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自身抗体 检测 项目 临床意义

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一、抗核抗体 抗核抗体(antinuclearantibodies，ANA )是指抵抗各种核成分的抗体，是广泛存在的自身抗体。 ANA的性质主要是IgG，有IgM和IgA，还有IgD和IgE。 ANA与不同来源的核反应，没有器官特异性和种特异性。 ANA主要存在于血清中，也存在于滑膜液、胸水、尿等其他体液中。 ANA虽然SIE患者滴度高，但也出现在许多其他的自身免疫病中，很多研究报告都将ANA作为自身免疫或自身免疫病的存在的依据。 这个现象的机制还不清楚，需要进一步研究。 (1)ana的类型和意义 由于核成分的复杂性，根据成分不同抗原性不同的主播有各种各样的种类。 1 .抗核蛋白抗体核蛋白抗原(DNP )由DNA和组蛋白组成。 因为DNP抗原中存在不溶性和可溶性两部分，可以产生各自的抗体。 不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白吸收，作为形成狼疮细胞因子的可溶性抗原存在于各种关节炎患者的滑膜液中，其相应抗体也出现在RA患者的滑膜液中。 2 .抗DNA抗体可以分为抗天然DNA(nDNA )抗体，或称为抗双链DNA(dsDNA )抗体这两种，抗变性DNA抗体，或称为抗单链DNA(ssDNA )抗体。 抗dsDNA抗体对SLE具有高特异性，70%~90%的活动期SLE患者该抗体为阳性，有效价格高，与病情有关。 抗ssDNA抗体见于多种疾病，特异性差。 3 .抗ENA抗体提取性核抗原(ENA )多从动物胸腺中提取。 如果对胸腺进行匀浆，粉碎细胞，用分离细胞核的盐水和磷酸盐缓冲液处理的话，容易从细胞核中提取。 ENA不含DNA，对核糖核酸酶敏感。 近年的研究显示，ENA分为十几种，现在仅介绍几种主要的ENA及其相应的抗体。 (1)抗PNP抗体： PNA即核糖酶对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加热561h后发生变性。 抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。 高效价格的抗PNP抗体对混合性结缔组织病具有诊断意义 低效价的抗PNP抗体可在SIE患者中发现。 (2)抗Sm抗体：这种抗体是在名为史密斯的患者的血液中首次发现的，以该名字的前两个字符命名。 Sm抗原系的非核酸性糖蛋白对DNase和RNase不敏感，但是用碘酸盐或胰蛋白酶处理后会被水解。 抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一，但阳性率低，可能是约30%~4%的SIE回忆抗体，所以在非活动期也能检测出。 同时检测抗dsDNA和抗Sm抗体，就能提高SLE的诊断率。 (3)抗SSA抗体： SSA是干燥综合征(ss )的a抗原，可以从动物胸腺的细胞中提取。 抗SS-A抗体主要见于SS，但也见于其他自身免疫疾病，如SLE。 (4)抗SS-B抗体： SS-B是SS的b抗原，也可以从动物胸腺和小鼠肝细胞浆中提取，也可以通过胰蛋白酶、轻度加热或溶液pH变化破坏。 13%的SLE和30%的SS都具有抗ssb抗体。 (5)抗组蛋白抗体(AHA ) :组蛋白是一种碱性蛋白质，含有大量赖氨酸和精氨酸。 目前发现组蛋白抗原分为H-1、H2A、H-2B、H-3、H-4五个亚基。 抗组蛋白抗体及其抗亚基抗体见于SLE和药物诱发的LE。 