DNA的提取(34张)ppt课件

主题1:脱氧核糖核酸的粗提取和鉴定。1.基础知识，2mol浓度可以溶解脱氧核糖核酸。0.14摩尔/升的浓度可以沉淀出脱氧核糖核酸。(1)脱氧核糖核酸的溶解性，(2)酒精是一种常见的有机溶剂，但脱氧核糖核酸不能溶于酒精；(3)蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA无影响。(4)大多数蛋白质不能耐受60-80的高温，但DNA在80以上不会变性。(5)去污剂能溶解细胞膜，去除脂类和蛋白质，但对脱氧核糖核酸没有影响。(6)脱氧核糖核酸鉴定，(1)脱氧核糖核酸和二苯胺(在沸水浴中加热)将被染成蓝色，因此二苯胺可用作脱氧核糖核酸鉴定的试剂。(2)甲基绿(绿色)。(2)实验设计，(1)实验材料的选择，(1)材料：鱼卵、猪肝、花椰菜、香蕉、鸡血、哺乳动物红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、大肠杆菌在液体培养基中培养。(选择2 3种实验材料)2 .原则：任何含有脱氧核糖核酸的生物材料都可以考虑，但如果选择脱氧核糖核酸含量相对较高的生物组织，就更有可能成功。(2)粉碎细胞，得到含有脱氧核糖核酸的滤液。1.动物细胞破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液。2.植物细胞破碎：提取洋葱DNA时，向切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和盐，充分搅拌研磨，过滤后收集研磨液。添加洗涤剂和盐有什么效果？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？去污剂是一些离子型去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；盐有利于DNA的溶解，会导致DNA在细胞核中释放不完全，提取的DNA量较少，影响实验结果，导致无丝状沉淀，二苯胺鉴定无蓝色等。(3)去除滤液中的杂质。方案一：向滤液中加入氯化钠，使氯化钠溶液的浓度为2ml/L，过滤除去不溶性杂质，将氯化钠溶液的浓度调至0.14mol/L，沉淀DNA，过滤除去溶液中的杂质，用2ml/L氯化钠溶解DNA。方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，反应10-15分钟。嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能分解蛋白质。方案三：将滤液置于60-75的恒温水浴中，保持温度10-15，注意严格控制温度范围。(4)脱氧核糖核酸沉淀和鉴定，1。脱氧核糖核酸沉淀：过滤处理过的溶液，加入与滤液体积相等的冷却酒精溶液(体积分数95%)，静置2-3分钟，溶液中会出现白色细丝，这就是粗提取的脱氧核糖核酸。用玻璃棒向一个方向搅拌，卷起细丝，用滤纸吸走细丝上的水。DNA鉴定：取两根20毫升试管，加入每种物质浓度为2毫升/升的5毫升氯化钠溶液，将灯丝放入其中一根试管中，用玻璃棒搅拌使灯丝溶解。然后，将4毫升二苯胺试剂加入到两个试管的每一个中。混合均匀后，在沸水中加热试管5分钟。试管冷却后，比较两个试管中溶液的颜色变化，看看溶解有脱氧核糖核酸的溶液是否变成蓝色。当加入酒精并用玻璃棒搅拌时，动作要轻柔，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不形成絮状沉淀。3。现在应该使用二苯胺试剂，否则会影响鉴别效果。以血液为实验材料，每100毫升中加入3g柠檬酸钠作为抗凝剂。添加柠檬酸钠溶液的目的是防止血液凝固，加速血细胞破裂，溶解DNA，将2mol氯化钠溶液稀释至0.14mol/L，以最大限度地释放DNA，将含DNA的粘性物质留在纱布上，尽可能多地溶解溶液中的含DNA粘性物质，从含DNA的滤液中除去杂质，并提取DNA。藏蓝色出现在不变中，鸡血细胞溶液中粗DNA提取实验流程图，2摩尔/升，过滤用纱布过滤，纱布过滤，再次溶解DNA，2 mol/LNACL溶液，取过滤器，过滤，加入冷醇沉淀(纯化)脱氧核糖核酸，冷醇，脱氧核糖核酸鉴定，1.在粗DNA提取实验中，向烧杯中加入蒸馏水两次的效果是()。A.稀释血液，冲洗样品，使血细胞破裂，降低氯化钠浓度以沉淀脱氧核糖核酸，使血细胞破裂，增加脱氧核糖核酸的溶解，使血细胞破裂，提取含有较少杂质的脱氧核糖核酸，2.下面关于粗DNA提取和鉴定的陈述是正确的(1)氯化钠浓度越低，DNA的溶解度越大，2)人血也可以代替鸡血用于实验3 .柠檬酸钠的主要功能是加速血细胞的破裂4 .脱氧核糖核酸不能溶解在酒精中，3.击碎鸡血细胞时应先加入20毫升蒸馏水，其作用是()甲.脱氧核糖核酸溶于水乙.血细胞破裂，脱氧核糖核酸释放丙.血液稀释以防止凝固丁.有利于搅拌乙、4.如果选择的实验材料是植物细胞，破碎细胞时，应加入一定量的洗涤剂和盐。加入盐的目的是：促进脱氧核糖核酸的溶解，分离脱氧核