固定化酵母细胞

.,酶的应用-酵母细胞的固定化,.,（一）固定化细胞技术,1.将酶或细胞固定化的方法,细胞固定化常用包埋法,酶固定化常用化学结合法或吸附法,包埋法,化学结合法,吸附法,原因,细胞个大，而酶很小，个大的细胞难以被吸附或结合；而个小的酶容易从包埋材料中漏出,.,2.固定化酶和固定化细胞的联系与区别,联系：,区别：,固定化细胞,对酶活性影响更小；,固定的是一系列酶能进行系列反应；,由于大分子难以通过细胞膜，固定化细胞应用有一定的限制。,技术操作容易，成本低，易回收；,都能反复利用，都能催化某些反应,.,4、思考：直接使用酶、固定化酶与固定化细胞各有什么优缺点？,.,5.固定化酶和固定化细胞常用的载体材料,明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等,其共同的特点是不溶于水的多孔性载体,.,（二）实验操作-酵母细胞的固定化技术,.,1、酵母细胞的活化,.,取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右使其活化,1、所用容器要大一些；防止活化液溢出容器外。2、要保证酵母菌的活性；3、物种要单一；4、注意水的用量。,活化操作注意点：,.,2、配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液,称取无水Cacl20.83g。放入200mL的烧杯中，加入150mL的蒸馏水，使其充分溶解，待用。,.,3、配制海藻酸钠溶液,操作：称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中.加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止,防止焦糊,应当注意什么问题？,.,加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的成败，一定要按照教材的提示进行操作。海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，成的凝胶珠不是圆形，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，凝胶珠颜色过浅、呈白色，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。,.,4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合,将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加人已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混台均匀，再转移至注射器中。为什么海藻酸钠溶液要冷却？,.,5、固定化酵母细胞,以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的Cacl2溶液中，观察液滴在Cacl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在Cacl2溶液中浸泡30min左右。,检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。,CaCl2溶液中浸泡一段时间，有利于形成稳定的结构,.,（三）用固定化细胞发酵,1、将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。2、将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25下发酵24h。