定：将载玻片靠近酒精灯火焰放置，蒸发水分，但不要烧焦。(3)一次染色：用碱性颜料结晶紫对细菌液体涂片进行一次染色。媒染：用碘溶液媒染1分钟，水洗，吸干。(在细胞中形成结晶紫和碘的复合物，以增强相互作用)(5)脱色(关键步骤):用95%乙醇脱色30s时，应适当摇匀，以确保用乙醇完全脱色。用水清洗并吸干。再染色：(2)重新染色30秒，用水清洗并吸干。干法和显微镜检查。2.用渗透皮质膨胀理论解释孢子耐热机制。孢子的耐热性在于孢子外壳对多价阳离子和水的渗透性差，以及皮层的高离子强度，这使得皮层产生极高的渗透压来捕获孢子核心中的水，导致皮层充分膨胀，核心失水率高。正是这个失水核心赋予孢子极强的耐热性。3.在微生物培养过程中引起酸碱度变化的几种可能的反应，并解释如何在微培养中保持酸碱度的稳定性。答：在培养过程中，由于营养物质的分解和利用，代谢物的形成和积累会导致酸碱度的变化。(第二张图片中的图片)它还与培养基的碳氮比有关。碳氮比高，培养后酸碱度显著降低，碳氮比低，培养后酸碱度显著升高。酸碱度调节：加入缓冲液-:磷酸二氢盐，K2HPO4为碱性，KH2PO4为酸性，仅在一定的酸碱度范围内调节(6.4-7.2)(2)大量产酸菌株可以通过添加碳酸钙进行调节。碳酸钙不溶于水，不会过度增加培养液的酸碱度，但能持续中和微生物产生的酸。(3)培养液中有天然的缓冲体系，如氨基酸、肽和镨是两性电解质，也起缓冲作用。(4)过酸：治疗症状-加入氢氧化钠和碳酸钠进行中和，治疗根本原因-加入适当的氮源：三氧化二钠、镨和氨水；增加通风。(5)高碱性：治疗症状-硫酸和盐酸中和，治疗根本原因-添加适量的33，360克碳源和脂类；减少通风。3.为什么抗生素法和菌丝体过滤法能浓缩营养缺陷型突变体？抗生素法(青霉素法):适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链之间的交联，并组织完整连续波的合成。野生B型处于正常生长和繁殖状态，因此对青霉素敏感，可被抑制或杀死。Camp缺乏型B在基础培养基上以休眠状态存活，从而达到浓缩camp缺乏型的目的。制霉菌素的方法适用于真菌，哪种可以与厘米混合？(第一)酒精会导致厘米损伤，因为它只能杀死生长和繁殖的真菌，所以.菌丝体过滤方法：基本上培养，野生霉菌，细菌的孢子可以萌发并生长成菌丝，而有缺陷的孢子一般不萌发或不能生长成菌丝，因此经过一段时间的培养后，用无菌脱脂棉或滤纸过滤出菌丝，收集滤液，重复几次后除去大部分野生型，这样.4.产蛋白酶枯草芽孢杆菌的遗传变异导致产量下降。你如何解决它？写下具体的实验计划。答：将一定量的枯草芽孢杆菌培养液稀释至一定浓度，涂在含有酪蛋白的基础培养基上。在37C培养一段时间后，取出培养基观察由单个答：机理：磺胺是对氨基苯甲酸的一种结构类似物，对氨基苯甲酸是叶酸的一种成分(磺胺类取代对氨基苯甲酸，干扰叶酸的合成，抑制反式甲基反应，导致代谢紊乱，从而抑制硼的生长)。磺胺的抑菌作用是由于许多细菌需要自己合成叶酸。磺胺对人体细胞没有毒性，因为人体缺乏二氢叶酸合成酶，这是一种由对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶，并且不能与外部供应的对氨基苯甲酸一起单独合成叶酸，而是必须直接使用叶酸作为生长因子(磺酰胺与正常代谢物竞争酶的活性中心，干扰酶的功能，从而干扰代谢的正常进行)。6.画出增长曲线。(第一)1.微生物的共同点是什么？哪个是最基本的？答：体积小，面积大(最基本)；吸收大，转化快；生长旺盛，繁殖快，适应性强，易变异；分布广，种类多。2.比较G和G- B在连续波结构、组成以及对溶菌酶和青霉素的敏感性方面的异同。结构成分溶菌酶青霉素G单层，结构简单，厚度大肽聚糖(90%)膦酸(10%)敏感的g在生长期对它很敏感。G-多层、复合、薄内壁层：肽聚糖外膜：脂多糖、磷脂、脂蛋白敏感的不敏感3.表型延迟？如何克服它？答：表型延迟：表型变化滞后？(第四)变化现象，分为分离延迟；变种人？