微生物快速检测方法ppt课件VIP

.微生物快速检测方法简介，常见微生物检测项目、常规微生物项目中细菌总数、大肠菌群、大肠菌群、霉菌和酵母菌致病微生物项目沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157: H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等。传统计数改进方法1，培养膜法2，螺旋平板计数法：螺旋接种物菌落计数法3，滤膜法：常用于快速检测某些可过滤样品的新方法1，三磷酸腺苷生物发光法2，电阻抗法3，颜色变化法4，流式细胞术和激光扫描技术5，其他：加热法，辐射测量法，常规微生物检测法，培养膜法_快速检测纸片技术，它由两层塑料薄膜组成，顶部薄作为覆盖层，底部厚作为培养基。操作方法：样品稀释，向下层膜中心滴加1毫升，盖上膜，将扩张器压成20厘米2的圆形，在37培养24小时，计数(色斑)。培养膜法&纸片快速检测技术具有节省玻璃仪器和培养基的优点。可节省培养基等试剂的制备和灭菌以及玻璃仪器的灭菌和清洗的时间、人力和成本。由于显色剂和小方块，计数很方便。省去繁琐的稀释操作。能快速检测致病菌，节省大量实验步骤。缺点是成本略高于传统方法。当检测细菌总数、大肠菌群、霉菌和酵母时，不能节省培养时间。培养膜法_快速检测纸技术使用细菌总数测试片中包含的红色指示剂染料，使所有菌落易于识别和计数。大肠菌群测试片含有指示剂，使菌落变红并产生气泡。大肠杆菌指示剂能使所有菌落变红，并能保留大肠杆菌产生的气泡。大肠杆菌的数量可以在24小时内确定。试件中添加的用于计数霉菌和酵母菌的抗生素能够抑制细菌的生长。指示剂使酵母易于识别和计数；霉菌能产生独特的颜色。金黄色葡萄球菌使用耐热核酸酶反应板，核酸酶反应产生的粉红色带围绕红色或蓝色菌落，即金黄色葡萄球菌，结果可在26小时内确认。培养膜法_纸张快速检测技术，螺旋平板法，DWS螺旋平板接种器，自动菌落计数器。样品制备的原理是，细菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋轨迹。当用于液体分离的空心针从板的中心移动到边缘时，细菌液体的体积减少，并且注射体积和琼脂半径之间存在指数关系。在培养过程中，菌落沿着液体注射线生长。使用计数网格校准与琼脂表面不同区域相关的样品数量，计算每个区域中已知菌落的数量，并计算细菌浓度。与传统方法相比，螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法、螺旋板法和螺旋板法不需要稀释梯度，每个梯度倒置两块板，节省了大量的人力物力。缺点检测时间没有缩短，菌落总数仍需培养48小时。必须配合自动菌落计数，否则人工计数比较麻烦。螺旋板法、过滤膜法和过滤膜法通常用于可过滤样品的微生物检测。该方法灵敏度高，无菌落扩散，计数方便。缺点是需要额外支出来购买真空泵、多连接支架和一次性过滤膜；如果抽滤时空气洁净度不够，可能会造成二次污染，特别是对细菌数量要求非常严格的产品，如啤酒、澄清果汁、瓶装饮用水等。三磷酸腺苷生物发光原理三磷酸腺苷荧光素酶O2-AMP质子泵抑制剂CO2氧化荧光素光应用于食品生产线三磷酸腺苷生物发光法和电阻抗法用于测量细菌总数。其原理是细菌生长的液体培养基是导电的良导体。接种生长的培养基的阻抗变化可以通过在特殊测量管的底部安装电极插头来检测。阻抗变化是由微生物生长过程中的新陈代谢引起的，它引起大分子营养物质(糖、脂类、蛋白质等)。)在培养基中被分解成小分子代谢物，即出现和聚集小的带电离子(乳酸盐、乙酸盐、碳酸氢盐或氨等)。)提高了培养基的导电性，从而降低了其阻抗值。