爱爱医资源—免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上应用PPT课件

.1、免疫胶乳比浊法在自动生化分析仪中的应用，2、免疫比浊法相关问题综述，免疫胶乳比浊法在生化分析仪中的应用，3、免疫比浊法，免疫检测中基础抗原和抗体之间的特异性反应手工操作自动分析，核心-基础，4、免疫比浊法技术是建立在免疫沉淀反应检测方法基础上的。最早的免疫沉淀反应是1948年由Ouchterlony建立的琼脂双向扩散法。1965年，曼奇尼等人和法赫等人分别建立了定量单向(径向)免疫扩散技术。Laurell等人在1966年建立了电免疫扩散法，将报告时间从 24小时缩短到4-5小时。传统的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应结束时确定结果，费时、操作复杂、灵敏度低(10 100 mg/L)，且不能自动化。根据沉淀反应中抗原和抗体结合后反应体系的透光率会发生变化的事实，建立了一种以测量透光率为特征的微量免疫沉淀测定方法，即免疫浊度测定技术。免疫比浊法最早由瑞奇于1967年报道，并于20世纪70年代逐渐得到改进。临床常规检查最初应用于20世纪80年代初。抗原和抗体在液相(特殊缓冲液)中迅速结合，形成抗原抗体复合物，反应液出现浑浊。免疫比浊法，7。抗原和抗体在液相中的反应结果与两者的浓度比有关。当抗原或抗体显著过量时，只能产生少量可溶性免疫复合物，且分子极小，不适合免疫比浊法检测。免疫比浊法技术要求溶液中的抗体保持适度过量，此时免疫复合物仍是可溶的。在这种情况下，抗原和抗体之间的反应遵循质量作用定律(ag ab=ag。抗体)，并且形成的集成电路的量是抗原或抗体的函数。当抗体被固定时，免疫球蛋白的量与抗原的量成正比。免疫比浊法、光源、过滤器、反应比色杯、比浊法检测器、散射比浊法检测器、集成电路、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器、散射比浊法检测器免疫比浊技术中的分散比浊法目前使用国家食品药品监督管理局(SFDA)批准的进口自动分析仪器和各种检测项目的专用试剂。家用试剂可用于比浊法(生化分析仪)。第三版国家临床检验规程，透射或散射，10、浊度仪专用配套试剂均为昂贵的进口试剂，开放试剂为浊度生化分析仪(可使用国产试剂)、速率法和终点法。速率法的敏感性和特异性优于终点法。终点法稳定性好。目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异性相近，而全自动生化仪的自动化程度和精度都优于专用比浊仪。透射免疫比浊法越来越广泛地应用于临床实践。生化分析仪通过免疫比浊技术在现代生化检验和现代免疫技术之间架起了一座桥梁。免疫化学是免疫技术和生化技术的结合。不仅具有免疫抗原抗体结合的特异性，而且具有生化反应动力学的特点。透射或散射，透射免疫比浊法，由可溶性抗原及其特异性抗体在一定缓冲溶液中形成的复合物，聚合一段时间后显示混浊。当人类免疫复合物的直径为35微米。该范围要求入射光在近紫外光下的最大干涉(最大吸收峰)，290 410 nm波长是测定的最佳波长。只有在抗原抗体结合后的短时间(19秒)内形成可见的复合物，才能进行混浊。为了提高复合材料的形成速度，加入聚合促进剂如4%聚乙二醇(分子量：6000-8000)可以在3-10分钟内完成复合材料的形成。在比浊法中，少量的小抗原抗体复合物很难形成混浊，除非长时间放置。如果形成大的复合物，抗原和抗体的量也很大，这显然不符合痕量的要求。为了解决快速反应和微型化的要求，建立了免疫层析技术。免疫胶乳比浊法的基本原理是特异性抗体被吸附在大小适中且均匀的胶乳颗粒上，当遇到相应的抗原时，胶乳颗粒会凝集。单个乳胶粒子不会阻碍入射光波内的光传输；当两个或多个乳胶粒子聚集时，透射光减少。免疫微球的聚集程度是被测物质浓度的函数，因此可以测量样品中被测物质的含量。免疫胶乳的浊度分析(免疫胶乳)，16，(a)含有抗体的胶乳能在一个波长内传输光，(b)结合后，将形成光衰减，(17)。这项技术的关键在于两个方面：首先，选择合适的乳胶，其大小(直径)略小于波长。对于500纳米的波长，100纳米的粒子更合适。对于585纳米的波长，100 200纳米的粒子是优选的。目前，200纳米的乳胶粒子是常用的。其次，虽然当乳胶与抗体结合时化学交联是好的，但是它的失活也是严重的。一般来说，吸附就足够了。免疫胶乳比浊法(. 18)，免疫胶乳比浊法(. 19)，胶乳颗粒主要是惰性微球和羧基化微球，氨基聚合物纳米球，氨基纳米球的粒径比常规微球小(约0.1m)。它与抗体的结合是通过其表面的氨基与抗体的氨基端共价结合，并且在微球和抗体之间有一个桥接化学臂，这降低了空间位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，而且为抗体提供了一个合适的三维空间三维结构，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域。与传统的使用惰性纳米球的技术相比，检测灵敏度有了很大的提高，最高可达1.0ng/ml。免疫胶乳浊度分析(IMMULTATETXTURBIDDIMETRY)。