医学网织红细胞检测进展和其临床应用

.摘要网状红细胞(Reticulocyte，ret)是晚期红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，比成熟红细胞稍大。视网膜红细胞是核红细胞刚失去核的阶段，是尚未完全成熟的红细胞，浆中还残留着碱性RNA，将碱性染料(如青柠酸b、黄焦油蓝或新的亚甲基蓝)染色后，可以在包里看到蓝点或网状结构，因此视网膜红细胞留在其中。概述，红细胞经过多个阶段，直到从骨髓生成并发育成成熟的红细胞。干细胞，原始红细胞，早期红细胞，中间红细胞，后期红细胞，网状红细胞，最后发育成成熟的红细胞。细胞越成熟，RNA的含量越低，细胞完全成熟后消失或几乎消失。这意味着红细胞的网络结构越多，细胞就越天真。国际血液学标准委员会(ICSH)将Ret分为类型4:类型I(钢丝球类型)、类型ii(花冠类型或网状类型)、类型(破网类型)和类型(粒子类型)。在正常生理状态下，I型只有骨髓，ii型在外周血中也很难看到。iii型仅向外周血释放少量，因此用外周血网挤出红细胞时型。网织红细胞分型、ICSH将网织红细胞分为4种类型。未成熟网织红细胞比(IRF)=HFR MFR，I型(线球型):红细胞几乎填满网织，这种类型只能在正常骨髓中找到。II型(net型):位于红细胞中央腺等结构，开始松弛，大量存在于骨髓中。型(破网型):网状结构稀疏，分枝形状不规则，可见外周血中少量。IV型(颗粒型):细胞质中几乎没有碱物质，大部分是分散的微粒和短暂的思想，正常外周皮中的网状细胞。网织红细胞检测进展，1 .手动方法2。血液分析仪方法3。流式细胞术和特殊网状红细胞分析仪，1 .手动方法，手动方法滑动方法和试管方法。因为玻璃幻灯片容易在混合血液中蒸发水分，染色时间短，结果低。试管法容易掌握，重复性好，必要时还可以在混合血液中再次涂抹标本，重新进行检查。试管方法列为手动Ret计数参考方法。据卫生部全国临床检验操作规程版本2，试管方法采用姜黄焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色制作，细胞分布比较均匀，厚度薄，选择适当的身体末端，在各标本油镜下计数Ret6%，红细胞1000个。红细胞的3% 5%数量2000个；红细胞的1% 2%需要计算4000个。红细胞小于1%的10000个。视网膜细胞的生物染色：染色时间：28min比： 2%黄焦油蓝染色减少液滴数1:5时，视网膜细胞数开始减少。1:2是最好的。涂层部位：中部好。玻璃干燥程度：立即干燥器最佳。普通光学显微镜：在1000 RBC中计数Ret。以百分比表示。现有的显微镜计数方法比操作麻烦，影响结果的因素很多。近年来，国内开始使用国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥视器进行计数，调节计算领域，减少实验误差，并确保结果的准确性(卫生部临检中心建议CV控制在15%以内)。米勒窥视法将光学圆形板状米勒窥片放入显微镜目镜中，面积比为1: 9的两个方形计数方块，只数1/9小方块内的红细胞，准确测量整个大方块内红细胞的数量。计算方法，1 .Miller窥视板法：Retic (Retic)百分比(%)=(大方框中的Retic总数)/(小方框中的RBC总数9)100%2。直接计数法：Retic (Retic)百分比(%)=多个视野内的Retic总数/多个视野内的RBC总数100%，卫生部临床检查中心需要镜像ret计数CV15%的RBC数。自制红细胞的生物染色染料评价，参考值，成人：0.005-0.015(0.5%-1.5%)新生儿：0.02-0.06(2%-6%)儿童：0.005-0.075(0.075)，2 .血液分析仪方法、仪器法Ret数量多的优点、精确度比手工法明显优越，但也有一些缺点。第一，所有仪器分析的基本原理是检测Ret内RNA的存在量，确定其比例和绝对值，如果部分患者血液中的核细胞或淋巴细胞异常增加，会导致Ret计数结果的伪增加。第二，冷凝集素的存在，红细胞聚集，特定病理因素或药物可以使红细胞自身产生荧光；第三，自动分析仪结果的准确性不仅依赖于仪表本身的良好性能，而且需要良好的质量控制物随时检测仪表的状态。另外，仪器成本高，价格高，第一医疗单位投入更加困难。虽然大部分仪器利用流式细胞技术，但其应用染料有其特点。通常与荧光的强度、光的吸收量、光的散射量和网状细胞的RNA含量成正比。3 .流式细胞术和专用网状红细胞分析器、流式细胞术、FCM)是一种多用途的精密分析仪器，它将这种特殊的荧光染料(例如纤维蛋白、吖啶橙、噻唑橙等)与Ret的RNA相结合，根据FCM释放的激光暴露在细胞中时细胞是否能释放特定颜色的荧光，通过单个因子定量测定RNA，准确测定Ret占成熟红细胞的比例。Ret成熟度还可以根据激光照射后释放的荧光强度或光吸收量大小、光的散射量等参数的比例关系进行分组，分为低荧光强度网状红细胞(LFR)、中荧光强度网状红细胞(MFR)、高荧光强度网状红细胞(HFR)。3 .流式细胞术及专用网织红细胞分析器，FCM测量精度为手工法的3 6倍以上，Ret检测出的红细胞数为1.7% 6.6%，平均CV值为4.3%，在水草中检测出的红细胞数超过20000个。