临床分子生物学检验--总

步骤4:第一，以引起遗传病的基因突变部位为目标，以DNA分子杂交为核心第二，以PCR技术为核心第三，以生物芯片为核心第四，以DNA排序技术为核心广义：分子标记包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物质临床分子生物学测试对象主要以核酸(DNA和RNA)为主基因组DNA是临床分子生物学检查中最常用的分子目标病原生物基因1。菌株鉴定：PCR-测序和PCR-DNA探针杂交；缩短测试时间2.确认病毒感染和病毒负荷：明确感染源，判断病情，监视疗效病毒分析：基因型变异引起其他临床症状。4.细菌耐药性监测和分子流行病学调查：多态性DNA的随机放大；指导选择控制病原体感染扩散的治疗方案。基因变异1。致病基因的分子缺陷2。线粒体基因突3。肿瘤相关基因单一遗传病1。致病基因结构发生了变化，影响了血红蛋白病、血友病、Duchenne肌肉营养不良等编码产物的数量和质量变化。2.在致病基因中，核苷酸三重重复序列高度扩张，如脆性x综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。基因多态性有以下用途：1 .基因定位与疾病相关性分析2。疾病诊断和遗传咨询3。多重遗传病研究4。器官移植安置和个人识别循环自由核酸检查，包括产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检查的自由DNA和自由RNA临床分子生物学检测技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检测技术可用于微生物感染诊断，感染性病原体分类，耐药性监测。分子生物学检查技术在临床上有助于遗传性疾病的早期预防、早期诊断和早期治疗。重要国际生物信息中心：1。美国国家生物技术信息中心(NCBI)2。欧洲生物信息学研究所(EBI) 3。日本国家遗传研究所(DDBJ)原生核酸数据库包括GenBank、EMBL和DDBJ有。蛋白质序列数据库包括SWISS-PROT、PIR、UNIPROT等。蛋白质x射线晶体三维结构数据库有PDB等。蛋白质数据库通常使用SWISS-PROT、PIR和PDB数据库。第二个数据库有很多，如人类基因组图谱库GDB、转录因子和结合站点库TRANSFAC、蛋白质结构族库SCOP等。* *乙型肝炎病毒核酸检测的一般技术：1。一般PCR技术2。荧光定量PCR技术3。盆地DNA技术4。核酸杂交技术5。混合捕获系统6。基因芯片技术*HBV基因型方法学：1，PCR-RFLP 2。PCR-RBD 3。ELISA 4 .基因芯片人乳头瘤病毒基因组结构：HPV DNA是双链闭环分子，基因组可分为初始区域(e)、后期区域(l)、长控制区域或上游控制区域或非编码区域三个部分。*HPV DNA检测和基因型：1。核酸杂交技术(主要是核酸印迹，原位杂交，杂交捕获等)。很多人使用Hc 技术、核酸分子杂交、PCR相结合的方法。具有很强的特异性，可以打字)2 .PCR技术* *(使用类型特异性引物的HPV快速打字，已成为目前HPV感染最常见的检测方法之一。目前常用通用引物-PCR(GP-PCR)和实时定量PCR。1.GP-PCR、基于不同HPV亚型的通用保留序列设计的通用引物、HPV DNA的广泛光谱放大、高灵敏度，可以检测10-400份HPV病毒的含量。基于GP-PCR的嵌套PCR和嵌套多PCR检测HPVDNA。提高检测灵敏度和多重感染率。实时定量PCR方法进行HPV DNA定量和快速检测。商业产品现在是E6和E7 mRNA可以检测到。HPV16、18、31、33和45打字。检查灵敏度高，但设备昂贵，操作麻烦，不适合宫颈癌的大规模检查。)3 .