生物体内药物分析方法的选择及应用PPT课件

.1、生物体内药物分析方法及其应用，引言2。体内药物分析方法的设计和建立。方法确认(评估、确认和评价)。嘿。2，1.1生物样品分析是药代动力学研究的必要手段：分析化学是化学科学中的“眼睛”，而“眼睛”是获取大量信息的心灵“窗口”，定量分析定性分析(半定量)，1。引言源于化学的分析化学专业具有分析化学的基本概念和要求，不同于一般的药物分析，具有生物学的特点。3.生物样品中药物的分析和测定是定量描述药物体内过程和获得药代动力学参数的重要手段之一。方法类型和特点：体内药物分析方法可大致分为五大类：1。光谱分析2。色谱3。毛细管电泳。免疫测定5。同位素方法(.)。传统的分类方法：设定了各种方法的长度，是： HPLC-UV高效液相色谱-质谱联用技术，5、体内药物分析方法的特点：高灵敏度：受剂量限制，受生物利用度限制，低浓度和良好的特异性：生物内源性物质的干扰，体内新形成代谢物的干扰，少量样品：血液(血浆、血清、全血)、尿液、胆汁、唾液、汗液、乳汁、精液和粪便、组织和器官，6。快速方法：这不是一个专门的方法学研究，使用这种方法可以快速澄清药理学问题。可靠且可重复：药代动力学实验的不可重复性。药物有多种类型：需要各种仪器和技术手段。7.1.2.1光谱分析比色法紫外分光光度法：微分、导数、双波长和三波长荧光分光光度法，1.2.2色谱：高分离效率；高特异性的HPLC:具有广泛的应用范围。室温测试；样品预处理简单；流动相选择范围广；仪表自动化程度高的GC:化合物气化；载气种类很少；该方法灵敏，但受注入样品量的限制。TLC:的检测条件有限。毛细管电泳：分离效率高。胶束电动毛细管色谱结合高特异性毛细管区带电泳毛细管凝胶电泳毛细管等速毛细管电泳毛细管电色谱具有进样量少、检测条件受限的特点。同位素方法：的灵敏度高。弱特异性放射强度表明标记药物量(eq.ng/ml)同位素技术与其他分析方法相结合以提高特异性。1.2.4免疫测定：放射免疫测定酶免疫测定荧光免疫测定。10，(2)生物样品的药物测定方法生物样品中的药物测定，免疫学和微生物学方法。根据待测药物的性质，应选择特异性好、灵敏度高的测定方法。色谱包括高效液相色谱、气相色谱和色谱-质谱。在同时测定生物样品中多种化合物的情况下，液相色谱-串联质谱法和气相色谱-串联质谱法在特异性、灵敏度和分析速度上更具优势。放射性核素标记法应结合颜色法测定血药浓度，以保证良好的检测特异性。如果某些药物难以使用上述检测方法，可以选择免疫学或生物学方法，但必须确保其可靠性。放射免疫分析和酶标免疫分析具有一定的特异性和较高的灵敏度，但原药经常与其代谢产物或内源性物质发生交叉反应。应提供证据解释其特异性。生物方法(如微生物方法)往往能反映药效学的本质，但一般特异性较差。平行检查应尽可能采用高特异性的方法(如色谱法)。根据：临床前药代动力学研究技术指南(第二稿)(草案)，11，2。体内药物分析方法的设计和建立2.1体内药物分析方法设计的主要依据是2.1.1阐明分析方法设计的目的。临床药物监测：要求D.新药：试验的批准应根据SFDA发布的指导原则按照标准操作程序进行。信息应迅速获取。13、2.1.2了解待测药物的特性，并研究文献中药物的结构和理化性质？溶解度？稳定性？药物作用的药理学和毒理学机制生物样品：动物特性？组织器官？代谢药物体内剂量给药途径中有多少样品预处理方法(同一类化合物)干扰成分，14、2.1.3参考仪器和设备以及实验室条件文献？重复性？别人能做的事适合我们吗？实验室硬件建设与研究课题兼容吗？毒品就是毒品！它不是一般的化合物。我们应掌握和了解其功效、毒性机制、理化性质、未来临床应用等。只有加深理解，才能进行深入的代谢研究，包括药物代谢研究所采用的方法和技术。体内药物分析方法设计和建立的一般原则：方法确认(评估、确认和评价)生物样品测定的关键是方法的确认。方法学确认是整个药代动力学研究的基础。这是药代动力学研究与其他药理学和毒理学研究的区别。所有药代动力学研究结果都依赖于生物样品的测定，只有可靠的方法才能获得可靠的结果。通过对特异性、灵敏度、精密度、准确度和稳定性的研究，建立检测方法后，获得标准曲线后，在检测过程中应进行方法学质量控制，应制备配套的标准曲线，并确定质量控制样品，以保证检测方法的可靠性。“摘自：临床前药代动力学研究技术指南(第二稿)(草案)”。18，3.1名义解释：19，20、21，22标称浓度：真实浓度(真实浓度值；算术值)，如：配置溶液(1.3毫克/毫升)；标准曲线或质控中的XNG/MLFortifiltedSamples :已处理样品浓度标准：与测试物质(或根据测试样品复制的标准物质)完全相同。23，3.2体内药物分析方法的评价：1。选择性： FDA/FDA 2。线性范围和响应因子：S/F3。日间精度标准：S/F4。日内精度精度：S/F5。稀释积分：F6 .灵敏度：S/F7。回收(提取效率)F8。矩阵效应3360F9 .结转估价10 .稳定性：S/F11。相对保持力：24，3.2.1选择性：被测组分与内源性物质、试剂中的杂质、代谢物和其他干扰物质有良好的分离；必须证明被测物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。对于色谱分析，应调查至少6份来自不同来源的空白生物样品的色谱图、空白生物样品加对照物质(指示浓度)的色谱图以及用药后生物样品的色谱图。质谱分析的原理应关注分析过程中的介质效应。待测药物标准样品色谱图2。正常生物样品色谱图(空白)3。空白生物样品加待测药物的色谱图。