TCID50的测定方法_第1页
TCID50的测定方法_第2页
TCID50的测定方法_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验病毒感染力的滴定(TCID50的测定)滴度：半定量或定量测定时，将标本稀释成一系列后进行试验，显示阳性反应的最高稀释度为滴度。 根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱。 滴度(抗体的数量)越高，感染的机会越少。一、实验目的了解病毒感染力测定的一些常用方法，掌握一半细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法和意义。二、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50(50% lethal dose ) :用动物或鸡胚检测半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose ) :以鸡胚检测半数细胞培养物感染量tcid 50 (50 % tissuecultureinfectivedose ) :用细胞检测蚀刻斑形成单位(plaque forming unit，PFU ) :用细胞检测三、材料1、单层生长的细胞1根2、胰酶、吸球、吸管、生长液3，96孔细胞培养板4、取样器、枪口5 .病毒液(PRV )四、TCID50操作步骤1 .用离心管用MEM将病毒液稀释10倍，从10-1-10-6开始。2 .将稀释后的病毒接种到96孔培养板上，每稀释度纵向一列，共计8孔，每孔接种100l。3 .每个细孔加入100l细胞悬浊液，使细胞量达到23105个/ml。4 .作为正常细胞对照，以正常细胞对照为双纵列。 (100l生长液100l细胞悬浊液)每天观察，记录结果，一般需要观察57天。6、结果的计算采用先导-muench二氏法或Karber法。五、TCID50的计算方法1、导言-muench二氏法病毒液稀释度可产生CPE孔的数量无CPE孔数累计CPE厅所占比例CPE空穴数无CPE孔数10-180270100(27/27 )10-280190100(19/19 )10-37111191.6 (11/12 )10-4354640(4/10 )10-5171130.7(1/14 )10-6080210(0/21 )(CPE:Cytopathic effect细胞病变的影响)距离比率=(50%以上病变率的百分比-50%)/(50%以上病变率的百分比-50%以下病变率的百分比)=(91.6-50)/(91.6-40 )=0.8lgTCID50=距离比例稀释度对数之差高于50%病变率的稀释度对数=0.8(-1) (-3 )=-3.8TCID50=10-3.8/0.1ml意思：将该病毒稀释到103.8，接种100l，50%的细胞会发生病变。2、Karber法病毒液稀释度CPE出现的孔的数量产生CPE孔的比例10-188/8=110-288/8=110-377/8=0.87510-433/8=0.37510-511/8=0.12510-600/8=0lgTCID50=L-D(S-0.5 )l :最高稀释度对数d :稀释度对数之差s :阳性空穴比率合计lgTCID50=-1-1(3.375-0.5 )=-3
人人文库> 全部分类> 行业资料 > 管理策划

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论