第44讲克隆技术.ppt

现代生物技术专题，第10章，第44讲克隆技术，栏目导航，细胞工程概念1。原理和方法：应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法。2.操作层：_ _ _ _ _ _ _ _层或细胞器层。3.目的：根据人类的意愿改变细胞中的遗传物质或获得_ _ _ _ _ _ _。4.分类：根据操作对象的不同，分为植物细胞工程和动物细胞工程。试验地点一植物组织培养和动物细胞培养，细胞，细胞产品，二植物组织培养1。原则：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(1)原因：一个有机体的任何细胞都含有该物种。(2)无所不能表达的条件：处于_ _ _ _ _ _ _ _状态，提供一定的营养，_ _ _ _ _ _ _ _ _和其他合适的外部条件。细胞全能性，所有遗传信息，体外，激素，去分化，愈伤组织，再分化，优良品种的遗传特征，分生区，愈伤组织，3，动物细胞培养物1。过程应答胰蛋白酶原代传代，2。条件(1)无菌、无毒环境无菌处理，外加_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _灭菌，定期更换培养液。(2)营养葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐和微量元素等天然成分。(3)适宜的温度(36.50.5)和ph (7.2 7.4)。(4)气体环境95%空气5% CO2(保持_ _ _ _ _ _ _ _ _ _)。3.用途：生产细胞产品，如干扰素、疫苗和单克隆抗体；检测和判断有毒物质的毒性；临床医学研究。抗生素，血清或血浆，培养液的酸碱度，1。判断对错，画“”，画“错”。(1)诱导棉花根尖细胞形成幼苗，这可以反映细胞的全能性。()(2)在离体诱导菊花茎段成苗的过程中，细胞增殖和分化不会同时发生。()(3)愈伤组织是由外植体脱分化和再分化形成的。(4)在植物组织培养过程中，可以通过人工薄膜包装提取愈伤组织并获得人工种子。()、(5)制备肝细胞悬液时，先用剪刀切开肝组织，然后用胃蛋白酶处理。()(6)在肝细胞培养过程中，通常向培养液中引入5%的CO2来刺激细胞呼吸。()(7)连续细胞系的大多数细胞具有二倍体核型。(8)植物原生质体融合和动物细胞融合的原理是相同的。()，2。下图显示了通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的方法。以下陈述是不正确的()a .这种方式的原理是植物细胞具有全能性B .过程培养基中植物激素的比例需要控制C .过程细胞的形态和结构已经改变D .过程需要使用液体培养基来促进细胞增殖和分析。这种方法不能获得完整的植物，也不能反映植物细胞的全能性。一些具有很高观赏价值的稀有兰花很难获得成熟的种子。为了尽快推广种植，可以利用各种技术获得大量优质种苗。在以下技术中，不能选择的有：(1)茎段扦插快速育苗诱导生根技术(2)花粉粒组织培养获得的单倍体苗(3)收集幼芽并嫁接到其它合适的植物上(4)组织培养是利用幼叶、茎尖和其它部分的组织进行的，以分析花粉粒是减数分裂的产物。通过花粉粒离体培养获得的单倍体幼苗是高度不育的，并将经历性状分离。因此，不能选择选项B。B，1。脱分化与再分化的比较，植物组织培养方法及应用，2。单倍体育种和突变体利用之间的差异实施例1如图所示，通过无菌操作将胡萝卜韧皮部细胞插入试管后，在一定条件下形成试管苗的培养过程。请根据图片回答以下问题：(1)为了促进细胞分裂和生长，培养基中应包含营养和激素。营养物质包括_ _ _ _ _ _ _和小分子有机物，激素包括细胞分裂素和_ _ _ _ _ _两种植物激素。无机物生长素的过程是基于这样的原理阶段B需要照明，因为_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(4)试管苗的根细胞没有叶绿素，叶肉细胞有叶绿素，这是基因_ _ _ _ _ _的结果。植物细胞全能性、有丝分裂、分化、培养基、芽发育成叶、叶肉细胞中的叶绿素合成需要光照条件、选择性表达、分析(1)为了促进细胞分裂和生长，培养基应含有营养物质和激素。营养物质包括无机物和小分子有机物。激素包括细胞分裂素和生长素。(2)植物组织培养过程的基本原则是植物细胞的全能性。甲是去分化过程，乙是再分化过程，两者都经历有丝分裂，在乙阶段，除了细胞分裂，细胞分化等。(3)植物组织培养过程需要无菌操作，主要指培养基的灭菌和消毒。