给药后生物样品的色谱图，26，3.2.2线性范围和响应因子：必须在测试报告(论文)中建立至少6个浓度(n=/5)的标准曲线；应使用与待测样品相同的生物培养基；定量范围应涵盖所有要测量的浓度；不允许计算定量范围外未知样品的浓度。应使用空白生物样品建立标准曲线，但这一点不包括在计算中。标准曲线的相关系数标准曲线线性范围标准曲线，试验报告(纸)应提供：5。空白生物样品加受试药物(低、中、高浓度；N5)浓度通过反算标准曲线来确定。标准曲线线性范围内最低和最高浓度的样品色谱图。28，TABX。标准曲线反褶合药物。29，3 . 2 . 3日间精密度和准确度：3 . 2 . 4日间精密度和准确度：精密度和准确度，定义为百分比相对标准偏差(%RSD=(标准偏差)(平均值)100)，WasDetedFromInterperatedQcsampleconcentrations。Accuracyofthemethod，defined by percentrelativeerror(% RE=(standard observedconcentration-nominal concentration)(nominal concentration)100)，Precision AndAccuracy，30，精度：精度，31要求选择3种浓度的对照样品，同时检查方法的精密度和准确度。低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内。高浓度接近标准曲线的上限。在中间选择一个浓度。每批每种浓度至少应测定5个样品，至少应连续测定3个分析批次，以获得批次间精度。精密度用质量控制样品批内和批间的相对标准偏差(RSD)表示。相对标准偏差一般应小于15%，接近最低允许质量时相对标准偏差应小于20%。准确度一般应在85% 115%的范围内，并应在LLOQ附近的80% 120%的范围内。如果您每天测量一次并连续测量5次以获得日间结果，数据处理，34，35，36，3.2.5稀释完整性：您如何测量超出线性范围的样品？对于大于200纳克/毫升的样品，稀释：0500纳克/毫升，50纳克/毫升，10倍，处理和测量结果是否满足要求的：50纳克/毫升，37， 38，处理和测定结果是否满足：10ng/ml、39、3.2.6灵敏度：的置信限(10 ng/ml)，定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求满足3-5个半衰期或1/10-1/20 Cmax测定样品中的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%-120%范围内，相对标准偏差小于20%。应通过至少5个标准样品的测试结果来证明。最低检测浓度(X/ml)、最低检测量(X)、最低定量下限(lloq)。40岁。41、3.2.7回收率(萃取效率)，萃取回收率：应考察高、中、低浓度的萃取回收率，且结果应一致、准确、重现性好。低、中、高(3个浓度):回收率不低于70%(原规定)回收率不低于50%(已改变)、42，萃取回收率：43，方法回收率：低、中、高(3个浓度)添加量和检测量的比较，法定最低浓度，浓度。添加量回收率(ng/ml)(ng/ml)(ng/ml)(%)(平均值)，12345678910112131415，法定最低工资，2122232425262728293032333435，美国广播公司。44，3.2.8基质效应：当质谱用于体内定量药物检测时，应进行基质效应试验，以观察基质对药物测定的影响。对矩阵没有统一的解释，矩阵曾被称为“分析物的环境”，即除了索引书中的分析物之外的所有成分。就血清胆固醇(Chol)的测定而言，它是指血清中除Chol以外的所有成分及其理化性质。基质效应对临床化学分析的影响越来越受到重视。当人工制备的参考物质用于酶动力学测定时，首次发现了这一点。根据NCCLS文件的定义，基质效应是指：(1)样品中除分析物以外的其他成分对分析物测量值的影响。(2)基质干扰分析方法准确测定分析物的能力。广义而言，基质效应还应包括已知的干扰物(如胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等)。是Chol测定中的干扰物)，但目前，基质效应仅限于未知或不确定物质或因素(如粘度、酸碱度等)的影响。)在生物材料中。降低基体效应的研究方向仍有参考价值：改进室内质控样品；(2)改进仪器设计和试剂组成；(3)选择方法和方法参数，使其更具适应性和易于掌握，且对制剂基质(如标准溶液、室内质控样品和质控材料)的准确性不敏感。嘿。47，矩阵因子(MF；基质因子):峰面积(分析样品)生物培养基样品的处理(强化样品：)待测药物的添加测定分析样品3360标准样品测定(两种测定方法的药物浓度相等)，48、ISadjustedMatrixFactor(由内标校正的基质因子):基质因子由色谱峰面积的峰面积计算。由内标校正的基质因子通过色谱峰面积比计算。比率(药物/信息系统)(强化样品)比率(药物/信息系统)(分析样品)(两种方法的药物浓度相等)矩阵因子为1，表明药物测定不具有矩阵效应。矩阵效应影响范围(矩阵因子；由内标校正的矩阵因子)在一定间隔内是可接受的。(0.8-1.2)，49岁。50，3.2.9结转评估。在方法评估中，测试最高线性浓度(例如1000ng/ml)后，必须测试试剂空白样品以评估残留。在样品的峰值时间(RT)，相应的信号可能出现在试剂空白样品中，即LLOQ的百分比是多少？LLOP :1.0 ng/ml；验收：0.8-1.2纳克/毫升(1.0纳克/毫升的20%)；当注入高浓度样品时，分析系统中会有“携带污染”。当“污染”达到什么程度时，分析方法是可以接受的；分析