小鼠骨髓细胞染色体制备与观察_第1页
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文档简介

.,实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察,.,实验原理,小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。,.,秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。,.,.,实验目的与要求：1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。器材与试剂内容与方法（一）小鼠骨髓细胞染色体制备预处理,取材，收集细胞,低渗,固定、再固定,滴片,染色,.,取材前23h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。,腹腔内注射秋水仙素23小时后，颈椎脱臼处死小鼠。,.,小白鼠骨骼标本,.,.,取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。,.,用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净,注射器抽取生理盐水冲洗骨髓,.,收集细胞：,暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，收集到离心管中,定容至6ml.,.,滴23滴于玻片上，吹气，在酒精灯火焰过火8次，做记号，凉干，染色,滴片：,滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，1015分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。,.,.,.,作业与思考题,1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？3、简述实验中应注意那些关键问题？,.,（二）染色体标本片观察1.标本片质量评价（1）细胞密度合适、均匀；（2）背景干净，细胞核和染色体清晰；（3）有较多的分裂相；（4）染色体分散较好。,.,细胞密度,.,染色体分散度,.,2.染色体形态特征观察,.,3.染色体计数,（10010）,15,16,9,9+16+15=40,10,8,22,22+8+10=40,.,4.细胞增殖指数统计,细胞增殖指数=,100%,.,实验三细胞器的观察,一、中心体二、高尔基体,.,一、中心体（410）,马蛔虫子宫横切片全貌,.,中心体（1010）,.,中心体（4010）,.,二、高尔基体（410）
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