病理切片技术

病理切片技术，宁波明珠医院病理科主讲人：朱晓龙2016年2月17日石蜡切片，石蜡切片制作，可以制作很薄的切片。一般的切片厚度应为4-6微米，但石蜡切片不仅能满足此要求，还能切成2微米-1微米的薄片。石蜡切片还便于制作大量或连续切片，用石蜡嵌入的组织块也便于长期保存，因此石蜡切片是目前各种切片制造方法中最常用的方法。切片机、切片机的基本类型有5种，根据结构的不同，包括(1)摇动切片机、(2)旋转切片机、(3)滑动切片机、(4)推进式(雪橇)切片机、(5)冷冻切片机。最常用的是旋转切片机。切片器、切片器、旋转切片器：旋转手轮以执行切片操作。旋转沉重的车轮以驱动螺纹轴或齿轮，向前推组织块钳，在上下平面上摆动。推进的距离由每个斜率为1或2微米的带刻度的调节器控制。切片前准备，恒温浴缸先预热到35 40。修复蜡块，用刀修复蜡块组织面的石蜡，使组织全部暴露切面，使其平坦，减少切削刀的磨损。将锋利的刀片插入切片刀夹具，调整角度和位置，然后立即拧紧，以确保切片刀的倾斜正确，如果倾斜角度太大，切片就会滚动。如果倾斜太小，切片会起皱，最好是20-30。准备幻灯片、小毛笔、小钩镊子和铅笔。切片阶段，将蜡块固定在切片机头部的夹片内部，调整到切片可以切的稍微远的位置，蜡块构造平面必须与切片刀垂直平行。调整蜡块组织平面，与刀精确接触，拧紧刀架，固定磁头。根据需要调整切片厚度。摇动切片机手轮，进行裁剪切片，直到整个最大配置平面被切割。切片阶段，实际上可以用右手转动切片机手轮，左手用刷子举起蜡片，进行调整切片操作。切下的切片带要用镊子轻轻拉一端，尽量伸展，用钢笔将切片带从刀上向上提起，然后抓住切片带，轻轻伸展到一定温度的水面上。最好用镊子抓住蜡片的一边，抬起来，在恒温水中展开(光明面朝下)，立即用毛笔轻轻展开，做出没有褶皱的片。有褶皱的时候，注意不要用镊子仔细地展开组织，使组织脱离。然后分离每个切片，并选择其中最完整、最不起皱的切片。将补丁(钓鱼片)、完全平坦的切片在一定温度数内完全展开，插入水中垂直滑动，为了防止分离，将小切片、幻灯片垂直向上，在玻璃片上还剩下一些水的情况下，用毛笔纠正切片位置。如果组织很小，可以在幻灯片上再粘贴几行或几行，但是阵列必须紧凑整齐。用弯片、铅笔在幻灯片一端的毛玻璃上写下标本编号，字迹要小、清晰、整齐。附着的切片放在60孵化器内干燥2 8小时，切片只牢牢附着在载体滑道上，可以染色。切片注意事项，切片质量的好坏，技术熟练程度和切片器的好坏除外，切片刀是决定因素，刀必须磨得很锋利。否则，切片会自己卷起来、起皱或组织划痕，因此切片不能平滑地切成连续条带。切片刀有缺口的话，切片要碎，碎，不完整，切片的时候要总是把刀刃擦干净。切片机的各个部件和螺钉必须拧紧。否则，将发生振动。切片切割开始阶段出现不良和其他故障的最常见原因是蜡块或切片刀的松动。摇动切片机需要均匀的力，所以不要太重。否则，由于太重，机身会振动，导致切片厚度不均匀。有过度硬化的脑、肝、脾等组织时，要轻轻切开，防止组织因振动而产生空洞现象。在夏季和秋季切削时，利用冰加强冷却，不仅保持石蜡的硬度，还减少了切片的褶皱，方便制作切片。冷冻切片，冷冻切片种类很多，有低温空调冷冻切片方法，二氧化碳冷冻切片方法，甲醇循环冷冻切片方法等。