附录4　常用的消毒灭菌操作方法.pptx

附录4常用的消毒灭菌操作方法,沫若中学刘建英,一、无菌技术,1.概念,无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,阅读“无菌技术”讨论回答下列问题：,（1）获得纯净培养物的关键是。,防止外来杂菌的入侵,（2）.无菌技术包括：,对实验操作空间、操作者的衣着和手进行和；,清洁,消毒,将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行；为避免周围微生物污染，实验操作应在附近进行；(4)避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相。,灭菌,酒精灯火焰,接触,思考:无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？,防止感染实验操作者。,2.目的,防止外来杂菌的入侵；有效避免操作者自身被微生物感染。,是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，从而达到完全无菌的过程。,利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。（不包括芽孢和孢子）,二.消毒与灭菌的概念及两者的区别,2、灭菌的定义：,、消毒定义：,3、消毒与灭菌的比较,较为温和,强烈,部分生活状态的微生物,全部微生物,不能,能,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min(牛奶）3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒（石炭酸或煤酚皂）,（一）消毒的操作方法：,三.常用的消毒与灭菌的方法,是在干燥环境下用高温杀死细菌和细菌芽孢的技术。用于不能耐受湿热蒸气、不能用高压蒸气灭菌的物品，如必须保持干燥的化学物品，有刃器械如刀、剪之类，无水的油剂、油膏、甘油等。,1.干热灭菌法,（二）灭菌的方法：,一般有火焰灭菌法（灼烧灭均）和干热空气灭菌法。,（1）火焰灭菌法（灼烧灭菌）是指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料(如金属、玻璃及瓷器等)物品与用具的灭菌，不适合药品的灭菌。,思考：对接种环灭菌时要用酒精灯的哪一层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位？,充分燃烧层,（2）、干热空气灭菌：,是指用高温干热空气灭菌的方法。该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂(如油性软膏机制、注射用油等)和耐高温的粉末化学药品的灭菌，不适合橡胶、塑料及大部分药品的灭菌。,操作过程：见书85页,思考：利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？,避免妨碍热空气流通。,2、高压蒸气灭菌：,灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在100kPa的压力下，锅内温度达121温度下维持15-30min，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。,操作步骤,（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。,（2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。,（3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。,（4）加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。,（5）到灭菌时间后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。,（6）将取出的灭菌培养基放入37温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。,思考：灭菌到时间后，切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零时才打开锅盖，其目的是什么？,防止容器中的液体暴沸出容器，造成污染,（1）待灭菌的物品放置不宜过紧。（2）必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。（3）灭菌完毕后，不可放气减压，须待灭菌器内压力降至0才可开盖，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢造成污染。（4）装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。,注意事项：,4.紫外线灭菌,法：指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸蛋白变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。,课堂小结,1、连线无菌技术的类型、方法及对象,课堂练习,2.采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀灭哪些部位的杂菌()A接种环、吸管、培养基、接种室B吸管、接种环、培养基、接种箱C培养基、接种环、吸管、接种箱D培养皿、吸管、培养基、双手,B,C,下课了,芽孢,芽孢:有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如