DNA的粗提取和鉴定..ppt

1,课题DNA的粗提取与鉴定,1.提取DNA的基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。,2,DNA的溶解性,DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；,或者让其他成分溶解，DNA析出,2.DNA等大分子的理化性质,DNA不溶于酒精溶液,DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,3,DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。,DNA不溶于酒精溶液,DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响,高温大多数蛋白质不能忍受6080而DNA在80以上才会变性,洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响,4,3.DNA的粗提取与鉴定,1原理、方法和目的,高温,DNA耐高温,DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性。,DNA对洗涤剂耐受性洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,加入洗涤剂,5,1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性。5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,提取DNA的原理包括DNA的两个方面,溶解性和耐受性,1.DNA的粗提取实验原理,6,2.实验材料动物,提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。,鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取,植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,7,3、方法与过程,1).制鸡血细胞液,500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。,离心或静置后去掉上清液,血浆,血细胞,8,用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。,用两层纱布过滤滤液中含有DNA。,9,10,注意事项制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释NaCl溶液。酒精最好用95%的冷酒精;加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。鉴定DNA时需沸水浴加热。二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）,11,1.下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是（）,A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质C.是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的杂质D.是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质,是释放核物质,是提纯DNA，去除溶于酒精的杂质，,稀释NaCl溶液，析出DNA。,C,12,植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶解细胞膜。,洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是：洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与DNA分离开来。利于DNA的释放。,动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）破坏的，因为动物细胞膜外面没有细胞壁的保护，放在清水中自然的就会吸水而胀破，释放出其中的DNA等物质。,4、植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,13,2.（2007年高考生物试题）在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，该对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。（列举两点）,选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，达到分离目的；加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，与DNA分离；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；控制DNA提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。,14,3.（多选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是（）,AC,15,4.实验中NaCl的物质的量浓度为2molL和0.14molL对DNA有何影响?,3.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,5.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色,D,16,6.DNA在NaCl溶液中的溶解度有两重性，随着NaCl溶液浓度的变化而变化。(1)请在下列浓度的NaCl溶液中，选出能使DNA析出最彻底的一种和溶解度最高的一种_。A0.14mol/LB2mol/LC0.15mol/LD0.3mol/L(2)DNA不溶于酒精，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以_，可以推测溶于酒精中的可能有_。,A、B,去除杂质,某些脂质、蛋白质、糖类或其他大分子物质,17,7(2011江苏卷，19)在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是()A用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同,解析用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L时