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文档简介
题目:蛋白质沉淀反应,1。实验目的,掌握几种沉淀蛋白质的方法;掌握蛋白质可逆沉淀和不可逆沉淀的区别;了解蛋白质变性和沉淀之间的关系。(2)原理:蛋白质是亲水胶体。在正常情况下,蛋白质分子的表面有一层水合膜和一层电荷层,这可以保持其胶体溶液的稳定性。在某些因素的影响下,蛋白质会失去电荷,脱水和沉淀。蛋白质变性和沉淀之间没有必然的联系。蛋白质沉淀反应(1)蛋白质盐析(2)用乙醇沉淀蛋白质(3)用重金属盐沉淀蛋白质(4)用生物碱试剂沉淀蛋白质(1)蛋白质盐析。硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等盐类。可以破坏蛋白质胶体周围的水膜,同时中和蛋白质分子的电荷,从而导致蛋白质沉淀。这种用盐沉淀蛋白质的现象叫做盐析。盐溶解度的现象是低盐浓度可以增加蛋白质的溶解度。实验中应该加入足够的盐。蛋白质的盐析效应是一个可逆的过程。当蛋白质通过盐析法沉淀时,蛋白质变性较少,并且当透析或用水稀释时可以溶解。(2)乙醇沉淀蛋白质。有机溶剂如酒精和丙酮可以沉淀蛋白质。这是因为这些有机溶剂和水有很强的作用,会破坏蛋白质分子周围的水膜,从而导致沉淀。如果蛋白质沉淀及时从丙酮或乙醇中分离出来,蛋白质沉淀可以再溶解在水中。(3)重金属盐沉淀蛋白质。当溶液的酸碱度高于蛋白质的等电点时,重金属盐(如Pb2、Cu2、Hg2、银等。)容易与蛋白质结合形成不溶性盐和沉淀。重金属盐通常完全沉淀蛋白质,所以重金属盐经常被用来从液体中去除蛋白质。然而,应该注意的是,当一些重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)用于沉淀蛋白质时,它们不应过量使用,否则沉淀将被再溶解。此时的溶解是由于疏水胶体的形成。(4)生物碱试剂沉淀蛋白质。生物碱是一种含氮碱性物质,对植物具有重要的生理作用。任何能沉淀生物碱或与生物碱反应产生显色反应的物质称为生物碱试剂。如单宁酸、苦味酸和磷钨酸。当蛋白质溶液的酸碱度低于其等电点时,蛋白质是阳离子的,可以与生物碱试剂的阴离子结合形成盐和沉淀。溶液中的蛋白质也可以被有机酸沉淀,其中三氯乙酸是最敏感和特异的。因此,用于蛋白质的第一种沉淀剂只能沉淀蛋白质,而不能沉淀其水解产物,后者可以通过加热除去。3,实验材料,实验材料:鸡卵清蛋白溶液,移液管(1mlx4,2mlx4,0.5mlx1,5mlx2),试管(1.5x15cmx14),水浴锅,滴管,电炉实验试剂:苯酚(0.5%),硫酸铜(1%),硫酸铵固体,95%乙醇,氯化钠,醋酸铅,单宁酸,苦味酸
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