SLE患者血清中抗组蛋白亚基抗体的检测率以抗H-2B、抗H-1、抗H-3、抗H-2A和抗H-4的顺序以抗H-2B和抗H-1为主，与SLE的活性有关。 (2)ana的检测方法 由于ANA的复杂性和多样性，测定方法很多。 目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。 1 .免疫荧光法测定血清总ANA最常用的方法为荧光免疫组化法。 多数小鼠肝切片和板作为核基质，结果比较稳定可靠，在荧光显微镜下看到的核荧光着色为阳性反应。 首先以不同比例稀释患者血清，可以进行粗略的定量试验，如果1:80稀释仍为阳性，对SLE的诊断有很大的参考价值。 在油镜下观察结果显示，ANA阳性荧光现象可分为4种主要荧光核型，确定核型对临床诊断更有参考价值。 周边型显示抗DNA抗体的存在均质型显示有抗DNP抗体斑点(粒子)型显示抗ENA抗体多核仁型显示抗核小体抗体多。 SLE患者经常出现周边型、均质型或混合型，斑点型多见于混合结缔组织病，而硬皮病多为核仁型的周边型对SLE具有较高的特异性。 近年来，有以锥虫和血鞭毛虫(例如，绿蝇短膜虫试验)为基质检测抗dsDNA抗体的人。 这些血寄生虫的运动基质中含有大量的纯dsda，在没有其他抗原干扰的阳性结果中，鞭毛一端的动态基质显示出清晰的荧光。 因此，该试验具有测定抗dsDNA抗体特异性强、敏感性高的优点。 短膜虫对人畜无害，可以人工养殖，来源方便，值得普及。 2 .放射免疫法经常检测抗DNA抗体，有Farr法和过滤法。 Farr法的原理是，用同位素标记DNA，标记的DNA与被测血清的抗DNA抗体结合，用50%硫酸铵饱和液沉淀，比较沉淀物和上清液中的放射活性，得到DNA结合活性，一般的结合率在20%以上为阳性。 过滤法在分离结合物时用纤维素酯膜过滤器(孔径0.45m )过滤，游离的DNA被过滤，与抗体结合的复合物停留在过滤膜上。 3.ELISA临床主要用间接ELISA检测抗dsDNA抗体，其重现性和敏感性高于对流免疫电泳和双扩散。 现在已经准备了试剂盒。 4 .免疫印迹(immunoblotting )首先以混合抗原为凝胶电泳，从不同区域分离，转移到硝酸纤维素膜上，最后用酸标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。 因为这个试验不需要精制的单一抗原，所以可以在同一固相进行多个分析检查，灵敏度高，特异性强。 因此，现在广泛应用于检测自身免疫疾病患者血清中的多种自身抗体，例如抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS-A抗体和SS-B抗体。 并且，也可以利用传统的琼脂双向扩散法、对流免疫电泳法、间接凝血法和补体结合试验等。 这些试验要求的实验条件低，但敏感性也低。 二、类风湿性关节炎因子 类风湿性关节炎因子(RF )是抗变性IgG的自身抗体，主要是19S的IgM，也可以看到7S的IgG和IgA。 与人和动物的变性IgG结合，与正常IgG不发生凝聚反应。 RF主要出现在类风湿性关节炎患者中，在约70%~90%的血清中和约60%的滑翔液中检测出IgG类RF，很有可能是由自身IgG变性引起的自身免疫应答的表现。 IgG是由感染等原因引起的免疫应答中的主干抗体，这些抗体与相应的抗原结合后就会变性，而且炎症等病理条件下降，其他部位可能发生异常的IgG，这些改性IgG构成自身抗原，刺激免疫系统产生各种各样的抗IgG抗体。 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合形成中度免疫复合体，比血清中的IgM类RF具有病原意义。 这种免疫复合物容易堆积在关节滑膜等部位，可激活补体，形成慢性进行性免疫炎症性损伤。 