在DNA复制和细胞分裂后，它变成纯合的，并且表型可以被表达。生理延迟；杂合子状态纯合子状态，仍不能显示(如camp缺乏型)可通过中间培养(CM，过夜培养)进行突变？稳定并克服表型延迟。4.培养B常用的斜面培养基是什么？简要描述准备程序。答：牛肉膏蛋白胨培养基(1)称重；按配方依次准确称取熔体：取少量水放入烧杯中，加入1%蛋白胨，加热溶解，加入0.5%牛肉膏，加热溶解，加入0.5%氯化钠，加热熔化，加水补充所需体积。调节酸碱度至7.6左右。加入2%琼脂固体并融化。(5)装入试管，堵塞，捆绑，高压灭菌，(6)搁置斜面(斜面长度不超过试管长度的一半)和(7)无菌检查：将灭菌后的培养基放入37C的温室中培养24-28小时，检查灭菌是否完成。5.啤酒酵母分批发酵的生长曲线是哪个时期？当菌株扩大时，种子是哪个时期产生的？为什么？答：延迟期、对数生长期、稳定期和衰退期。种子处于对数期。缩短延迟时间是有益的。6、应变下降的根本原因？预防措施？A.的自发突变。措施：减少通道数量；创造良好的文化条件；采用不易腐烂的菌种；采取良好的菌种保存措施4、应变下降的根本原因，预防措施。如何区分衰退和装饰？回答：根本原因：的自发突变。(2)传代次数的影响是负突变比例占优势，(3)培养条件)预防措施见上文。区分：下降：指随着细菌的不断生长，阴性突变菌株的数量与细菌总数成比例增加，最终导致菌株生产性能急剧下降的现象。(1)原始形态特征不典型，(2)生长率降低，(3)代谢产物产量降低，(4)寄主入侵减少，(5)抗性降低装饰：的遗传物质结构没有改变，而只是在转录和翻译水平上的表型变化。培养可以在相同的条件下继续观察后代。装饰特征：暂时的，不可遗传的，显示所有个体的行为。变异：遗传，一个群体中极少数个体的行为。走了？突变的特征？答：自发性非对应性稀有性(突变率10-6 10-9)，独立性可唤起性(增加10 10-5倍)，稳定性可逆性(原营养性答：人体很小，可以通过细胞过滤器(0.22微米)。它可以在电子显微镜下看到。它没有细胞机制。主要成分钠、镨、钒只含有一种核酸。DNA或RNA没有核糖体，即没有生产酶系统、Pr、NA合成酶系统。特定的活细胞被寄生。没有个体生长，也没有二元裂变。大规模的复制是通过组装“元素”来实现的，如钠、镨等。体外无生命生物大分子的存在对大多数抗生素和干扰素不敏感。7、什么？袁玉娥病毒的发病机制。答：袁玉娥病毒是一种Pr感染的粒子，只有Pr成分，称为PrP。细胞PrP - PrPc对蛋白酶敏感，没有聚集能力，而致病性PrP - PrPsc对蛋白酶有一定抗性，并能凝结成纤维组织。进入细胞后，PRP SC与PRP C结合形成PRP SC-PRP C复合体。PRP C的配置发生了变化，并被转换为PRP SC。PRP SC数量呈指数增长，潜伏期长，对中枢神经系统造成严重损害。细菌计数及其特征的估计(注P31)乳糖操纵子(P30)1、营养价值熔化温度()凝固温度()常用碳(%)琼脂不96401.52.0凝胶氮源35205122.伴侣水晶？它是在哪个b区生产的？A.伴晶：一些芽孢杆菌，如苏云金芽孢杆菌，在形成孢子的同时，会在孢子旁边形成称为伴晶的菱形或双锥形碱溶性蛋白质晶体(肉毒杆菌毒素)。它对约200种昆虫有毒性作用，可制成乙类杀虫剂。3.霉菌菌落的特征？答：质地疏松、絮状、网状、绵状、地毯状。(2)大的形态，分为局部生长(绿色，弯曲)和蔓延生长(根毛)(3)菌落干燥(孢子)(4)色彩丰富，正色和负色往往不一致，而中心和边缘往往不一致。各种霉菌在一定培养基上形成的菌落大小、形状和颜色相对稳定，这是分类依据之一。4.如何使用磷酸盐或碳酸钙来保持酸碱度的稳定性？答：磷酸氢二钾呈微碱性，磷酸氢二钾呈微酸性。两种物质等摩尔浓度溶液的ph值为6.8，其缓冲能力一般在6.47.2之间。磷酸氢二钾阳离子磷酸二氢钾钾阳离子OH- 磷酸二氢钾H2O(2)对于大量产酸菌株，添加碳酸钙进行调整。碳酸钙几乎不溶于水，不会过度增加培养基的酸碱度，但它能持续中和微生物产生的酸，同时释放二氧化碳，并将培养基的酸碱度降低到一定范围。