在再分化阶段需要光，因为在这个过程中芽发育成叶子，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光条件。(4)试管苗的根细胞没有叶绿素，叶肉细胞有叶绿素，这是基因选择性表达的结果。(1)原代培养和传代培养(1)原代培养可以用两种方式表达：细胞悬液第一次在瓶中培养，瓶培养前没有细胞培养；(2)第一代细胞培养物和10代以内的细胞培养物统称为原代培养物。这两种表达方式没有本质区别。(2)传代培养也有两种表现：细胞悬浮培养一段时间后，在瓶中进行细胞培养；10代后的细胞培养统称为继代培养。细胞系和细胞系(1)细胞系：原代培养的细胞一般经过10代左右，会出现生长停滞、衰老和死亡。少数经过“危机”的细胞可以经过大约50代形成细胞系。细胞系的遗传物质没有改变。(2)细胞系：在细胞系被转移到50代后，将会有第二次危机。少数已经度过第二次危机的细胞可以无限期传代培养形成细胞系。细胞系的遗传物质随着癌细胞的特征而改变。实施例2回答以下关于动物细胞培养的问题：(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂并生长到细胞表面时，细胞将停止分裂和增殖，称为_ _ _ _ _ _ _。此时，瓶壁上形成的细胞层数为_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。为了从瓶壁上分离贴壁细胞，有必要用酶处理它们。常用的酶是_ _ _ _ _ _ _。(2)随着细胞传代次数的增加，大部分细胞分裂停止，然后出现_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _现象；然而，很少有细胞能够持续增殖，其中一些细胞会由于遗传物质的变化而获得_ _ _ _ _ _ _ _ _。这些细胞的粘附力为_ _ _ _ _ _，细胞膜表面的蛋白质(糖蛋白)量为_ _ _ _ _ _。相互接触、接触抑制、单层(或层)、胰蛋白酶、老化甚至死亡、不朽、还原、还原，(3)当用某种大分子染料染色细胞时，观察到死亡细胞被染色而活细胞不被染色。原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。 (4)检查某些有毒物质是否能改变细胞中染色体的数量，最好选择分成_ _ _ _ _ _期的细胞用显微镜观察。(5)在细胞培养过程中，细胞通常保存在_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _条件下。因为在这种条件下，细胞中_ _ _ _ _ _ _的活性降低，细胞新陈代谢的速度降低。(6)将细胞培养形成的皮肤移植给患者后发生排斥反应，因为机体以_ _ _ _ _ _攻击移植皮肤。活细胞膜具有选择性通透性。大分子染料不能进入活细胞，因此活细胞不能着色(或者死细胞的膜失去选择性渗透性，大分子染料可以进入死细胞着色)。中等，冷冻(或超低温(2)随着细胞传代次数的增加，大多数细胞停止分裂，导致衰老甚至死亡。然而，一些细胞可以持续增殖，一些细胞会因遗传物质的变化而获得永生。这种细胞膜表面糖蛋白减少，细胞粘附减少。(3)由于活细胞膜的选择性通透性，大分子染料不能进入活细胞，而死细胞的细胞膜失去了选择性通透性，大分子染料可以进入死细胞并对其染色。(4)由于细胞分裂中期的染色体形状固定，数目清楚，所以最好选择分裂中期的细胞，用显微镜观察染色体数目。(5)在冷冻、超低温或液氮条件下，随着细胞中酶活性的降低和细胞代谢速率的降低，细胞通常在这种条件下保存。(6)当身体攻击作为抗原的移植皮肤时，会发生排斥反应。(1)外植体应消毒；用嫩组织去分化外植体更容易。植物组织培养中使用的有机碳源通常是蔗糖。(2)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中使用两次：第一次是将切割组织分散成单个细胞；第二次是从瓶壁上分离贴壁细胞。【例1】(2014年北京卷)在25下能成功完成的是：(1)光合色素的提取和分离；(2)还原糖的鉴定；(3)大鼠神经细胞的培养；(4)植物组织培养固体培养基的制备【答案提交】来源于一位著名审查员的报告【解析】光合色素的提取和分离可以在室温下完成，第(1)项是正确的。用斐林试剂鉴别还原糖需要50 65水浴加热，b项有误；大鼠神经细胞是高度分化的细胞，不能分裂和培养。丙项错了。制备用于植物组织培养的固体培养基需要高温灭菌，项目D错误。标准答案A(6分)，1分。