RF的测定最初用致敏羊红细胞凝集试验(Rose-Waaler法)测定，目前最常采用吸附在IgG上的胶乳粒子凝集试验，但该方法的灵敏度和特异性都不高，只能检测血清中的IgM系RF。 IgG类和IgA类的RF需要用RIA和ELISA等方法进行测量。 类风湿性关节炎患者RF的检出率高，RF阳性支持早期RA的倾向性诊断，如诊断非活动期RA应对年轻女性进行RA和风湿热鉴别，需要参考病史。 但是RF也不是像ANA一样RA特有的特异性抗体。 SLE患者有50%的RF阳性，其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎和老年人有一定的阳性率。 三、其他自身抗体 (1)抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体 此类抗体相对于甲状腺的多种成分，以甲状腺球蛋白和微粒体为代表。 抗体主要是IgG，通过ADCC活性，引起慢性淋巴细胞性甲状腺炎，也称乔本(Hashimoto )甲状腺炎。 检查方法多使用免疫荧光技术，以甲状腺组织的冻结切片为基质。 也可以用RIA、ESISA等方法进行检查。 强阳性反应和高滴度抗体对焦班甲状腺炎和原发性甲状腺功能低下症有诊断意义，抗体变化对评价疾病治疗的转归非常重要，对焦班甲状腺炎和甲状腺功能亢进的鉴别诊断也有很大价值。 健康人的血清中没有检测出甲状腺抗体，或者没有疾病症状的人只有5%~10%有低反应的女性和年龄大的人检测率很高。 检测出这种抗体，表明过去得过自己的病，可能是自己免疫疾病的初期指标。 甲状腺功能亢进(Graves病)患者血清中存在甲状腺刺激抗体(TSAb )，包括长期甲状腺刺激素(LATS )和LATS者(LATS-P )。 这些抗体作用于甲状腺细胞表面的TSH受体，激活受体，促进甲状腺素释放的甲状腺激素过剩会促进机体代谢。 (2)抗乙酰胆碱受体抗体 抗乙酰胆碱受体(AchR )抗体结合横纹肌细胞的乙酰胆碱受体，引起运动终板的破坏，引起神经肌之间的信号转导障碍，引起骨髓肌运动无力，被称为重症肌无力(myastherniagravis，MG )。 疾病可以在任何年龄发病，最初出现的症状总是眼肌无力，再波及其他部位，呈进行性加重。 抗AchR抗体多用敏感的方法检测。 ELISA法：用-银环蛇毒素包复酶标记板，给予骨骼肌和匀浆(包括AchR )作用，加入要检测的血清和对照血清，加上酶标记抗体。 试验的正常结果为阴性或0.03mmol/L。 放免法：放射性同位素标记的―银环蛇毒素和骨同质结合，加入患者的血清和抗人IgG沉淀，检测沉淀物的放射性。 抗AchR抗体的测定对MG有诊断意义，特异性和敏感性高，约90%的MG患者伴有阳性的眼肌症状的患者，抗体效价低于普通症状的患者，并用于监测免疫抑制治疗对该病的效果。 肌萎缩侧索硬化症患者经蛇毒治疗后，出现假阳性。 (3)抗平滑肌抗体 抗平滑肌抗体(ASMA )的产生机制尚不清楚，但与肝和胆管的自身免疫疾病尤其是慢性活动性肝炎(狼疮性肝炎)和原发性胆汁性肝硬化(PBC )有关。 此类疾病的发生与自身免疫性密切相关，试验结果有助于诊断及与其他肝病的鉴别诊断。 ASMA检查采用间接免疫荧光法，以大鼠胃大弯或小弯的冻结切片为基质的正常结果为阴性或1:20。 阳性率高的病在检测出慢性活动性肝炎和PBC的肝外性胆汁闭塞、药物诱发性肝病、急性毒性肝炎、肝细胞癌等中，ASMA的检出率极低。 (4)抗心肌抗体 心肌损伤(例如手术、感染、梗塞等)时，心肌细胞内的物质会被释放出，作为隐藏抗原刺激生物体抗体。 这些抗体和心脏的结合可引起新的免疫性损伤，如心包切开综合征、风湿性心脏病等。 抗心肌抗体的检查以胎儿或大鼠心肌的冻结切片为抗原基质进行免疫荧光检查，正常值为阴性。 阳性结果相关的疾病有心脏术后综合征、心肌梗塞后综合征、风湿性心脏病等。 (5)抗线粒体抗体(AMA )检测 抗线粒体抗体(AMA )抗原是内层线粒体膜，没有器官特异性和种特异性。 该抗体主要是IgG，与PBC相关，但对肝细胞和胆管没有直接的损伤效果，在疾病中的作用尚不清楚。 AMA用免疫荧光法测定，也可以用大鼠肾冻结切片为基质的补体结合试验检测。 正常结果为阴性或有效值在1:5以下。 PBC患者79%~94%可为阳性反应或有效价1:160的长期持续性肝闭塞、慢性活性肝炎； 原因不明性肝硬化等也显示阳性反应。 但是，肝外性黄疸为阴性。 (6)抗胃壁细胞抗体 抗胃壁细胞抗体(APA )破坏胃粘膜壁细胞，使内因子发生障碍，有时会发现抗内因子抗体来阻碍功能，引起恶性贫血。 患者没有前驱症状或患胃炎。 APA用间接免疫荧光法测定，以人或兔胃冻结切片为抗原基质，正常成人为阴性反应，正常儿童有2%~20%的检出率。 恶性贫血患者可以检测抗胃壁细胞或抗内源性抗体。 其他各种贫血患者都不能检测出任何抗体。 胃溃疡和胃癌等抗体阳性极少。 (7)抗胰岛素抗体 抗胰岛素抗体可在体内与胰岛素结合形成抗原抗体复合体，显着降低或禁用胰岛素活性，引起胰岛素依赖性糖尿病，如不大量注入胰岛素，就无法获得疗效。 该抗体主要是IgG，另外4种Ig也存在的IgE系抗体可以引起患者的过敏反应，IgM系可能引起胰岛素耐受性。 用于检测抗胰岛素抗体及其免疫球蛋白种类的方法有多种，如琼脂扩散试验、间接凝血和ELISA等，试验结果有助于糖尿病的分型诊断和适当治疗。 它也可以用于监测患者的胰岛素耐受性。 (8)抗肾小球基膜抗体 抗肾小球基膜(GBM )抗体在链球菌感染后，多在共同抗原交叉诱导下产生。 抗GBM抗体会引起GBM损伤，导致肾小球肾炎的发生。 抗GBM抗体的检测也采用荧光和酶免疫组织化法，以动物和人的肾组织冻结切片为抗原基质。 阳性反应与肾小球血管走行一致，可见荧光染色或酶基质染色，这与免疫复合体的斑状分布染色现象完全不同。 试验正常值为阴性。 该试验主要用于肾小球肾炎的分型诊断和鉴别诊断。 约5%的肾小球肾炎由抗GBM抗体诱发，是自身免疫性。 (9)抗精子抗体 正常情况下，精细胞是隐藏抗原，但外伤、手术或感染时，精子与免疫系统接触，使机体产生抗精子抗体。 高滴度抗精子抗体能降低精细胞的活力，进一步减少数量，是男性不育症的原因之一。 部分女性也检测出抗精子抗体，可能与不育有关。 抗精子抗体的检测方法很多，如精子制动试验、精子凝聚试验、免疫荧光法、ELISA法和免疫珠子结合法等。 与抗精子抗体阳性相关的疾病有实验性输精管闭塞和输精管切断等，部分女性和孕妇也能检测出抗精子抗体。 (10 )抗血球抗体 抗红细胞抗体主要与ABO的Rh血型抗体和自身免疫性抗体有关，与输血、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血等有关。 抗血小板和抗白细胞抗体等与自身免疫性血液疾病有关。 四、其他免疫学检查 (1)淋巴球检查 自身免疫病多与自身抗体有关，但一些疾病没有相关的自身抗体，与致敏淋巴细胞有关，也有可能与免疫调节异常或其他因素有关。 这些相关因素的检测对诊断疾病有一定的参考意义。 1特异性感作淋巴细胞是溃疡性大肠炎、周围神经炎及实验性过敏性脑脊髓炎等疾病，可能与自身反应性性感作淋巴细胞有关。 虽然这些淋巴细胞在疾病中的正确作用比自身抗体的作用更难证实，但相关性本身也有一定的参考价值。 致敏淋巴细胞的检测可以用器官特异性抗原作为诱导剂，进行淋巴细胞转化试验和吞噬细胞移动抑制试验等的皮肤试验也能反映生物体的过敏状况，但有诱发敏感性和过敏反应的危险。 实验结果应结合临床和其他检查进行综合分析。

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