生物产品分析与检验PPT课件

.,1,第一章生物产品分析与检验基础知识,1.1常用玻璃器皿及仪器的使用一、常用玻璃器皿的使用1、容量瓶的使用容量瓶是用来准确测量容纳液体体积的量器，他是细颈梨形平底玻璃瓶，由无色或棕色玻璃制成，带有磨口玻璃塞，颈上有一标线。有5、25、50、100、250、1000、2000ml等多种规格。用于直接配制标准溶液和标准稀释溶液。,.,2,.,3,容量瓶的容量定义为：在20时，充满至刻度线所容纳水的体积，以毫升计。调定弯液面的正确方法是：调节液面使刻度线的上边缘与弯液面的最低点水平相切，视线应在同一水平面。使用容量瓶时应注意以下几点：1、检查瓶口是否漏水：加水至刻线，盖上瓶塞颠倒10次（每次颠倒过程中要停留在倒置状态l0s）以后不应有水渗出（可用滤纸片检查）。,.,4,2.洗涤的方法一般是先用自来水洗涤，蒸馏水洗净后就可以了，污染严重的可用铬酸洗液洗涤，然后用自来水和纯水洗净。3.用固体物质（基准试剂或被测样品）配制溶液时，然后用自来水和纯水洗净。应先在烧杯中将固体物质完全溶解后再转移至容量瓶中。,.,5,.,6,烧杯中的溶液倒尽后，烧杯不要直接离开搅棒，而应在烧杯扶正的同时使杯嘴沿搅棒上提12cm，随后烧杯再离开搅棒，这样可避免杯嘴与搅棒之间的一滴溶液流到烧杯外面。然后再用少量水（或其他溶剂）测洗烧杯34次，每次用洗瓶或滴管冲洗杯壁和搅棒，按同样的方法移入瓶中。当溶液达2/3容量时，应将容量瓶沿水平方向轻轻摆动几周以使溶液初步混匀。,.,7,.,8,再加水至刻线以下约1cm，等待12min；最后用滴管从刻线以上1cm以内的一点沿颈壁缓缓加水至弯液面最低点与标线上边缘水平相切；随即盖紧瓶塞，左手捏住瓶颈上端，食指压住瓶塞，右手三指托住瓶底，将容量瓶颠倒15次以上，每次颠倒时都应使瓶内气泡升到顶部；倒置时应水平摇动几周，如此重复操作，可使瓶内溶液充分混匀。,.,9,100mL以下的容量瓶，可不用右手托瓶，一只手抓住瓶颈及瓶塞进行颠倒和摇动即可。对玻璃有腐蚀作用的溶液，如强碱溶液，不能在容量瓶中久贮，配好后应立即转移到其他容器（如塑料试剂瓶）中密闭存放。,.,10,不能在容量瓶里进行溶质的溶解容量瓶不能进行加热，如果溶质在溶解过程中放热，要待溶液冷却后在进行转移。容量瓶只能用于配制溶液容量瓶用毕及时洗涤干净，塞上瓶塞。,.,11,2、滴定管的使用,滴定管是滴定操作时准确测量放出标准溶液体积的一种量器。管壁上有刻度线和数值，最小的刻度是0.1ml，0刻度在上，自上而下数值由小到大。滴定管根据造型有酸式滴定管和碱式滴定管2种。,.,12,酸式滴定管下端有玻璃旋塞，控制溶液的流出。盛装酸性溶液或氧化性溶液。碱式滴定管下端连有一段橡皮管，管内有玻璃珠控制溶液的流出。盛装碱性溶液或非氧化性溶液。,.,13,1）使用前的准备新拿到一支滴定管，用前应先作一些初步检查，初步检查合格后，进行下列准备工作：洗涤涂凡士林检漏滴定剂溶液的加入,.,14,（1）洗涤滴定管可用自来水冲洗或用细长的刷子蘸洗衣粉液洗刷，但不能用去污粉，也不要用铁丝做的毛刷刷洗。如果经过刷洗后内壁仍有油脂（主要来自于旋塞润滑剂）或其他能用铬酸洗液洗去的污垢，可用铬酸洗液荡洗或浸泡。,.,15,对于酸式滴定管，可直接在管中加人洗液浸泡，而碱式滴定管则要先拔去乳胶管，换上一小段塞有短玻璃棒的橡皮管，然后用洗液浸泡。无论用哪种方法洗，最后都要用自来水充分洗涤，继而用蒸馏水荡洗三次。