滤纸片干血斑技术

2014年3月20日,1,艾滋病阳性产妇分娩婴幼儿早诊标本的采集,滤纸片干血斑技术,罗玉珍桂林市妇女儿童医院检验科,2014年3月20日,2,概述,滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体。全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑（Driedbloodspots，DBS），有很好的生物稳定性和安全性，便于储存和运输。特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、贮存与运输。1973年，国外就开始研究用滤纸收集血样用于疾病的研究。,2014年3月20日,3,概述,国家艾滋病参比实验室（NARL）从2004年开始，应用滤纸片干血斑检测HIV-1抗体、DNA、基因分型与病毒载量测定等方面的研究。,2014年3月20日,4,HIV感染产妇所生婴幼儿HIV抗体检测策略及流程,适用范围HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的儿童，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表临床怀疑HIV感染的儿童儿童HIV/AIDS的诊断18M的儿童先用ELISA初筛，再用WB确诊18M婴儿检测HIVRAN前DNA或HIV抗原（P24）或病毒培养,2014年3月20日,5,HIV阳性母亲所生、未受感染的婴儿,母亲抗体,VL,婴儿月龄,抗体阳性率%,2014年3月20日,6,HIV阳性母亲所生、在宫内或产道受感染的婴儿,母亲抗体,婴儿抗体,VL,抗体阳性率%,婴儿月龄,2014年3月20日,7,婴儿月龄,HIV阳性母亲所生、产后因哺乳受感染的婴儿,母亲抗体,婴儿抗体,抗体阳性率%,VL,2014年3月20日,8,艾滋病感染孕产妇所婴幼儿HIV感染早期诊断检测及服务流程,2014年3月20日,9,概述,目前国际上最常用：Whatman903滤纸干血斑采集卡。该卡是Whatman(沃特曼)公司特制的棉花制片。由美国疾控中心批批检合格后上市，被WHO等国际组织公认为采集血样的最佳载体。FTA（干血点采样）,2014年3月20日,10,物品准备,耗材储物柜：干燥、整洁、安全、方便取用，存放样本制作所需的相关耗材。耗材：无粉手套干燥架药棉或棉签和纱布采血针滤纸采血片、信息卡污物桶,2014年3月20日,11,样品采集,填写滤纸卡：信息完整，以免混淆样品。确定采血部位：脚后跟采血法：6周4月或小于5kg的婴儿脚大拇指采血法：410月或510kg的婴儿手指尖采血法：大于10月或大于10kg的婴儿静脉采血法,2014年3月20日,12,样品采集,2014年3月20日,13,样品采集,血样采集完毕后，将制成的滤纸片干血斑采集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面放置34小时风干。或将采集卡放置于专业纸质干燥架上自然风干。不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如烘干机）加速干燥。静脉采血：用移液器移取80L全血，对准采样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气泡产生。,2014年3月20日,14,DBS有效性的判断,有效样品,无效样品,2014年3月20日,15,DBS保存,样品风干后，将每张滤纸片采集卡分别装入薄玻璃袋。装好后放入封口袋，多个薄玻璃袋可以装入一个封口袋，同时放进干燥剂和湿度卡。轻轻将封口袋的空气积压出去，封口。冷藏干燥20保存。,2014年3月20日,16,DBS递送,DBS采集卡可以专人送样或通过邮寄。将采集卡和送检单一同放入大信封。邮寄前再次核对送检单与样品是否相符。,要写明采样点的联系方式：采样点名称、送样人、送样日期、结果反馈地址/电话/传真等。,2014年3月20日,17,DBS的质量控制,未采血的滤片应放置在干燥处保存，滤纸表面必须保持清洁，不能与手、奶、消毒液、清洁剂、水等物质接触防止污染。滴在采血圈内的血液，必须从正面吸入并渗透到滤纸背面。正反面的血斑直径要求一致。避免正反两面滴血及采集有大量组织液的血液或凝固的血液。避免血斑血量不足，渗透不够，而出现梅花状、夹心状和直径8mm血斑。,2014年3月20日,18,DBS的质量控制,合格血斑的六条标准是每个血斑直径要达到10mm；同时取3个血斑；血液必须完全渗透到滤纸背面；无重叠；无污染；易洗脱。采集好的血斑标本应按要求保存，避免因保存不当造成血标本固化于滤纸上，检测时被测物洗脱不下或部分洗脱，出现假阴性结果而漏诊。,2014年3月20日,19,DBS在HIV检测中的应用,以下数据引自中国CDC性艾中心网页。1、HIV抗体检测2、HIV-1前病毒DNA检测，3、HIV-1基因序列测定和亚型分析HIV抗体检测：相同血样的滤纸片干血斑样本与血浆样本用EIA法检测，符合率为100%，相关性为0.919。两种样本经WB确认，条带完全一致的占总数的42.85%,其中主要条带（至少有2条env带出现，或至少1条env和p24带同时出现）的符合率为100%,2014年3月20日,20,DBS在HIV检测中的应用,HIV-1前病毒DNA检测：采集了59例静脉吸毒HIV-1感染者的DBS血样和22例HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50l制备干血斑样本后，分离血浆。结果发现，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93%；22份全血样本94%，2检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时无统计学显著性差异。22份两种阴性样本特异性均为100%。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94%。,2014年3月20日,21,DBS在HIV检测中的应用,HIV-1基因序列测定和亚型分析：研究采集了20例静脉吸毒HIV-1感染者的EDTA抗凝静脉全血2ml，50l制备干血斑样本。结果发现，干血斑样本与全血样本DNAPCR产物