不足之处是，流式细胞术计数Ret受到HOWELL-Jolly微型体、疟原虫、血小板等的干扰。6个网络红色系参数，RBC、lfr、MFR、WBC、PLT-o、hfr、ret%=ret #/RBC-oret #=RBC-o *。RET% -网织红细胞对整个红细胞的比率RET# -网织红细胞绝对数IRF -未成熟网织红细胞比率=hfr MFR-III网织红细胞hfr-I型和II型网织红细胞，摘要。网织红细胞计数学评价，临床意义，1)评价骨髓增殖能力，判断贫血类型再生障碍时明显减少。绝对值小于5109/L，可作为急性再生不良性障碍的辅助诊断指标。出血或溶血性贫血患者的网状红细胞可能明显高于正常。营养不良性贫血在治疗前可以维持网状红细胞正常，稍微增加或减少。(2)评价疗效，网织红细胞反应：在IDA或巨红细胞贫血中分别注射铁、维生素B12或叶酸23d后，网织红细胞的数值开始增加，710d达到最高(10%左右)。两周后逐渐下降到正常水平，红细胞，血红蛋白开始升高。骨髓移植，EPO治疗：如果骨髓开始恢复造血功能，RMI就会升高，网状红细胞水平就会增加。(3)检测到放射、化疗监测、体内放射、化疗、骨髓抑制、早期HFR和MFR减少、网状红细胞减少。停止放射疗法和化疗，恢复骨髓功能后，该指标依次上升。可以引导临床医生调整适当的治疗方案，防止骨髓严重抑制。网状红色生成指数(reticulocyteproductionindex，rpi)，rpi=患者网状红细胞(%)/2*患者HCT/正常人HCT(男性0.45，女性0.40)临床，Ret数和各种参数(IRF、RMI、MRV、RPI等)对贫血的诊断和治疗、骨髓移植、肿瘤的放射治疗和药物疗效检查等具有重要的参考价值。1 .网织红细胞计数的应用，贫血的恢复通过骨髓释放红细胞生成素(EPO)进行，Ret增加可以看作是骨髓造血功能对贫血的正常反应。出血性贫血时，如果Ret各种指标明显升高，出血在5 10d以内达到Ret峰值，停止出血后2周恢复正常，临床上可以应用此参数和特征判断出血是否停止。也可以看到缺铁性贫血、巨红细胞性贫血患者Ret轻微增加。Ret减少主要与造血功能下降有关，典型的是原发性再生障碍性贫血，溶血性再生障碍性危机。此外，还包括急性白血病、继发性再生障碍性贫血、化疗和放射治疗引起的骨髓造血功能抑制或减退等。2 .网络红细胞生成指数(RPI)的应用，RPI等于正常人的数倍。Ret值不能准确反映骨髓红细胞的造血功能，Ret生存时间也要考虑，因此根据生物或病理学情况，将人的外周血释放出骨髓所需的时间不同。通常，Ret生存期大约为2d，如果未成熟的网状红细胞提前释放到血液中，则Ret生存期将延长，使用RPI反映Ret生成率，以纠正网状红细胞提前释放引起的偏差。2 .应用网络红细胞生成指数(RPI)，RPI=RET%测试HCT/正常HCT1/RET成熟天数。外周血释放的网状红细胞越幼稚，成熟的时间越长。网状红细胞的体积比成熟红细胞大，因此大量网状红细胞的早期释放在一定程度上影响血细胞的成本测定结果。观察网织红细胞成熟时间与Hct有以下关系。2 .网织红细胞生成指数(RPI)的应用，RPI在红细胞生成的可行性和估算贫血原因的分类方法中起着重要作用。Kinetic等使用RPI更准确地表达Ret的成熟状态，区分贫血类型，如健康人的平均RPI为1，RPI3，表示溶血性贫血，治疗后营养贫血等红细胞生成增加。缺铁性贫血等红细胞生成减少时RPI2；对于EPO缺乏、无效造血等，RPI在2 3之间，Kinetic法则还没有确定。3 .网织红细胞成熟度(IRF)的应用，IRF是未成熟的Ret与总Ret之比，健康人的平均为0.22，参考范围为0.1 0.38，IRF越大，未成熟的Ret的数量越多。这种幼稚的Ret水平的变化通常比HGB、血小板、白细胞和临床症状出现得早。IRF和HFR的增加是许多白血病患者化疗中粒细胞反应一致的指标，也是骨髓移植后恢复的主要信号。IRF与Ret#和RPI呈弱显著正相关。IRF增加(0.23)，一般Ret#一起增加，对贫血有充分的红色系列反应。如果IRF0.23，RPI2，则红色造血活性下降，大部分慢性肾功能衰竭。Ret#正常或略低，RPI2，但IRF0.23，急性感染，镰状细胞贫血危机，妊娠和MDS等。IRF是一种新的、有用的指标，用于评估Ret#和RPI相结合的贫血红系增殖活性，为进一步明确贫血分类提供了有用的信息。，在红细胞生成素贫血治疗、溶解患者重组人红细胞生成素(rHuEPO)治疗过程中补充适量铁补充剂时，HFR的变化比现有红细胞和铁代谢参数明显，可以作为诊断缺铁红细胞的可靠参数，也可以用于监视溶血患者在使用rHuEPO治疗过程中的反应.观察贫血的疗效。缺铁性贫血或巨幼红细胞成分贫血的有效治疗后2 3天，IRF达到最高点2 3天后，Ret开始上升，贫血的分类诊断和治疗监测。骨髓移植后造血功能恢复的第一个征兆(外周血细胞数和血小板是移植监测的理想选择)，网状红细胞数是独立监测骨髓造血恢复的附加参数。例如，21dRET#15109/L往往意味着没有移植性并发症，感染和输血不会影响网织红细胞计数。但如果15109/L与中性粒细胞和血小板减少症同时出现，这可能表明骨髓移植失败。监测放射、化疗对造血功能的影