5.单倍体酵母细胞？(表5)诱变后，获得了一系列突变菌株。为了分离和筛选一个菌株(Leu-)，请设计一个合理的测试程序。答：剔除野生型制霉菌素法检测鉴定(滤纸法)单倍体酵母细胞突变菌株被制备成细菌悬液，均匀地包被在完整培养基上，生长成单个菌落，以逐个检测的方式接种在完整培养基上，影印在基础培养基上，在合适的条件下培养一段时间，并在完整培养基上生长，而那些不在基础培养基上生长的是营养缺乏菌株。检测菌株并离心，用水洗涤以制备具有适当浓度的细菌悬浮液，与基础培养基均匀混合，倒入平板中，干燥并固化，在平板上分成几个区域，将浸有有色AA的滤纸片加入这些区域。培养后，那些在纸片周围有混浊生长圈的菌株被鉴定为有色的氨基酸营养缺乏菌株。6.v.p .先生实验原理。答：磁流变仪：用于检测葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。细菌代谢糖产生酸，酸碱度降低，甲基红指示剂从橙色(酸碱度=6.3)变为红色(酸碱度=4.2)大肠杆菌阳性：乳酸由乳糖产生，培养后的pH值为4.5大肠杆菌阴性：有机酸在清晨产生，然后转化为有机酸乙醇和丙酮酸。(2)伏安特性曲线用于测量细菌产生非酸性或中性终产物的能力7.增长曲线是什么？单细胞微生物的典型生长曲线有几个阶段？部门基础？答：生长曲线：将少量纯单细胞微生物接种于定量液体培养基中，取常规样品测量细胞数，以培养时间为横坐标，细菌数的对数为纵坐标，绘制出反映整个培养周期细菌数变化规律的曲线。它分为延迟期、对数期、稳定期和衰退期。根据增长率常数，即每单位时间的分裂数。8.为什么在诱变过程中要制备完全分散的单细胞或单孢子悬浮液？诱变放线菌时，应该处理孢子还是菌丝细胞？为什么？答：使每个细胞与诱变剂均匀接触，以减少表型延迟，避免不纯菌落的生长。单核无性孢子是最常用的。因为孢子在生理上处于休眠状态，所以大部分DNA包含在单核区域碱基中，从而减少了表型分离的延迟并提高了突变效果。培养基原理：目的明确适宜的营养物质浓度和比例适宜控制酸碱度控制氧化还原电位原料的经济来源灭菌处理1.青霉素的作用机制？答：原理：-内酰胺环的结构类似于肽聚糖单体五肽末端的D-Ala-D-Ala二肽，因此它能竞争性地抑制转肽酶的活性，抑制单体间的交联，形成缺陷性的连续波。青霉素对生长旺盛的G有明显的抑制作用，但对休眠期无抑制作用。它对葡萄糖的作用比葡萄糖强得多。2.筛选抗代谢结构类似物突变株的意义是什么？答：在含有高浓度最终代谢结构类似物的培养基中，野生型细胞不能生长，而已经从反馈抑制或反馈抗性中遗传释放的抗代谢结构类似物的突变株可以生长。在最终产物积累的条件下，突变菌株仍然可以连续合成该产物。因此，采用一定的方法筛选抗代谢结构类似物的突变菌株，获得最终产物的高产菌株。3.酿酒酵母的生活史。(与P15相同)4、剧毒噬菌体？生活史包括几个过程。答：噬菌体可以在宿主细胞中正常复制，并在感染宿主细胞后引起宿主细胞的快速裂解。吸附入侵增殖(钠复制、镨生物合成)组装(成熟)裂解(释放)5.缩短延误时间的措施答：利用遗传方法改变物种的遗传特征，以缩短延迟期；对数细胞作为种子；接种前后使用的培养基成分尽可能不要相差太大；接种量适当扩大6.计算生成时间(g)、繁殖代数(n)和增长率常数(r)甲：看到第七个了吗7、突变育种？例如，非电离辐射诱变剂电离辐射诱变剂烷化剂插入诱变剂间接引起碱基置换的诱变剂答：诱变育种：是指用物理或化学诱变剂处理微生物种群细胞，促使突变率显著提高，然后选择几个符合育种目的的突变菌株的方法。紫外线x射线、射线EMS、NTG吖啶色素、ICR 碱基类似物(5-BU等。)(直接原因：亚硝酸g : c-a 3360t；羟胺：t只引起g: c-a 3360t；烷化剂g:c-a3360t)8.什么是识别媒介？用EMB培养正常的大肠杆菌和沙门氏菌时，菌落现象是什么？为什么？答：鉴定培养基：用于鉴定不同类型微生物的培养基。将能够与