血凝项目介绍参考幻灯片.ppt

目的和要求,血凝系统项目应用,临床基础知识的回顾熟悉不同项目的测试方法学、原理及临床应用了解检测系统的大体构成与意义,血管中流动的血液为什么不凝固破损的血管为什么能止血,生理状态下,凝血血栓,抗凝出血,凝血系统,血液凝固简称凝血，凝血系统包括凝血和抗凝两个方面，两者间的动态平衡是正常机体维持体内血液液体流动状态和防止血液丢失的关键。凝血是由系列凝血因子（已知的13个）参与复杂的生理过程。,三个阶段：第一阶段：凝血酶原激活物(凝血活酶)形成第二阶段：凝血酶形成期第三阶段：纤维蛋白形成期两个途径：内源性、外源性,凝血过程,血液凝血因子的特性,血液凝固机制,止血：由出血开始到出血停止的整个过程凝血：血浆形成纤维蛋白凝块的过程“瀑布”学说：凝血是一系列凝血因子依次相继被激活的过程，分为三个途径：内源途径：从因子XII激活到因子X激活外源途径：从因子III激活到因子X激活共同途径：从因子X激活到纤维蛋白的形成,内源性凝血途径（intrinsicpathway）是指由因子被激活到因子a-a-Ca2+-PF3复合物形成的过程。外源性凝血途径(extrinsicpathway)是指从因子释放到因子-a-Ca2+复合物形成的过程。是体内凝血的主要途径，也是发生止血血栓病理性改变的主要原因之一。,共同凝血途径(commonpathway)是指从F的激活到纤维蛋白形成的过程，它是内、外源性凝血途径后的共同凝血阶段。主要包括凝血酶生成和纤维蛋白形成两个阶段。,参与因子筛选试验外源,Ca2+PT内源,Ca2+APTT共同,Ca2+TT,抗凝及纤溶系统,正常抗凝及纤溶系统,（一）细胞抗凝,单核-巨噬细胞,吞噬清除,凝血过程有关物质和产物,体液抗凝,肝素,这种抗凝作用占体内总抗凝的50%60%,血液中存在多种抗凝物质及抗凝系统1抗凝血酶III（antithrombinIII，AT-III）AT-III灭活IIa、IXa、Xa、a、XIIa、激肽释放酶,最重要的生理性抗凝系统,纤维蛋白溶解系统（fibrinolysis，纤溶系统）,纤维蛋白或纤维蛋白原被纤维蛋白溶解酶水解的过程主要作用：分解纤维蛋白（原），清除血管内由于纤维蛋白沉积引起的阻塞，保持血流通畅,纤维蛋白降解机制（一）纤溶酶原激活1.内激活途径2.外激活途径3.外源激活途径（二）纤维蛋白（原）降解1.纤维蛋白原的降解2.可溶性纤维蛋白的降解3.交联性纤维蛋白的降解,血凝检测原理及项目应用,*,血凝的检测方法*凝固法：光学法A透射光度B散射光度法粘度法（磁珠法）*发色底物法*免疫学检测法,磁珠法检测原理交替变化的磁场使磁珠产生运动。另有两个垂直方向的线圈，利用电磁感应的原理，检测磁珠的运动。血浆如果不发生凝固，磁珠的运动振幅恒定。血浆发生凝固反应时，粘度增加，磁珠运动强度衰减磁珠运动衰减到一定程度（振幅变化50%），定为凝固终点。通过检测磁珠运动的相对变化，计算出凝固时间。,二、粘度法（磁珠法）原理：,纤维蛋白原,纤维蛋白,粘度增大,磁珠振幅衰减,传感器,记录下磁珠振幅衰减过程的时间（凝血时间）,优点：不受黄疸、溶血、乳糜脂等浊度标本影响,磁珠法检测原理,磁珠法特点1、完全消除黄疸、溶血、脂肪和混浊等干扰。2、结果精确，Fib可采用弱磁场，线性达到0.1-18g/L。3、感测磁珠的相对运动，振幅变化的50%计为凝固终点，不受原血浆粘度的影响。4、采用电磁场，不受磁场衰减因素的影响。,光学法检测原理通过血液凝固导致吸光强度变化来判断凝固终点的方法，又分为散射比浊法和透射比浊法。散射比浊法根据待检样品在凝固过程中散射光的变化来测定凝固终点的方法。透射比浊法根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来测定凝固终点的方法。,散乱光,光源,光源,透過光,透射光强度减少,(光学法),透射光,散射光,凝固反应的进行,凝固反应的进行,凝固反应的进行,凝固反应的进行,検出部,検出部,凝固学方法,纤维蛋白原,纤维蛋白,浊度增大,透光度降低,传感器,优点：耗材相对减少（磁珠）缺点：受黄疸、溶血、乳糜脂等浊度标本影响,一、光学法原理：,记录下浊度变化过程的时间（凝血时间）,双磁路磁珠法与光学法原理主要区别前者是检测血浆凝固过程中磁电信号变化后者是检测该过程中光信号的变化,免疫比浊法（透射比浊）,通过血浆中的抗原与乳胶试剂中特异性的抗体发生的凝集反应，导致测试杯内浊度发生改变，最终导致吸光度的改变，再通过700nm波长的测量，然后将吸光度的值转化为含量值。借助抗原抗体反应系统，检测反应终点吸光度变化值；只表示含量，不反映所检物活性。