基因芯片技术(基因芯片执行HPV分类和多感染诊断，适合高吞吐量HPV筛选)4。流动荧光液芯技术5。飞行时间质谱的临床意义：(a)宫颈疾病风险预测(b)疗效评价和术后随访(3)预防和疫苗开发* *在HIV-1基因组中，gag、pol和env是编码病毒核心蛋白(gag)、聚合酶(pol)和外膜蛋白(env)的结构基因。Vpr、rev、Vif、tat、vpu/vpx、nef等6个基因作为调节基因编码调节蛋白和辅助蛋白。核酸序列依赖性扩增(NASBA)是一种等温扩增RNA技术，用于直接扩增单链RNA特异性序列，合成cDNA，在等温条件下扩增体外序列特异性核酸。NASBA需要AMV逆转录酶、核糖核酸酶h、噬菌体T7RNA聚合酶共同作用完成。NASBA分为非循环相(模板RNA和引物互补)和循环相(转录反义RNA和引物互补)流感病毒核酸检测：主要包括RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、基因芯片、反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)。结核分枝杆菌核酸检测： 1.pcr 2。real-time PCR 3。PCR-RFLP 4。线性探针杂交(LPA) 5。链替代放大技术(SDA) 6。结核分枝杆菌直接试验扩增(AMTDT) 7。基因芯片技术8。GeneXpert全自动组合检测平台结核分枝杆菌耐药性检测：(1)DNA测序(2)PCR-SSCP(3)PCR-RFLP(4)PCR-RDB(5)淋球菌核酸检测： 1。PCR 2 .实时荧光定量PCR技术3。连接酶链反应4。甚至替代放大技术(SDA)淋球菌主要耐药基因：(1)gyrA和parC基因(2)pen A，ponA基因(3)porB基因(4)Mtr系统调控基因(5)erm基因用于淋球菌耐药检测的分子生物学技术： (1)DNA测序(2)PCR-SSCP (3)PCR-RFLP (4)基因芯片技术*医院细菌感染的一般分子生物学检查技术： 1。脉冲场凝胶选择(PFGE)被认为是菌种分子打字的“黄金标准”。2 .PCR-RFLP 3。扩增限制片段长度多态性分析(AFLP) 4。重复序列PCR 5。随机扩增多态性DNA技术6。多部位测序打字白色念珠菌的分子生物学检查：1 .PCR一般PCR、即时PCR、巢状PCR和多重PCR等2。PCR- dot hybrid 3。4，包括RFLP、快速分布多分类多态性分析(RADP)、电泳核型分析等。AP-PCR 5 3。DNA序列分析6。基因芯片技术新生隐球菌的分子生物学检测：1 .PCR 2 .dot hybridization 3 .PCR-RFLP沙眼衣原体的分子生物学检查：1。PCR 2 .连接酶链反应3。DNA序列分析肺炎衣原体的分子生物学检查：PCR、实时荧光定量PCR技术、嵌套PCR和竞争PCR肺炎支原体分子生物学检查：1 .PCR 2 .核酸杂交，探针有特定的DNA片段探针，合成寡核苷酸探针，整个DNA探针。常见的斑点杂交。Pcr-RFLP梅毒螺旋体的分子生物学检测：1 .PCR 2 .核酸杂交3。PCR-RFLP分子生物学检查早期诊断患者梅毒感染，及时治疗，防止疾病恶化和扩散。这也是耐药基因分析和流行病学研究的首选方法。弓形虫DNA主要是染色体DNA、线粒体DNA和细胞质DNA利用分子生物学技术检测弓形虫的主要基因，包括B1基因、P22基因(SAG2)、P30基因(SAG1)、P43分生检测：1。PCR主要集中在B1基因和P30基因的检测上。2.斑点杂交-球蛋白合成障碍性贫血的分子生物学测试1。PCR 2 .Southern blotting hybridization 3。AS-PCR 4。