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文档简介
1、基因工程的基本操作程序,2、原核细胞的基因结构、原核细胞基因、编码区域(编码序列):蛋白质的合成,即编码蛋白质的能力,非编码区域(调节序列):位于编码区域上游和编码区域下游的DNA序列不能指示蛋白质的合成,而是控制基因信息表达的核苷酸序列在调节顺序中识别和组合结合部位。转录开始后,RNA聚合酶沿着DNA分子移动,与DNA分子的一条链合成模板RNA。4,真核细胞的基因结构,与原核细胞相比,真核细胞的基因结构的主要特征是有符号区有间隔,不连续。也就是说,可以编码蛋白质的序列被分为不能编码蛋白质的序列,成为断裂的形式。其中,能编码蛋白质的序列称为埃克森,一般不能编码蛋白质的序列称为内含子。5,真核细胞的基因结构,真核细胞基因,编码区域(间隔,不连续性),埃克森:能够编码蛋白质的DNA序列内含子:不能编码蛋白质的DNA序列,非编码区域:与原核生物功能相似的启动子,终结者,6,原核细胞(2)没有翻译的基因,例如rRNA基因或rRNA基因。(。(3)无法转录的DNA片段:基因操纵。8,启动子和终止子,启动子在非编码区域紧靠转录起点,用于调节基因信息表达的脱氧核苷酸序列,引导RNA聚合酶与正确基因部位的结合,从一开始就沿着编码区域进行转录。终止符是在未编码区域接近转录末端,用于调节基因信息表达的脱氧核苷酸序列,它可以干扰RNA聚合酶的运动,从DNA模板链上脱落,终止转录。9,基因工程的基本操作过程,10,基因组库和部分基因库,基因组库,部分基因库,11,基因组库和部分基因库,12,cDNA合成过程,第一阶段,逆转录酶以RNA为模板合成一单链DNA,从而互补RNA第二阶段,核酸酶h在RNA-DNA杂交分子中分解RNA链,使其成为单链DNA。第三步是以单链DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,合成另一个互补的DNA链,形成双链DNA分子。13,使用PCR技术放大目标基因,原理:DNA双链复制前提:必须有用于合成引物的已知目的基因的脱氧核苷酸序列。14,获得了目标基因,在基因库中使用PCR技术进行化学合成,15,表达载体的构建,表达载体的构成基因启动子末端基因,16,基因的特征:来自动物的目的基因中存在因子,不能用于转基因植物。因为与动物的内含子系统和植物不同,植物不能切割动物基因的人体,只能使用该基因的cDNA。如果基因的产物是糖蛋白,那么在原核细菌中表达该基因的蛋白质可能没有天然活性。糖蛋白的糖链被添加到内质网和高尔基,因为细菌没有这样的小器官。(2)选择强力启动子或组织特异性启动子。启动子强、弱,选择强的启动子可以提高转录活性,增加基因产物的数量。要想让基因在生物的特定组织中表达,例如只在植物的种子中表达,就必须选择在种子中特别表达的启动子。(3)要有抗生素基因等选择标记基因,才能选择真正的转基因生物。17、受体细胞(植物细胞)、农杆菌转化基因枪法花粉管途径法、18、受体细胞(动物细胞)、微注、19、受体细胞(微生物细胞)、Ca2处理、
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