第3次课 天然产物研究实验室技术1(提取).ppt

天然产物研究实验室技术,NaturalProductChemistry,生物科学与工程学院生化与分子生物学,2020/5/31,2,要求掌握的内容,1、中药或民族药物防病治病的物质基础是天然药物中的活性成分；2、溶剂提取法的基本原理：相似相溶原理；3、掌握常用溶剂的极性大小及各自的特点；4、掌握溶剂极性梯度系统分离法；,2020/5/31,3,5、掌握两相溶剂萃取法的原理及影响因素；6、掌握分配色谱、吸附色谱、凝胶色谱和离子交换色谱的工作原理7、掌握提取分离过程中人工修饰物的常见条件和因素。8、天然产物结构鉴定方法,NaturalProductChemistry,CollegeofBiologicalSciencesandEngineering,NaturalProductChemistry,CollegeofBiologicalSciencesandEngineering,NaturalProductChemistry,CollegeofBiologicalSciencesandEngineering,2020/5/31,7,概述,一、提取分离的意义：,2020/5/31,8,二、提取分离的前期工作,2020/5/31,9,三、综合运用多种分离方法和手段,先运用不同溶剂提取分离，将主要成分或易分离的成分或有效部位提取出来，并结合简便有效的化学、色谱及生物检测手段指示追踪分离；对于含量低、活性高的成分则可通过柱色谱(CC)、制备薄层色谱（PTLC）、高效液相色谱（HPLC）等方法分离。,2020/5/31,10,非洲卵叶美登木(Maytanusovatus)KB细胞为导向美登碱(maytansine)广西美登木(M.guangxiensis),2020/5/31,11,第三章,（1）概述：成分复杂糖类、蛋白质、脂类、叶根素、树脂、鞣质、无机盐等（多为无效成分）生物碱、萜类、黄酮、香豆素等次生代谢产物含量低，但生物活性广泛。,1.有效成分的特征,2020/5/31,12,麻黄（Ephedraequisetina）,左旋麻黄素（l-ephedrine）止咳平喘,2020/5/31,13,甘草（Glycyrrhizauralensis）,甘草酸(glycyrrhizicacid)抗炎、抗过敏、治疗胃溃疡,2020/5/31,14,第三章,（2）生物活性多样性1.研究历史悠久：吗啡、毛地黄毒苷、麻黄碱，利血平是早期从民间药物中开发出来的；2.植物粗提物的活性优于单一成分（成分间的协同作用），说明复方研究的重要性。,2020/5/31,15,第三章,（3)有效成分可变性影响有效成分含量的因素有：植物器官、植物生长环境、生长季节、海拔等；采收、干燥、储存和提取分离方法对有效成分的含量也有影响。,1文献2系统预试化学成分种类3提取溶剂（根据目的成分选择）水（鞣质、糖类、蛋白质）冷水、热水HCl、NaOH成盐溶出醇（乙醇、甲醇）95%alkaloids60-70%皂苷、黄酮苷40-50%强心苷丙酮、乙酸乙酯、氯仿等（苷元）,提取,4提取方法（根据提取目的、要求和条件选择）冷浸法（3-4次）渗漉法：热不稳定物、可按极性梯度提取煎煮法（3-4次）回流提取（3-4次）连续回流提取法超临界流体萃取超声波提取微波提取,NaturalProductChemistry,CollegeofBiologicalSciencesandEngineering,NaturalProductChemistry,CollegeofBiologicalSciencesandEngineering,粗分,细分,二、分离1分类粗分（部位分离）细分（部位分组）单离（单体成分分离）,2方法色谱法（平面色谱、柱色谱、逆流色谱）结晶,平面色谱,薄层色谱TLC(ThinLayerChromatograph)功能：定性分析（预试、指导分离)对照标准品种类：硅胶G,GF254、RP-18、聚酰胺显色：通用碘、H2SO4/EtOH专属alkaloids,flavonoids,硅胶H-不含粘合剂；硅胶G-含煅石膏粘合剂；硅胶HF254-含荧光物质，可用于波长为254nm紫外光下观察荧光；硅胶GF254-既含煅石膏又含荧光剂.,实例：紫杉醇和三尖杉宁碱分离中的跟踪检测展开剂：二氯甲烷正己烷甲醇三乙胺（3.5:4.5:0.5:1）,注意事项：多元展开剂不能反复使用，须即配即用；严格控制组分比例；预饱和10min，减少边缘效应,制备薄层色谱PTLC（PreparativeTLC）功能：制备（达g级）1、吸附剂（adsorbents）材料：Silicagel尺寸：20*20,20*40cm厚度：0.5-2mm2、样品带手工、自动点样器样品带宽的解决方法：用极性流动相展开约2cm，使带变窄用带浓缩带的板子,3、流动相选择三角形法则4、样品的收集洗脱显色：定位转移洗脱,5、PTLC制备样品时引入的杂质粘合剂杂质指示剂Other(分解物)(Al2O3作吸附剂)解决办法：SephedexLH-20,6、TLC技术的发展HPTLC巨形板TLC不锈钢板(60*60cm)；厚度：5mm上样量10g带浓缩带TLC二维TLC多次展开（同方向）双向展开,加压薄层色谱OPLC（OverpressureLayerChromatography）又称OverpressureTLC(OPTLC)1、简介1979年，HPTLC吸收HPLC的某些特点：平面、细颗粒、蒸气相、恒流速,2、特点与