M=(R0-RT)/R0100%，其中R0表示培养基开始时的电阻值RT，表示培养基在任何时间的电阻值M，并且表示培养基的电阻降低的百分比。抵抗力越小，细菌活性越强。在一定范围内，菌落形成单位的对数(CFU)与IDT(阻抗检测时间)呈线性关系。电阻抗法测定细菌总数，优点和缺点：电阻抗法更省力，样品细菌数在4 18小时内即可得到结果。然而，如果细菌数量太低，样本中不能使用防腐剂，否则结果会很混乱。电阻抗法在制作标准曲线的过程中工作量很大，但后期检测要简单得多，不需要一系列稀释，只需1毫升样品、9毫升培养基和一个测量管。细菌总数用电阻抗法测定。通过颜色变化检测，培养基的酸碱度由于微生物的生长而改变。通过光学检测器检测底部琼脂层的颜色变化，并记录到达突变点的时间。类似于阻抗法，可以实现快速检测。缺点：必须从原厂购买预先安装的培养基。应用范围有限，成本高。梅里亚的细菌/警报微生物检测器基于微生物产生二氧化碳的原理。二氧化碳积累越多，底部的二氧化碳传感器就会变黄。发光二极管向底部发射一束光，探头检测反射光的强度。光照强度与微生物的数量有关。流动细胞学原理液体样品流过仪器中受激光照射的流动池，当微生物流过显微镜聚焦的流动池时可以自动检测。特征检测方法对所用仪器有很高的特异性，因此应遵循制造商提供的方法。FOSS公司的巴氏杀菌牛奶细菌总数快速检测仪采用流式细胞仪原理。微生物用核酸染色并通过流式细胞术计数。优点：速度快(50-150个样品/小时)缺点：同时检测死细胞和活细胞，消耗成本高，仪器维护困难。灵敏度不够高。适用于乳品企业检测原料乳中的细菌总数。流细胞技术，美国Chemunex公司的快速微生物检测系统将流细胞技术与活细胞的荧光探针标记和激光扫描技术相结合，引入了最新一代更快的Bactiflow和更高端的ScanRDI和D计数快速微生物检测器。它最大的特点是只检测活细胞的数量，速度极快，处理能力大。检测步骤：1、过滤；2、标记，即直接标记活细胞和酵母；3.激光扫描。流式细胞术，三种模式的区别，、是利用细菌生长时发热的原理设计的。微生物在生长和代谢过程中会产生大量的代谢热。由于各种微生物代谢物的不同热效应，可以显示特定的热效应图。热效应图的形成是由于培养基含有许多成分，微生物产生许多不同的代谢物。该曲线显示的热效应是多个曲线峰。如果它是单一的营养成分，只有一个峰值出现。在细菌生长过程中，用微量热计测量产热等热数据，经计算机处理，绘制出由产热和时间组成的热图，从而推断出细菌的数量致病菌快速检测方法和显色培养基法：技术成熟，产品多。免疫学方法：大多数产品具有高特异性和敏感性，但有假阳性。积极的结果需要得到证实。常用的原理有EIA、ELISA、GLISA、荧光酶免疫分析、免疫磁分离等方法。分子生物学方法：基因探针检测和聚合酶链反应是主要方法。基因芯片的原理显色培养基法，在选择性培养基的基础上得到了改进。利用细菌特有的生理生化反应来改变培养基中指示剂的颜色，从而将目标细菌与其他细菌区分开来。酶联免疫吸附测定(迷你Vidas)全活性免疫分析仪使用荧光分析技术，通过带有已知抗体的固相吸附器捕获目标生物。然后再次结合荧光酶联抗体，经过充分冲洗和激发光源检测后，可以自动读出发光阳性标本。该方法检测灵敏度高、速度快，能在48小时内快速鉴别沙门氏菌、大肠杆菌O157: H7、单核细胞增生李斯特菌、空肠弯曲菌、葡萄球菌肠毒素等。分子生物学方法、基因探针方法和聚合酶链反应方法在国外已经相当成熟。有许多方法，如普通聚合酶链反应、荧光聚合酶链反应、实时荧光聚合酶链反应(定量聚合酶链反应)。一般来说，基因探针法也需要细菌富集，然后加入探针试剂进行杂交，然后在荧光显微镜的荧光检测器下获得结果。聚合酶链反应方法通常不需要添加细菌太长时间。通过聚合酶链反应方法扩增待测微生物的特征片