第四章-色谱分离法PPT课件

第四章色谱分离方法、知识目标：掌握各种色谱分离技术的特点和应用范围。了解色谱分离方法的基本原理。了解色谱分离方法的分类。3、能力目标：能够熟练运用氧化铝层析、硅胶层析、聚酰胺层析、离子交换层析、薄层层析、纸层析来分离天然药物提取物。学习活性炭色谱、凝胶色谱、大孔吸附树脂法、电泳技术、干柱色谱、气相色谱和高效液相色谱的操作技术。本章总结了色谱技术的基本知识，本章内容有：5、如果天然药物提取物中含有一些结构和性质相似的化学成分，而这些成分是普通分离方法无法分离的，那么色谱分离方法往往可以获得更好的分离效果。色谱分离法具有样品用量少、分离效率高的特点，是目前广泛使用的分离、纯化和鉴定化合物的有效方法。对于具体的应用，可以根据被分离化合物的性质和各种色谱分离方法的特点选择合适的色谱方法。(1)概念(2)色谱分离的分类(3)色谱分离的原理(4)色谱分离的应用，基础知识，(7)概念，色谱Y是一种用于分离、纯化和鉴定化合物的现代物理和化学分离和分析方法。根据色谱分离的基本原理，利用混合物中各组分在固定相和流动相中不同的吸附、分布和亲和力，当两相相对运动时，这些组分在两相之间反复吸附或分布，从而实现分离。10、色谱分离法的基本原理，1、吸附色谱的原理，利用吸附剂作为固定相对混合物中各种组分不同大小的吸附能力，使各组分相互分离。常用的吸附剂包括硅胶、氧化铝、聚酰胺和活性炭。一些常见化合物的官能团的极性顺序如下：嘿。11、色谱分离法的基本原理，2、分配色谱的原理，该分离是利用混合物中各种组分在互不混溶的两相溶剂中的分配系数的差异而获得的。两相溶剂的一个相需要用作固定相，并且相溶剂通常被一些惰性固体吸附和固定。这种被固定相溶剂吸附的固体物质被称为载体(也称为载体)。另一相的溶剂作为流动相。12、色谱分离的基本原理，3、离子交换色谱的原理，利用离子交换树脂上的官能团可以在水溶液中与溶液中的其他离子进行可逆的交换性质，用离子交换树脂作为固定相，使离子和非离子物质的混合组分，或者具有不同解离度的离子化合物被分离出来。13，色谱分离法的基本原理，4，凝胶色谱的原理，凝胶作为固定相，选择合适的溶剂作为流动相，随着流动相的移动，由于凝胶颗粒中的网孔半径的限制，被分离的小于网孔的样品化合物可以自由地进入凝胶颗粒，而大于网孔的化合物不能进入凝胶颗粒并被排除，只能通过凝胶颗粒外的间隙分离，这样混合物中不同分子量的化合物可以以不同的速率移动。14岁。色谱分离的应用。天然药物中有多种化学成分，每一种都有其特定的性质。可以选择不同的色谱方法进行分离。15，16，氧化铝色谱是一种通过使用氧化铝作为固定相将各种组分彼此分离的方法，该固定相对混合物中的各种组分具有不同的吸附能力。(1)氧化铝色谱。氧化铝是一种亲水性吸附剂，吸附能力强，有酸性、碱性和中性三种规格。其吸附活性与含水量有关。随着wa的增加表4-1氧化铝活性与含水量的关系，氧化铝色谱。18，操作步骤，(1)色谱柱的选择，(2)装载柱，(3)装载样品，(4)洗脱，(5)氧化铝再生，氧化铝色谱，19，氧化铝色谱，提示：(1)氧化铝适用于分离碱性或中性亲脂性成分，尤其是生物碱。它具有分离效果好、易再生、对杂质的吸附能力和分离样品的量比硅胶好等优点。但它不适合分离醛、酮、酯、内酯和其他类型的化合物。(2)柱层析中的氧化铝在使用前应过筛，使颗粒大小均匀，一般以100目左右为宜。(3)柱色谱中氧化铝的用量通常是样品量的20-50倍。如果氧化铝在样品上的吸附力较弱，该量应适当增加到100-200倍。20，硅胶色谱，2，硅胶色谱，是利用硅胶作为固定相，对混合物中各种组分不同大小的吸附能力，使各种组分相互分离。硅胶是一种微酸性多孔物质。