,发色底物法,产色底物能够裂解出产色基团，通过显色反应，检测吸光度变化，并通吸光度值转化为百分比活性，在这一过程中显色的深浅与AT-III活性成负相关。,待测物+显色剂,有色溶液,以溶液呈色的深浅判断其浓度,发色底物法基本原理,各检测项目的检测方法凝固法PT,APTT,TT,FIB(PT-Based&FIB-Clauss),FactorsII,V,VII,X,VIII,IX,XI,XII,ProteinC,ProteinS,APC-R,LAC,PCX,HPX发色底物法Anti-thrombin,Heparin(普通&低分子),PLG,PlasminInhibitor,ProteinC免疫比浊法D-Dimer,FDP,vWFAg,vWFAct,ProteinS,HS-CRP,SF-8100检测原理,凝固法（磁珠法检测）发色底物法（透射光比色检测）波长：405nm免疫比浊法：（透射光比浊检测）波长：700nm（540nm）,凝血检测检测方法测试原理临床应用临床意义,凝血项目检查测定注意事项,1所用试管必须洁净、干燥、无划痕。2应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿采血。3采血要顺利，抗凝要充分，采血后应仔细检查标本有无溶血、黄疽和凝血块，任何微小的凝块都会影响测定结果，必须重新采血。4采血后宜在2h内完成测定，4冰箱内保存不应超过4h。5。孵育温度要控制在(37005)，温度过高或过低都可影响测定结果。6.血液离心速度要达到3000rmin，时间为10min，尽可能除去血小板，离心后血浆血小板计数应3s以上有意义PTR:0.85-1.15INR:0.8-1.24,INR=,ISI,ISI=InternationalSensitivityIndex,患者PTsec,患者PTsec均值(MNPT),(,),国际标准化比值（INR）,国际标准化比值（INR）,ISI=1.0试剂ISI=2.0试剂PT正常平均12sec12secPT病人sec24sec16.9secPT病人INR(24/12)=2.0(16.9/12)=2.0当系统误差是(23/12)=1.92(15.9/12)=1.761秒时的INR(25/12)=2.08(17.9/12)=2.22INR误差范围1.922.081.762.22,Ex.同一口服剂病人标本用两种试剂检测,关于用INR报告PT检测结果INR的优势：,1.INR可以直接反映最合适的抗凝剂使用剂量(1.53.0),增加病人的安性。2.使用INR报告PT，可纠正由不同类仪器、不同试剂所产生的结果差异和变化(INR=PTRISI)实现实验室间结果的标准化和可比性,世界卫生组织（WHO）规定应用口服抗凝剂时INR的允许范围如下：临床适应症INR允许范围预防静脉血栓形成2.3-3.0非髋部外科手术前1.52.5髋部外科手术前2.03.0深静脉血栓形成2.03.0治疗肺梗塞2.04.0预防动脉血栓形成3.04.0人工瓣膜手术3.04.0,国际敏感度指数(ISI)(ISI为氯化钙凝血活酶试剂国际敏感指数)是表示试剂中组织凝血活酶相对活性的指数。为使不同敏感性的组织凝血活酶在检测中能得到同样的结果所制定的共同敏感性指标,规定试剂生产厂商的产品必须标有ISIISI愈接近1.0，试剂愈敏感。敏感的试剂可得到较好的准确度和精确度。建议选用接近1.0的试剂。ISI越大，INR换算的误差也越大,PT结果的临床应用,肝疾患严重程度的分类严重肝炎的诊断标准DIC的诊断标准口服抗凝剂的监测外因系出血筛选手术前常规检查,:延长秒数:活性%:PT比:INR:秒数和PT比:秒数和PT比,活化部分凝血活酶（activatedpartialthromboplastintime,APTT)反映内源性凝血筛查APTT监测普通肝素首选指标。,APTT临床意义意义：参考值：27-45sAPTT是反映内源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况较敏感和常用筛选试验。较正常对照值延长10s以上为异常。临床应用：活化部分凝血活酶时间（APTT）是检查内源性凝血因子的一种过筛试验，APTT是监测普通肝素首选指标。APTT延长：（1）先天性因子XII、XI、IX、VIII、V、X、II缺乏和低（无）纤维蛋白原血症。（2）获得性见于肝脏疾病、VitK缺乏症、DIC、原（继）发性纤溶亢进、肠道灭菌综合征、VitK缺乏症。（3）血循环中有抗凝物质如肝素、FDP、狼疮抗凝物质以及抗因子VIII、IX的抗体存在、应用肝素、口服抗凝药。