洗净的滴定管在水流去后内壁应均匀地润上一薄层水，若管壁上还挂有水珠，说明未洗净，必须重洗。,.,16,（2）涂凡士林使用酸式滴定管时，为使旋塞旋转灵活而又不致漏水，一般需将旋塞涂一薄层凡士林。,.,17,（3）检漏检漏的方法是将滴定管用水充满至“0”,刻度附近，然后夹在滴定管夹上，用吸水纸将滴定管外擦干，静置1min，检查管尖或旋塞周围有无水渗出，然后将旋塞转动180，重新检查。如有漏水，必须重新涂油。,.,18,（4）装溶液加入滴定剂溶液前，先用蒸馏水荡洗滴定管三次，每次约10mL。荡洗时，两手平端滴定管，慢慢旋转，让水遍及全管内壁，然后从两端放出。再用待装溶液荡洗三次，用量依次为10、5、5mL.荡洗方法与用蒸馏水荡洗时相同。,.,19,荡洗完毕，装人滴定液至“0”刻度以上，检查旋塞附近（或橡皮管内）及管端有无气泡。如有气泡，应将其排出。排出气泡时，对酸式滴定管是用右手拿住滴定管使它倾斜约30，左手迅速打开旋塞，使溶液冲下将气泡赶掉；对碱式滴定管可将橡皮管向上弯曲，捏住玻璃珠的右上方，气泡即被溶液压出。,.,20,2）滴定滴定管应垂直地夹在滴定管应垂直地夹在滴定管架上。使用酸式滴定管滴定时，左手无名指和小指弯向手心，用其余三指控制旋塞旋转不要将旋塞向外顶，也不要太向里紧扣，以免使旋塞转动不灵。,.,21,使用碱式滴定管时，左手无名指和中指夹住尖嘴，拇指与食指向侧面挤压玻璃珠所在部位稍上处的乳胶管，使溶液从缝隙处流出。但要注意不能使玻璃珠上下移动，更不能捏玻璃珠下部的乳胶管。必须掌握三种加液方法：逐滴滴加；加1滴；加半滴。,.,22,滴定操作一般在锥形瓶内进行；在锥形瓶中进行滴定时，右手前三指拿住瓶颈，瓶底离瓷板约23cm.将滴定管下端伸人瓶口约1cm。左手如前述方法操作滴定管，边摇动锥形瓶，边滴加溶液。,.,23,3）滴定时注意的事项摇瓶时，转动腕关节，使溶液向同一方向旋转（左旋、右旋均可），但勿使瓶口接触滴定管出口尖嘴。滴定时，左手不能离开旋塞任其自流。眼睛应注意观察溶液颜色的变化，而不要注视滴定管的,.,24,溶液应逐滴滴加，不要流成直线。接近终点时，应每加1滴，摇几下，直至加半滴使溶液出现明显的颜色变化。加半滴溶液的方法是先使溶液悬挂在出口尖嘴上，以锥形瓶口内壁接触液滴，再用少量蒸馏水吹洗瓶壁。用碱式滴定管滴加半滴溶液时，应放开食指与拇指，使悬挂的半滴溶液靠入瓶口内，再放开无名指与中指。每次滴定应从“0”分度开始,.,25,若在烧杯中进行滴定，烧杯应放在白瓷板上，将滴定管出口尖嘴伸入烧杯约1cm。滴定管应放在左后方，但不要靠杯壁，右手持玻棒搅动溶液。加半滴溶液时，用玻棒末端承接悬挂的半滴溶液，放入溶液中搅拌。注意玻棒只能接触液滴，不能接触管尖。滴定结束后，弃去滴定管内剩余的溶液，随即洗净滴定管，并用水充满滴定管，以备下次再用。,.,26,4）读数读数时，可将滴定管夹在滴定管架上，也可以右手指夹持滴定管上部无刻度处。不管用哪一种方法读数，均应使滴定管保持垂直状态。读数时，视线应与液面成水平。视线高于液面，读数将偏低；反之，读数偏高。,.,27,对于无色或浅色溶液，应该读取弯月面下缘的最低点。溶液颜色太深而不能观察到弯月面时，可读两侧最高点。初读数与终读数应取同一标准。读数应估计到最小分度的1/10。对于常量滴定管，读到小数后第二位，即估计到0.01mL。,.,28,三、移液管的使用移液管是用于准确移取一定体积溶液的量出式玻璃量器，正规名称是“单标线吸量管”，习惯称为移液管。