主要用于ATP酶、丁二酸脱氢酶等部分水解酶位置的组织化学方法和免疫组织化学方法等。证明脂肪瘤和肉瘤、部分研究机构等特定场合常见的脂肪、脂质和神经组织的myelin染色的切片。临床手术的快速病理诊断。神经病理学的部分染色法包括Eager法、Marchi法、Cajal法、Hortega法、Holzer法等。对特定物质的免疫荧光研究。德国莱卡温控器冷冻切片机，冷冻切片机工作原理，不是特殊类型的切片机，但将组织块支撑装置改为速冻(约零下20 30)装置。这个速冻装置可以用两种形式。一是在液体CO2蒸发时快速吸收大量热量，快速冻结组织块，以便通过液体CO2。利用半导体元件电偶作用，快速冷却组织电梯的半导体冷却装置也可以在1 2分钟内达到冻结组织的目的。制作冷冻切片时，要注意不仅要冻结组织，还要冻结切削机(例如，通过喷射的额外液体CO2或半导体冷却装置冷却刀)。两种制冷装置作为半导体制冷装置使用很方便，但需要电源和水源。冷冻切片机，这台机器的盒面有电子仪表板，安装了即时冷冻钥匙和除霜钥匙，启动即时冷冻钥匙，机器就会立即启动。启动速溶除霜钥匙，从工作间顶部后面的冷冻室中清除霜。有一个照明键，用于照亮工作空间和观察组织的冻结状态。除此之外，长方体面的左侧还有四个键，快速自动进退键，小进退键，以及在修复组织块时控制进退的手动旋钮。冷冻室内左侧冷冻机的温度可以在-60左右，冷冻室中间是一台切片机，工作室温度在0-30 之间随机调节，显示在箱子面的屏幕上。操作方法和步骤，材料，未固定的组织材料，厚度不能太厚，如果大人物难以完成，最好是24242毫米。取出组织支持器，平整组织，周围掉包装剂，迅速放入冷冻架，冷冻。小组织要先拿支撑点冷冻，做成小杆，然后放入小组织，滴入埋葬剂。将冷冻的组织块固定在切片机固定器上，启动粗糙的前进键，转动旋钮使组织变平。调节多分质的厚度。根据不同的组织，原则上切细胞密度高的薄，纤维多细胞切得稍厚，一般放在5 10um之间。操作方法和步骤，反滚板调整。制作冰雕节片的关键在于卷座板的调整。为此，工作人员必须细心、准确地调整，配合适当的位置。切片时，切割的切片可以在第一个时间成功地通过鞘之间的通道，平躺在鞘铁板上。那样的话，可以举起卷线板，拿一张幻灯片贴上去。应根据不同组织选择不同的冻结程度。冷藏箱内冷冻度的高低主要取决于组织，不能一般化。例如：在切开未固定的脑组织、肝组织和淋巴结时，不能将冷冻室的温度调整得太低，在-10 15切开甲状腺、脾脏、肾脏、肌肉等的时候，在-15 20切开脂肪组织的时候，在-25 切开脂肪多的组织时冷冻切片附着在幻灯片上后，立即放入常冷箱的固定液固定1分钟后可以染色。如果不染色，可以用固定液固定在空调箱里。，冰冻切片的优点，1 .简单，无需固定、脱水、透明、嵌入等程序即可切削组织，减少部分中间环。2.使用时间快，使用时间短。组织变化不大。能很好地保存脂肪、地质等成分。5.各种抗原活性及酶保存得比较好，尤其是对有机溶剂或热的温度耐受性弱的细胞膜表面抗原及水解酶。冷冻节快速染色，切片固定30秒-1分钟。水洗。声音蛋白染色3-5分钟。分化。从碱液中回蓝20秒。李红染色10-20秒。脱水，透明，中性口香糖密封。冷冻组织1-2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色5分钟。大