APTT缩短：见于高凝状态和血栓性疾病。,活化部分凝血活酶时间测定(APTT),【原理】在37条件下，用硅藻土(激活剂)激活、因子，用脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板第3因子，测定乏血小板血浆加入Ca2+离子后凝固所需的时间即为APTT。该试验是内源性凝血系统灵敏和常用的筛检试验。,静脉全血,枸橼酸三钠,+,离心,APTT(活化部分凝血活酶時間),肝素治疗的监测APTT比(1.52.5)内源性出血筛选手术前常规(代替凝血时间)血栓倾向的诊断抗凝物质的检测DIC的诊断,APTT的临床应用,报告方式：秒值参考值27-45s（或与正常对照相差5s以内）正常对照10s以上者延长正常对照5s以上者缩短,试验流程：50ul血浆样本+APTT试剂育温位育温240s-测试位加50ulCacl启动测试,纤维蛋白原定量（FIB）,FIB临床意义意义:FIB正常参考值24g/L1.纤维蛋白原减少:(3秒纤维增多或肝素、类肝素抗凝物质存在（SLE、肝素、肾病）以及AT-显著提高纤维蛋白原降解物（FDP）的增加（如DIC纤溶期）纤维蛋白原减少纤维蛋白原机能障碍纤维蛋白原分子异常尿毒症缩短：高FIB血症钙离子存在时或标本有微小凝结块及PH呈酸性,凝血酶时间（TT）,【原理】受检血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液后，纤维蛋白原变为不溶性的纤维蛋白，从而出现凝固，测定血浆凝固所需要的时间为凝血酶时间(thrombintime，TT)。TT主要用于检测血浆纤维蛋白原的减少或抗凝物质的增多。,离心,实验流程：100ul血浆样本育温位育温180s-测试位加入100ulTT凝血酶启动测试报告方式：秒值参考范围：5mg/L则乳胶颗粒发生凝集反应。【参考值】胶乳凝集法：5mg/L,【临床意义】纤溶活性增强的筛选、确诊试验。1、原发性纤溶2、继发性纤溶：DIC、恶性肿瘤、急性早幼粒细胞白血病、肺血栓栓塞、深静脉血栓形成、心、肝、肾疾病，溶栓治疗等所致的继发性纤溶亢进时FDP含量升高。纤溶亢进性出血检测的选择指纤维蛋白（原）和凝血因子被纤溶酶降解所引起的出血。筛选实验主要检测FDP和D-D,FDP与D-Dimer筛查实验结果分析一、FDP和D-D均正常表示纤溶活性正常，表明临床出血与原发或继发性纤溶无关。二、FDP阳性伴D-D阴性理论上之间与纤维蛋白原被降解而纤维蛋白未被降解，见于原发性纤溶亢进，见于肝病、术后大出血、重症DIC、纤溶初期、剧烈运动后、类风湿因子阳性、抗Rh（D）抗体存在。,三、FDP阴性伴D-D阳性理论上只见于纤维蛋白被降解，而纤维蛋白原未被降解，见于血栓栓子自发性溶解。见于DIC、静脉血栓、动脉血栓和溶栓治疗等。四、FDP和D-D均阳性表示纤维蛋白原和纤维蛋白同时被降解，见于继发性纤溶亢进，如DIC、溶栓治疗。,FDPDD临床意义正常正常表明纤溶活性正常+表明继发性纤溶活性亢进+-表明原发性纤溶活性亢进-+表明仅有纤维蛋白降解而无纤维蛋白原降解,影响FDP和D-D检测的主要因素,1.使D-D/FDP（假阳性）的因素（1）生理性：年龄随年龄增长而增高，80岁88%D-D水平饮食高脂饮食、酗酒活动剧烈活动妊娠随妊娠期延长而增高,（2）病理性：,先兆子痫外科手术/创伤分娩/产褥期恶性肿瘤冠心病免疫病,严重感染败血症/脓毒血症组织坏死/坏疽慢性肝病甲减结节病,（3）药物性：主要是溶栓药，如SK、UK、rt-PA等。,2、使D-D/FDP（假阴性）的因素,1.药物因素：抗凝药（肝素/LMWH、口服抗凝剂）抗高血压药（氯沙坦等）2.末梢陈旧血栓、上肢/锁下血栓、少数儿童VTE、低纤溶活性等。,3、干扰物因素,易受类风湿因子、胆红素、肝素、血脂、黄疸和血红蛋白等因素影响。一般认为：游离胆红素17mg/dL、结合胆红素21mg/dL、Hb5g/L乳糜1960浊度、类风湿因子500IU/mL对测定的结果无影响。,检测系统1：检测系统的概念与构成2：检测系统溯源性的意义,检测系统的概念,一个或多个测量仪器并经常包括试剂和供应物的其他仪器的组合，经过组合可对特定区间的特定量给出测量量值.一个完整的检测系统包括：1.检测仪器2.检测方法3.检测试剂4.校准物5.质控物7.参考范围8.人员素质9.危机报告值（必要时）,术语和定义,配套检测系统：整个检测系统由同一厂商或仪器的指定厂商提供并配套使用。若该系统经FDA认可，使用这样的检测系统对病人标本进行检验，其结果具有溯源性。自建检测系统：实验