细胞生物学03ppt课件

.细胞生物学讲座：黄霄云，第3章细胞生物学研究方法，细胞形态和结构的观察方法，细胞成分的分析方法，细胞培养，细胞工程和显微操作技术，第1节细胞形态和结构的观察方法，lightmicroscopy)electromicroscopy)扫描隧道显微镜，第2节细胞成分分析方法，离心分离技术，显示细胞内核酸、蛋白质、酶、糖和脂类的方法，特异性蛋白质抗原的定位和定性细胞内特异性核酸的定位以及定性放射自显影技术， 定量细胞化学分析技术，第3节细胞培养，细胞工程和显微操作技术，细胞培养和细胞工程，第1节光镜技术，普通复合光学显微镜技术，FluorescenceMicroscopy)技术，LaserConfocalMicroscopy)显微镜技术，phase-contrastmicroscope)微分差异控制显微镜，DIC。 嘿。2.电子显微镜技术；电子显微镜基础知识；电子显微镜和光学显微镜的比较；电子显微镜的基本结构；主电子显微镜样品制备技术；阴性染色技术冷冻蚀刻技术；超薄切片技术；电子显微镜三维重建技术；扫描电子显微镜；扫描隧道显微镜(扫描隧道显微镜)、扫描隧道显微镜、扫描隧道显微镜、扫描隧道显微镜(20世纪80年代开发的一种检测样品微观结构的仪器)包括：扫描隧道显微镜、原子力显微镜、磁显微镜、摩擦显微镜等原理：当扫描探针与样品接触或达到非常近的距离时，也就是说，相互作用力如隧道效应(隧道电流)、原子间作用力、磁力、摩擦力等。在量子力学中产生并显示在计算机上，从而反映样品的表面形貌信息、电特性或磁特性。器件：扫描压电陶瓷、逼近器件、电子反馈控制系统和数据采集、处理和显示系统。特点：(1)能成像晶体或非晶，不需要复杂的计算，分辨率高。(横向分辨率为0.1 0.2纳米，纵向分辨率可达0.01纳米)；(2)可以实时获取样品表面的三维图像，并测量厚度信息；(3)能在真空、大气、液体等条件下工作。无损测量。(4)连续成像和动态观察：纳米生物学领域中在原子水平揭示样品表面结构的重要工具。在普通复合光学显微镜技术中，制作光学显微镜样品的分辨率是指两个粒子之间的最小距离。FluorescenceMicroscopy),技术、直接荧光标记技术的原理和应用间接免疫荧光技术是用于在光学显微镜水平上定性定位生物大分子如特定蛋白，如绿色荧光蛋白(GFP)的应用。激光共焦扫描显微镜(laserscanningconfocalmicroscophysics)通过消除焦平面外光的干扰，增强图像对比度和分辨率(1.4-1.7)，可以重建样品的三维结构。相差显微镜将光程差或相差转化为振幅差，可以用来观察活细胞差干涉显微镜的偏振光合成后，样品中的细微厚度差异转化为明暗差异，从而增加样品的对比度，具有立体感。适用于研究活细胞中较大细胞器的视频增强显微技术的计算机辅助弥散张量成像显微镜，可以高分辨率研究活细胞中颗粒和细胞器的运动，电子显微镜与光学显微镜的比较，电子显微镜与光学显微镜的光路图的比较，电子显微镜的基本结构，电子显微镜的主要制样技术， 超薄切片技术电镜观察样品制备示意图负片技术和金属投影染色背景衬托出样品的精细结构冷冻蚀刻(技术示意图)冷冻断裂和蚀刻复制品：主要用于观察膜断裂表面的蛋白质颗粒和膜的表面结构。快速冷冻深蚀刻(QuickFreezeDeepetching)将电子显微镜、电子衍射和计算机图像处理技术相结合，形成了一种具有重要应用前景的新技术。电子显微镜三维重建技术、X射线晶体衍射技术和核磁共振分析技术的结合是目前结构生物学研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。，扫描电子显微镜，原理和应用：电子“探针”扫描，激发样品表面释放二次电子，探测器收集二次电子成像。CO2临界点干燥法可防止导致样品变形的表面张力问题。离心分离技术，应用：差速离心，用于从生物大分子及其复合物中分离细胞器：密度梯度离心，用于不同分离密度的细胞成分：精细成分或生物大分子的分离。细胞内核酸、蛋白质、酶、糖和脂类等的展示方法。原理：利用某些显色剂与被测物质中某些特殊基团特定结合的特点，通过显色剂在细胞中的位置和颜色的深浅来判断细胞中某些物质的分布和含量。费尔根斯坦第三章。特异性蛋白抗原的定位和鉴定。免疫荧光技术：快速、灵敏、特异，但分辨率有限(图)。蛋白质电泳(SDS-PAGE)和Western-Blot)免疫电子显微镜技术：免疫铁蛋白技术免疫酶标记技术免疫胶体金技术的应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动力学；胞内酶的研究：膜蛋白和骨架蛋白的定位等.4.细胞中特定核酸的定位和表征，光学显微镜水平的原位杂交技术(同位素标记的或荧光素标记的探针)，电子显微镜水平的原位杂交技术(生物素标记的探针结合与抗生物素抗体连接的胶体金标记)PCR技术.5.放射自显影技术、原理和应用：通过同位素放射自显影对细胞内生物大分子进行定性、定位和半定量研究；实现细胞内生物大分子的动态跟踪研究。步骤：前体掺入细胞(标记：连续标记和脉冲标记)-放射自显影，6。定量细胞化学分析技术，细胞显微分光光度术(MICROSPECTROPHOTOMETRY)利用细胞中某些物质对特定光谱的吸收来确定细胞中这些物质(如核酸和蛋白质)的含量。包括以下步骤：紫外显微分光光度法可见显微分光光度法FlowCytometry)主要用于定量测定细胞中DNA、RNA或特定蛋白质含量；确定细胞群中不同阶段的细胞数量；从细胞群中分离一些特殊染色的细胞；不同DNA含量中期染色体的分离。细胞培养，动物细胞培养类型：原代培养细胞sub-culturecell)细胞系的正常二倍体和接触抑制细胞系的亚二倍体。植物细胞培养类型的接触抑制丧失：原生质体培养(体细胞培养)单倍体细胞培养(花药培养)无细胞系统。细胞融合和细胞杂交技术单克隆抗体技术图表细胞分离和显微操作技术物理方法与显微操作技术相结合(图1和图2)化学方法与离心技术相结合制备细胞核体和细胞质体。细胞生命活动的研究已经成为当今生命科学发展的瓶颈，细胞生命活动