它的中间有一膨大部分，管颈上部刻有一标线，用来控制所吸取溶液的体积。移液管的容积单位为毫升（mL），其容量为在20时按规定方式排空后所流出纯水的体积。,.,29,.,30,（1）使用前的准备用洗净并烘干的小烧杯倒出一部分欲移取的溶液，用移液管吸取溶液510mL，立即用右手食指按住管口（尽量勿使溶液回流，以免稀释），将管横过来，用两手的拇指及食指分别拿住移液管的两端，转动移液管并使溶液布满全管内壁，当溶液流至距上口23cm时，将管直立，使溶液由尖嘴（流液口）放出，弃去。,.,31,（2）吸取溶液用移液管自容量瓶中移取溶液时，右手拇指及中指拿住管颈刻线以上的地方（后面二指依次靠拢中指），将移液管插入容量瓶内液面以下12cm深度。不要插入太深，以免外壁沾带溶液过多；也不要插人太浅，以免液面下降时吸空。左手拿洗耳球，排除空气后紧按在移液管口上，借吸力使液面慢慢上升，移液管应随容量瓶中液面的下降而下降。,.,32,当管中液面上升至刻线以上时，迅速用右手食指堵住管口（食指最好是潮而不湿），用滤纸擦去管尖外部的溶液，将移液管的流液口靠着容量瓶颈的内壁，左手拿容量瓶，并使其倾斜30o。稍松食指，用拇指及中指轻轻捻转管身，使液面缓慢下降，直到调定零点。按紧食指，使溶液不再流出，将移液管移入准备接受溶液的容器中，仍使其流液口接触倾斜的器壁。松开食指，使溶液自由地沿壁流下，待下降的液面静止后，再等待15s，然后拿出移液管。,.,33,注意的事项：在调整零点和排放溶液过程中，移液管都要保持垂直，其流液口要接触倾斜的器壁（不可接触下面的溶液）并保持不动；等待15s后，流液口内残留的一点溶液绝对不可用外力使其被震出或吹出；移液管用完应放在管架上，不要随便放在实验台上，尤其要防止管颈下端被沾污。,.,34,二、常用的仪器设备1、培养箱为方形或长形箱，以铁皮喷漆制成外壳，铅板做内壁，夹层充以石棉或玻璃棉等绝缘材料以防温度的扩散，内层底下安装电阻丝以加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。箱门双重，内有玻璃门，便于观察箱内标本，外为金属门。,.,35,2）操作方法与维护（1）先关箱门，接通电源。(2)箱内不应该放过热过冷之物，取放物品，应随手关闭箱门，维持恒温。（3）箱内可经常放入装水容器一只，维持箱内温度和减少培养物中的水分大量蒸发。（4）培养箱最底层温度较高，培养物不宜与之接触（5）定期消毒箱内，可每月一次。,.,36,2、超净工作台是一种局部层流装置，能在局部造成高洁净度的环境。应注意的事项：（1）超净台用三相四线380v电源。（2）使用前30min打开紫外灯（3）使用前10min将通风机启动。（4）操作时把开关按钮拔在照明处（5）操作区为层流区，物品放置不应妨碍气流正常流动,.,37,（6）操作者应穿洁净工作服，工作鞋，戴好口罩。（7）工作完毕后停止风机运行，把防尘帘放下。（8）使用过程中发现问题立即切断电源，保修理人员。（9）安装的地方远离有振动及噪声大的地方，以防止振动对它的影响（10）每36个月检查一下工作台的性能有无变化（11）搬运要小心。,.,38,3、显微镜1）光学显微镜的结构（1）光学部分,“5”，“10”的含义。,.,39,集光器位于载物台下方，可上下移动，起调节和集中光线的作用。反光镜装在显微镜下方，有平凹两面，可自由转动方向，将最佳的光线反射至集光器。