二氧化硅水通常表示为硅氧烷交联结构：其骨架表面有许多硅烷醇基，使硅胶与许多化合物形成氢键，产生吸附作用。如果含水量超过17%，硅胶的吸附能力极弱，不能用作吸附剂，可以用作分配色谱的支持剂。如果将含水硅胶在100-110加热30分钟，硅胶的吸附能力可以恢复。表4-2硅胶活性与含水量的关系，硅胶色谱法。22、操作步骤和碱性氧化铝色谱基本相同。(1)硅胶的活化不应在较高的温度下进行。当温度升至500时，硅胶失去吸附能力。(2)有时硅胶色谱具有吸附色谱和分配色谱的双重性质，甚至具有极弱的离子交换。(3)硅胶作为一种酸性和亲水性吸附剂，适用于分离中性或酸性成分(包括非极性化合物和低极性化合物)，如挥发油、黄酮、蒽醌、强心苷、皂苷、有机酸、酚类化合物、氨基酸等。它具有吸附容量高、机械强度好、分离范围广等优点，应用最为广泛，但不适合碱性组分的分离。(4)在分配色谱中，硅胶、硅藻土、纤维素粉末和滤纸通常用作支持剂。24，硅胶色谱，提示：(5)以大极性溶剂(如水或亲水性溶剂)为固定相，小极性溶剂为流动相的分配色谱称为正相分配色谱，通常用于分离大极性组分，如生物碱、糖类、糖苷、有机酸等。小极性溶剂(如氯仿、石油醚和其他亲脂性有机溶剂)用作固定相，而在流动相溶剂中极性较大的分配色谱称为反相分配色谱，通常用于分离小极性组分，如油、高级脂肪酸、游离类固醇等。(6)选择合适的溶剂体系可以提高分离效率。纸色谱通常用于探索特定的分离条件和寻找合适的溶剂系统。25，活性炭色谱，3，活性炭色谱，是利用活性炭作为固定相，对混合物中各种不同大小的组分进行吸附，使各种组分相互分离。活性炭是一种非极性吸附剂，具有很强的吸附能力。它的吸附能力受到溶剂的影响。其吸附能力在水溶液中最强，在有机溶剂中较弱。在一定条件下，不同物质的吸附能力也不同。26，活性炭色谱，化合物的吸附：具有更多极性基团的化合物具有更少极性基团的化合物芳香族化合物具有更高分子量的脂肪族化合物具有更低分子量的化合物，活性炭的分类：粉末活性炭颗粒活性炭尼龙活性炭，27，操作步骤，装载o(2)目前，还没有理想的方法来测定活性炭的吸附容量。其吸附能力不易控制，因此活性炭的具体应用受到一定的限制。聚酰胺色谱、聚酰胺色谱、聚酰胺色谱是一种使用聚酰胺分子中存在的许多酰胺基团作为固定相与酚的羟基、酸的羧基和醌的醌基形成氢键以产生吸附并将混合物中的每种组分彼此分离的方法。嘿。29，聚酰胺色谱，聚酰胺是一种由酰胺聚合而成的高分子化合物。色谱分离常用于聚己内酰胺(尼龙6)和聚己内酰胺(尼龙66)，其中聚己内酰胺的结构式可表示如下：30，流动相，聚酰胺吸附色谱原理，固定相，聚酰胺色谱，31、聚酰胺色谱中，聚酰胺与各种化合物具有不同的氢键形成能力，这决定了聚酰胺吸附力的强弱。形成氢键的能力首先与溶剂的类型有关。聚酰胺柱色谱中常用作洗脱剂的各种溶剂的洗脱能力如下：水甲醇或乙醇丙酮稀氢氧化钠溶液或稀氨水甲酰胺或二甲基甲酰胺 2的非氧化剂溶液中稳定。扩大了应用范围，不仅可以分离水溶性化合物，还可以分离一些不溶于水或具有一定亲油性的化合物(如黄酮、蒽醌、香豆素等)。凝胶色谱法，此外，还有聚丙烯酰胺凝胶(在pH 2 10时稳定，用法类似于葡聚糖凝胶)、琼脂糖凝胶(适用于分离分子量超过一百万的大分子化合物)，以及结合了不同离子交换基团的葡聚糖凝胶衍生物等。50、凝胶色谱，凝胶色谱分离机理图，代表凝胶颗粒，代表大分子物质，代表小分子物质，分离出的样品比网状化合物小，可以自由进入凝胶颗粒；然而，大于网孔尺寸的化合物不能进入凝胶颗粒而被排除，并且只能通过凝胶颗粒外部的间隙。随着流动相的流动，分离样品中的大分子化合物阻力较小，流速较快，首先被洗脱。然而，具有较高阻力和较低流速的小分子化合物随后被洗脱，从而分离样品中的大分子和小分子化合物。(1)在装载样品之前，填充色谱