SSCP 5.gap-PCR-球蛋白生成障碍贫血的分子生物学检查：PCR-RDB、PCR-RFLP、基因芯片、PCR-ASO、AS-PCR血友病b的分子生物学检查：直接检测南方腹胀杂交、DNA测序、基因芯片和毛细管电泳。间接检测方法包括RFLP、SSCP、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、双脱氧指纹图谱、变性高效液相色谱(DHPLC)。脆性x综合征的分子生物学检查：(1)南方蓝裂(2) PCR (3)微卫星序列分析通过分子诊断FMR-1基因突变来判断患者，筛选携带者肿瘤相关基因：肿瘤基因、抑癌基因、细胞周期调控基因、凋亡基因、细胞基因组稳定性基因维持等。细胞周期调节基因：周期蛋白(cyclins)、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)、CDK抑制因子(CKIs)、细胞周期检查点等其他蛋白质凋亡相关基因可分为促进细胞凋亡基因、抑制细胞凋亡基因和在细胞凋亡过程中表达的基因三类。P53是在肿瘤形成和发展方面研究得最好的肿瘤抑制基因，大部分肿瘤都伴随着p53基因的突变。乳腺癌(第17条染色体的长臂)的发生、发展密切相关的基因是BRCA1、BRCA2、TP53、c-erbB2、c-Myc、P53、Bcl-2、BAX、iASPP乳腺癌的分子生物学检查：1 .雌激素受体(ER)和孕酮受体(PR)检测(免疫组织化学)2。c-erb-2/HER2检测(免疫组织化学，荧光原位杂交)3。PS2检测4。Ki67检测5。乳腺癌复发基因检测(DNA microset阵列技术，多基因RT-PCR定量检测技术)(70基因检测方法，21基因检测方法)遗传性大肠癌相关基因：结肠腺瘤性息肉病(APC)基因、DNA错配修复(MMR)基因、微卫星异常微卫星异常主要表现为微卫星不稳定性(MSI)。微卫星异型损耗(LOH)。大肠癌的分子生物学检查：1 .HNPCC的筛选2。微卫星异常检测3。APC基因突变检测4。DCC基因突变检测5。DNA甲基化检测6。大肠癌个体化治疗的相关检测白血病相关基因突变：C-KIT、FLT3、核仁磷酸蛋白(NPM)、N-RAS、NOTCH1白血病相关基因表达异常：WT1，ho X11，白血病融合基因。WT1可以作为不伴随某些分子异常的AML小残留白血病(MRD)的理想检测指标白血病的分子生物学检查：FISH，PCR，RT-PCR，实时定量PCR(FISH)适用于多种临床标本，但敏感度低于PCR，主要用于新诊断和复发的检测。)，以获取详细信息线粒体12SrRNA基因的A1555G和C1494T突变是引起氨基糖苷类抗生素耳毒性的主要分子致病基础。TRNASer(UCN)T7511C等突变与非综合征耳聋有关。像trna leu(ur)a 3243g这样的突变会引起综合征耳聋。听觉障碍相关的mtDNA突变检测：1 .PCR-RFLP 2。DHPLC 3 .DNA测序4。基因芯片与LHON(Leber遗传性视神经病变)相关的mtDNA突变部位被检测为PCR-RFLP、PCR-SSCP、DHPLC、DNA测序、荧光定量PCR、AS-PCR、基因芯片等trna leu(ur)a 3243g仍是世界上唯一已知的线粒体糖尿病病原突变线粒体糖尿病的分子生物学方法：PCR-DHPLC、PCR-RFLP、PCR-测序、荧光定量PCR、基因芯片等。染色体结构异常类型包括缺失、重复、逆位、背臂染色体、环染色体、易位等。染色体疾病常用的分子生物学检测技术：FISH、MLPA、CGH、非破坏性产前染色体疾病分子生物学检测技术与药物相关的基因分类：与药物目标相关的基因、药物代谢酶基因(CYP450，N-乙酰转移酶)、与药物副作用相关的基因移植前遗传诊断(PGD):将PCR和相关技术、多色荧光原位杂交、全基因组扩增和基因芯片