,.,40,机械部分,.,41,普通生物显微镜,显微图象系统,生物显微镜(含摄影系统),数码生物显微镜,.,42,2）工作原理普通的光学显微镜利用目镜和物镜2组透镜系统放大成像，一般微生物学使用的显微镜有3个物镜，其中油镜对微生物的研究最为重要。3）试验程序安置调光源调目镜调聚光器低倍镜高倍镜油镜擦镜复原。4）显微镜的使用（1）观察前的准备,.,43,显微镜的安置距试验台边缘10cm左右。光源调节安装在镜内的光源可通过调节电压获得适当的亮度，若使用反光镜采集自然光可使用平面或凹面反光镜。双筒显微镜的使用根据个人情况，目镜间距可以调整，左目镜上一般配有屈光光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。,.,44,聚光器数值孔径值的调节聚光镜主要参数就是数值孔径，有一定的可变范围，一般聚光镜边框上的数字代表她的最大数值孔径，通过调节聚光镜下面可变光阑的开放程度，可以得到各种不同数值孔径，以适应不同物镜的需要。（2）显微镜低倍镜高倍镜油镜观察,.,45,（3）显微镜的处理及维护上升镜筒，取下载玻片使用时要十分爱惜，各部位不要随意拆卸，搬动显微镜时应一手托镜座，一手握镜壁，放于胸前以免损坏。显微镜放置的地方要干燥，以免镜片生霉，避免灰尘，在箱外放置不用时要用纱布等盖住镜体避免阳光直射远离热源。,.,46,4、高压蒸汽灭菌锅可用于培养基、生理盐水、废弃的培养物以及耐高温药品、纱布、剥离等灭菌。1）构造2）操作应注意(1)先加适量水（2）将待灭菌的物品放入到锅里（3）打开放气阀，放气35min，然后关闭放气阀，控制温度,.,47,（4）待压力降到0时打开放气阀（5）灭菌结束，打开水阀门，排进锅内剩水。3）灭菌工作状态检验方法（1）化学检验法（2）温度计检查法,.,48,第二节溶液的配制,一、溶液浓度的表示方法1、物质的量浓度指单位体积溶液中所含溶质的物质的量。每升溶液中所含溶质B的物质的量，称为B的物质的量浓度，简称浓度，以B表示或以方括号表示，常用单位为molL1。过去习惯称该浓度为体积摩尔浓度。CB=nB/V,.,49,2、物质的质量分数单位质量的溶液中所含溶质B的质量，或者说混合物中某一组分B的质量与各组分质量之和的比。WB=mB/m3、滴定度滴定度是指1mL标准溶液A（又称滴定剂）相当于被测组分B的质量，用符号TB/A表示：,.,50,TB/A=mB/VA式中：mB为被测组分质量；VA为标准溶液的体积。式中：mB为被测组分质量；VA为标准溶液的体积。TB/A的常用单位为gmL1。二、溶液的配制1、一般溶液的配制要求不是很准确，配制时用托盘天平称量，用量筒，量杯或烧杯量取，试剂溶解时有放热现象或以加热溶解时，应待冷却后再转入试剂瓶中。,.,51,应注意的问题1、用易水解的盐配制溶液时，需加入适量酸后，再加水或稀酸稀释。2、易腐蚀剥离的溶液，不能盛装在玻璃瓶中3、配制指示剂溶液时，用分析天平。4、经常使用的溶液，可配置成使用浓度是10倍的储备液。,.,52,2、标准溶液的配制方法1）直接配置法适合于基准物质配制标准溶液具备条件：（1）试剂的纯度高（2）物质的组成与化学式相符，（3）试剂稳定（4）摩尔质量尽可能大,.,53,2）间接配制法先配制近似浓度的溶液在标定的方法3、标准溶液的配制与标定的注意事项（1）配制用水要是蒸馏水或是离子交换水。（2）工作中使用的天平砝码，滴定管容量瓶及移液管需呀校正。