20、(1)操作简单，在几分钟内快速、准确地检测血清蛋白含量，真实反映疾病进展和评价治疗效果，对疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义；(2)不易受到人为操作和外界因素的干扰，检测稳定性和重复性很好；(3)可通过普通生化分析仪检测，易于实现自动化，可在各级基层医疗机构推广应用。免疫层析测定法)。21粒子增强透射比浊法，petia)latex enhanceddurbidia(letia)particle-enhanceddurbidia，immunolatexturbidimetry，immunography on biochemical instruments，血清蛋白IgA(免疫球蛋白A)IgG(免疫球蛋白G)IgM(免疫球蛋白M)IgE(免疫球蛋白E)C3(补体C3)C4(补体C4)，微量白蛋白(微量白蛋白)2-微球蛋白(2球蛋白)-1 -1-acidglycoprotein(-1 1酸性糖蛋白)铁蛋白(转铁蛋白)，心血管疾病监测ApoA-1(补体C4) 肾小球滤过率的最敏感指标，在生化仪器上进行的免疫程序，监测苯巴比妥治疗药物丙戊酸钠卡马西平茶碱庆大霉素洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷洋地黄毒苷维生素，维生素B12，叶酸，TOXO，RUBELLA病毒，免疫程序，26，免疫比浊试剂的组成，R1(试剂I):缓冲液R2(试剂II):启动试剂(含或不含乳胶颗粒)标准(一种或多种标准)控制(对照溶液)，27、免疫比浊试剂的组成，R1缓冲液R2启动试剂校准血清，28，反应类型(不需要乳胶)，银，抗体(试剂)。29，反应类型(需要乳胶)，latex，Ag，30、试剂成分的功能，缓冲液：使反应的灵敏度最大化以避免非特异性结果减少反应时间起始试剂：产生抗原-抗体反应标准：建立浓度和信号(吸光度)之间的关系质控液：检查校准、31、CRM470-全新国际蛋白质标准、32、美国标准物质委员会参考局(BCR)批准参考。CRM470是14种(血清)蛋白质分析物的参考产品。基于人血清的参考物质(人血清蛋白参考制剂lot5，RPPHSlot5)由以下组织联合开发：IFCcbbrusselscapusa，CRM 470-全新国际蛋白标准。33，CRM470是由BCR在欧洲准备和提供的。在美国，材料由美国病理协会提供。制造商使用CRM470来标准化他们自己的校准解决方案和质量控制解决方案。客户关系管理和标准参考材料可以被认为是目前可获得的最高质量的材料。固体火箭发动机主要用于美国(NIST，国家标准和技术研究所)。CRM470-新的国际蛋白质标准，34，基于CRM470参考的成人参考范围， 血浆蛋白参考范围(g/L)白蛋白35 52-1-抗胰蛋白酶0.9 2.0(-1-抗胰蛋白酶抑制剂)C3C-补体0.9 1.8 C4-补体0.1 0.4铜蛋白0.2 0.6c-反应蛋白(CRP)0.005-1-酸性糖蛋白(粘蛋白)-0.5 1.2触珠蛋白0.3 2.0iga 0.7 4 理解每个测试项目的方法论原则。仔细阅读商业试剂的说明。来自供应商或制造商技术部门的支持。“所谓生化分析仪就是将实验参数输入仪器，仪器根据测试指令完成整个测试。设置参数的基本技能超出了仪器的范围。如果没有对分析化学、酶动力学和仪器性能的一定了解，很难很好地设置参数。“，在自动生化分析仪上的应用，36，生化分析仪上免疫比浊法的常用测定(分析)方法，最终点最终-样品空白-最终-初始-B动力学(C-B)/时间，R2 (Latexorantiera)，样品和1(缓冲液)，时间，od增量，37，CRP分析方法的测定，使用双试剂，两步终点法，38，heidelbergerkendallexeperience，excelsiolyzone，excelsiogenzone，抗原浓度，浊度(OD)，(有用区)，A，B，C，39，免疫比浊法测量的多点校准。根据抗原-抗体反应特点，免疫比浊法测定选择在A区进行。免疫比浊法的浊度随抗原的增加而增加，但不是线性对应关系(曲线常有截距或呈S形)。为了获得正确的结果，必须制作多点校准的标准曲线。自动生化分析仪通常建议在5点或6点钟校准，然后选择合适的数学模型进行曲线拟合，如对数转换；Y=dcxbx2ax3，40，多点校准：射频、crp、realrelationandcurveofcalibration校准、直线校准(误差)、浓度、校正。41，浓度，外径增量，实际关系，直线校准，单点校准：例如，ASO，免疫浊度测量的多点校准、校准曲线的选择和拟合效果的验证：选择哪条校准曲线用于数据处理是实验成功的关键之一。通常，使用试剂制造商提供的或文献中介绍的校准模式。拟合曲线应进行测试和比较。由于抗原或抗体过量导致免疫复合物部分或完全解离的现象称为区域现象。免疫比浊法通常显示，当抗原过量时，形成的免疫复合物的量减少，也称为虎克效应。克服方法：用高质量的试剂建立仪器来监测和减少血清消耗，采用44、双试剂测定法，并采用合理的双试剂测定法，可消除血清中多种物质的干扰，如脂肪、黄疸、溶血、循环免疫复合物等。非特异性光散射的影响。伪浊度的影响。单双试剂法的光密度变化曲线A:双试剂法；B:单试剂法、R1-S法、R2法、双试剂法反应过程、a、b、46、实际工作中的一些常见问题、仪器维护、操作过程中设置和校准的仪器参数如水质和清洗剂、试剂储存和试剂