生物：《实验》复习课件1(湖南师大附中)幻灯片.ppt

,高三生物专题复习,实验专题第二讲,鉴定分离类实验,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质DNA的粗提取与鉴定叶绿体中色素的提取和分离,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,一、实验原理：1.可溶性还原糖斐林试剂砖红色沉淀2.脂肪苏丹橘黄色脂肪苏丹IV红色3.蛋白质双缩脲试剂紫色反应,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,二、实验材料选用：1.可溶性还原糖含糖量较高，颜色较浅或近于白色的植物组织2.脂肪的鉴定富含脂肪（植物油）的种子,如花生、核桃、蓖麻等的种子3.蛋白质的鉴定豆浆、鸡蛋清稀释液。,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,三、试剂：1.斐林试剂A液质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液B液质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液2.双缩脲试剂A液质量浓度0.1g/mL的NaOH溶液B液质量浓度0.01g/mL的CuSO4溶液3.苏丹或苏丹,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,四.注意：1.斐林试剂与双缩脲试剂的异同?（1）相同点:（2）不同点:,都由NaOH和CuSO4组成,用途不同CuSO4溶液的浓度不同使用原理不同使用方法不同颜色反应不同,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,四.注意：,2.反应过程中出现的颜色变化及其原因分别是什么？用斐林试剂鉴定还原性糖的实验浅蓝色棕色砖红色（沉淀）双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验无色浅蓝色紫色,检测生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质,四.注意：,3.使用双缩脲试剂时为什么B液只能加34滴而不能过量？若加入过量的试剂B，CuSO4在碱性环境中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀，会遮盖实验中所产生的紫色，影响观察的效果。,DNA的粗提取与鉴定,阅读教材p54-561.提取DNA的方法2.以文字和箭头的形式表示DNA在不同NaCl中的溶解度，获得较纯的DNA的过程,DNA的粗提取与鉴定,一、提取DNA的方法:1.DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。,2mol/L的NaCl溶液使DNA充分溶解,使杂质析出0.14mol/L的NaCl溶液使DNA析出,使杂质溶解。,DNA的粗提取与鉴定,一、提取DNA的方法:2.DNA不溶于酒精.但细胞中的某些蛋白质溶于酒精.利用这一原理.可将DNA与蛋白质进一步分离.3.DNA与杂质对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同.蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响.大多数蛋白质不能忍受6080的高温,而DNA在80以上才会变性.洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没影响。,DNA的粗提取与鉴定,二、DNA的鉴定在热水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。,三、实验材料的选取选用DNA含量相对较高的生物组织,DNA的粗提取与鉴定,四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液,细胞在低浓度溶液中吸水胀破,鸡血细胞液中加入蒸馏水,玻棒搅拌,过滤后收集滤液,洗涤剂瓦解细胞膜,切碎的洋葱中,加入洗涤剂和食盐搅拌、研磨,过滤后收集研磨液,DNA的粗提取与鉴定,四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液,2、去除滤液中的杂质,DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。,DNA对酶的耐受性。,DNA对高温的耐受性。,DNA的粗提取与鉴定,过滤含有DNA的氯化钠溶液,DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。,滤液中加入2mol/L的NaCl溶液,溶解DNA,过滤除去不溶杂质,加蒸馏水,调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA,滤取含DNA的粘稠物,加2mol/L的NaCl溶液溶解DNA粘稠物,DNA的粗提取与鉴定,滤液中加入嫩肉粉，反应1015分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。,DNA对酶的耐受性。,DNA对高温的耐受性。,滤液放入6075的恒温水浴中保温，反应1015分钟，使蛋白质沉淀而DNA分子未变性，再将DNA与蛋白质分离。,DNA的粗提取与鉴定,四、实验的过程1、破碎细胞，获取含DNA的滤液,2、去除滤液中的杂质,3、DNA的析出与鉴定,在含有DNA的氯化钠溶液中，加入等量、冷却的95%酒精（溶解蛋白质等杂质），静置23分钟，溶液中出现白色丝状物，玻棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。,小结：DNA的粗提取与鉴定,1.三次过滤,过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液,过滤含黏稠物的0.14mol/LNaCl溶液,过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液,获得含核物质的滤液,获得纱布上的粘稠物,获得含DNA的滤液,2.两次沉淀析出,DNA在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低,DNA在冷却的95%的酒精中能沉淀析出,小结：DNA的粗提取与鉴定,3.两次加蒸馏水,使血细胞破裂,降低NaCl浓度使DNA析出,小结：DNA的粗提取与鉴定,归纳-某些物质的鉴定,斐林试剂,双缩脲试剂,苏丹、苏丹,二苯胺,先混匀再加入、水浴加热,先加入A液，再加入B液,染色,混匀水浴加热,砖红色沉淀,紫色物质,橘黄色、红色,蓝色,归纳-某些物质的鉴定,其他物质鉴定:,淀粉尿糖二氧化碳氧气等,实验原理：1.提取色素-丙酮。叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中。2.分离色素层析液。叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同。,叶绿体中色素的提取和分离,注意：1.色素提取和分离实验中对材料的处理及其意义2.滤液细线的画法3.层析方法4.实验结果,叶绿体中色素的提取和分离,溶解度原理,丙酮、层析液,色素及色素带,杂质较少的DNA,不同浓度的NaCl溶液、冷酒