（3）如果规定要用标定和比较2中方法测定时，不要略去任何一种误差不得大于0.2%（4）标准溶液规定为20标定之浓度为准（5）标定时所用基准试剂应符合要求-化学试剂分析纯级。（6）配制标准溶液浓度与规定浓度误差不得大于5%,.,54,第三节培养基的配制,以人工方法配制成的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，称为培养基。含有微生物所必须的碳源、氮源、无机盐、生长素、水分等还具有适宜pH、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。一、培养基的种类按物理状态分为固体、半固体、液体培养基；按组成成分分为天然、合成、半合成培养基；按作用分为基础、加富、选择、鉴别、厌氧及活体培养基。,.,55,1、基础培养基基本营养成分2、加富培养基在基础培养基汇总再加入葡萄糖、血糖、血清等物质。3、选择培养基根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学条件的抗性二设计的培养基。4、鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后发生某种变化从而鉴别不同种类的微生物,.,56,5、厌氧培养基将培养基与环境中空气隔绝，或降低培养基中氧化还原电势。6、活体培养基二、主要成分1、营养物质蛋白胨、肉浸汁、牛肉膏、糖类、血液、鸡蛋、动物血清、生长因子、无机盐类。2、水分3、凝固物质琼脂、明胶、卵蛋白、血清4、抑制物5、指示剂,.,57,三、培养基的制备1、称量药品2、溶解3、调pH4、融化琼脂5、过滤分装6、包扎标记7、灭菌,.,58,第四节无菌操作,一消毒与灭菌1、消毒用物理、化学或生物学方法杀死病原微生物称为消毒。只对细菌的繁殖体有效，对于细菌芽孢无效。2、灭菌杀灭物体中或物体上说有微生物的繁殖体和芽孢的过程称为灭菌。有物理灭菌法和化学灭菌法。3、防腐防止或抑制微生物生长繁殖的方法称为防腐。某些药剂在低浓度时是防腐剂高浓度时是消毒剂。,.,59,4、无菌及无菌操作无菌是指物体中没有活的微生物存在。防止微生物进入人体或物体的操作方法称为无菌及说或无菌操作。二、常用的灭菌方法1、加热灭菌是通过加热高温使菌体内蛋白质变性凝固，酶失活从而达到杀菌目的。1）干热灭菌法通过使用干热空气杀灭微生物的方法教干热灭菌法。1602h用于玻璃仪器、金属器皿的灭菌。,.,60,（1）灭菌前的准备玻璃仪器要进行正确包裹和加塞。（2）干燥箱灭菌物品不要摆放太密，不能和烘箱的内层底板直接接触，温度不要超过170，如果是烘烤玻璃仪器温度为12030min即可，温度降至5060才可打开箱门。此法不能用油蜡质包扎物品。2）湿热灭菌法A、巴氏消毒法B、煮沸消毒法C、间歇灭菌法D高压蒸汽灭菌法,.,61,2、过滤除菌法3、紫外线杀菌法杀菌最强的波段在240300nm以253.7nm最强，与DNA吸收光谱范围有一致，紫外线的穿透能力不强，。四、影响灭菌与消毒的因素1、不同的微生物对热的抵抗力和消毒剂的敏感性不同。2、灭菌处理剂量对微生物的影响3、微生物污染程度对灭菌的影响4、温度的影响5、湿度的影响6、酸碱度的影响,.,62,7、介质对灭菌的影响8、穿透条件的影响9、氧的影响五、微生物的接种和培养将微生物的纯种或含有微生物的材料转移到培养基上的过程叫微生物接种。微生物培养：经微生物接种后的培养基被放置在一定环境条件下，使微生物在培养基上生长繁殖。,.,63,1、微生物接种方法1）涂布法2）划线法3、倾注法4、点值法5、穿刺法6、浸洗法7、活体接种用于病毒培养,.,64,2、微生物的培养1）需氧培养2）厌氧培养,.,65,第五节生物产品分析的基本方法,物理分析法有密度法和旋光法方法化学分析法容量分析法和称量法仪器分析法一、滴定分析法1、滴定分析法原理,.,66,是将一种已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止，根据试剂溶液的浓度和消耗的体积，计算被测物质的含量。将滴定溶液从滴定管中加到被测物质中的过程叫做滴定。适合滴定分析的化学反应具备条件：（1）反应必须按方程式定量地完成，要求在99.9%以上（2）反应能够迅速地完成。（3）共存物质不干扰主要反应或可用适当的方法消除其干扰（4）有比较简便的方法确定化学计量点。,.,67,2、滴定分析法的分类1）直接滴定法2）返滴定法3）置换滴定法4）间接滴定法根据所利用的化学反应类型不同，滴定分析法可以分为：1）酸碱滴定法2）氧化还原滴定法（1）高锰酸钾法是氧化剂，其氧化能力和溶液的酸度有关。,.,68,在强酸溶液中能获得5个电子，在微酸、中性、或弱碱性溶液中获3个电子有MnO2生成在强碱中获得一个电子，故应该在强酸中滴定，用硫酸控制酸度，尽量避免用盐酸不用硝酸。高锰酸钾的优点：氧化能力强，应用广泛不需要另加指示剂。缺点：试剂中含有少量杂质，溶液不够稳定，能与许多还原性物质发生反应，干扰现象严重。（2）重铬酸钾法利用他在强酸性溶液中的强氧化性的氧化还原滴定法。在酸性溶液中Cr2O72-获得6个电子被还原Cr3+,.,69,优点：易提纯，是基准物质，可用直接法配制溶液溶液非常稳定，可长期保存。对应电对的标准电极电位比高锰酸钾的小，可在盐酸中测定铁。应用广泛，可直接、间接测定许多物质。缺点：反应速度慢，条件难以控制，需外加指示剂，另外重铬酸钾有毒，使用时注意废液的处理，以免污染环境。,.,70,（3）碘量法利用I2的氧化性和I-的还原性的氧化还原滴定法，即可测定还原性物质也可测定氧化性物质，还可测定一些非氧化还原性物质。根据所用的标准溶液的不同可分为直接碘量法和间接碘量法。直接碘量法以I2溶液为标准溶液可测定电极电位较小的还原性物质。间接碘量法以Na2S2O3为标准溶液间接测定氧化性物质。以淀粉为指示剂碘遇淀粉显蓝与温度，酸度I-密切相关。,.,71,3）配位滴定法4）沉淀滴定法以沉淀溶解平衡为基础的确定分析法（1）莫尔法以铬酸为指示剂，在中性或弱酸性溶液中，用AgNO3标定溶液直接滴定Cl-或Br-。Ag+Cl-AgCl（白色）2Ag+CrO42-Ag+CrO4(砖红色）,.,72,（2）佛尔哈德法用铁铵矾为指示剂的银量法。直接滴定法Ag+SCN-AgSCN白色Fe3+SCN-【Fe（SCN】2+（血红色）返滴定法在含有卤素离子的硝酸溶液中，加入一定量过量的AgNO3以铁铵矾做指示剂，用NH4SCN为标准溶液饭滴定过量的AgNO3。,.,73,（3）法扬司法用吸附指示剂指示终点的银量法称为法扬司法。吸附指示剂是一些有机燃料。3、滴定分析中的计算滴定分析计算是以化学反应中各物质的量之间的关系为基础的，因而标准溶液与被测物质在反应中的化学计量关系是解决一些列滴定分析计算的关键Aa+bBGg+hHnA:nB=a：bnb=b/anA,.,74,二、称量分析法1、方法原理及分类称量分析法是通过称量物质的质量来确定被测组分含量的一