(经典高考试题)关于动物细胞培养和植物组织培养的描述，错误是()a .动物细胞培养和植物组织培养使用不同的培养基b .胰蛋白酶c .烟叶培养在体外可以产生新的个体，小鼠杂交瘤细胞可以在体外增殖培养d .动物细胞培养可以用来检测有毒物质。茎尖培养可用于植物病毒的去除和分析。动物细胞培养用培养基为液体培养基，含有动物血清。植物组织培养的培养基是固体培养基，通常含有植物激素。植物组织培养过程中不需要胰蛋白酶；体外培养烟叶产生新个体的原理是植物细胞的全能性，体外培养小鼠杂交瘤细胞的原理是细胞增殖。茎尖病毒很罕见，甚至没有病毒，所以茎尖培养可以用来给植物解毒。B，1。测试点2的植物细胞杂交技术、植物细胞杂交和动物细胞融合，(1)去壁：酶水解，所用的酶是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)诱导原生质体融合：物理方法离心、振动、电刺激等。化学方法通常使用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _(聚乙二醇)作为诱导剂。(3)植物细胞成功融合的迹象：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(4)优势：克服_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(5)变更类型：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。纤维素酶和果胶酶，聚乙二醇，杂交细胞的细胞壁再生，不同生物远缘杂交的不相容性障碍，染色体变异，2。动物细胞融合(1)原理：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)融合方法：聚乙二醇、电休克等。(3)意义：突破_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _的限制，使_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _成为可能，开辟了制造_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _的新途径。3.动物体细胞核移植(1)原理：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)过程、细胞膜流动性、灭活病毒、有性杂交方法、远缘杂交、单克隆抗体、动物细胞核具有全能性。单克隆抗体的制备(1)制备过程应答杂交瘤细胞单克隆抗体，(2)诱导动物细胞融合的方法：物理方法离心、振动、电刺激等。化学方法聚乙二醇(4)单克隆抗体的应用：as _ _ _ _ _ _ _ _ _它用于治疗疾病和_ _ _ _ _ _ _ _ _ _。灭活病毒，强特异性，诊断试剂，药物输送，1。判断对错，画“”，画“错”。(1)两种植物细胞可以通过物理或化学方法直接诱导和融合。()(2)通过纤维素酶和果胶酶水解获得的植物原生质体失去全能性。()(3)再生细胞壁是植物原生质体成功融合的标志。(4)与克隆哺乳动物如多莉羊相关的技术包括胚胎移植、细胞培养和核移植。()灭活病毒能促进动物细胞融合，但不能促进植物细胞融合。()(6)小鼠骨髓瘤细胞染色体数为40，B淋巴细胞染色体数为46，融合后形成的杂交瘤细胞的DNA分子数为86。()(7)在体内培养杂交瘤细胞以获得能够产生单克隆抗体的胚胎。()(8)体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体。()、2。“甘蓝-甘蓝”是利用细胞工程培育的蔬菜新品种。它具有生长期短、耐热性强、易于保存的优点。下图是“甘蓝-甘蓝”杂交过程的示意图。下面的陈述是正确的()，c，a .除去细胞壁形成原生质体，可以使用的酶是纤维素酶，淀粉酶和果胶酶b .通常，可以诱导上述原生质体彼此融合的方法是聚乙二醇和灭活病毒c .杂交细胞形成的标志是诱导新的细胞壁d .愈伤组织形成为“卷心菜”植物必须经历去分化和再分化两个过程。去除细胞壁的酶是纤维素酶和果胶酶；灭活病毒不能用于诱导植物原生质体融合；杂交细胞形成的标志是新细胞壁的诱导。形成“甘蓝-甘蓝”植株的愈伤组织属于再分化过程。在以下单克隆抗体制备过程示意图的描述中，不正确的是()a. 表明免疫的b淋巴细胞和骨髓瘤细胞都是从小鼠脾脏中提取的。b. 促进细胞融合的方法可由聚乙二醇介导。通过抗原抗体反应进行筛选。d. 免疫b淋巴细胞可从小鼠脾脏或血浆中提取，骨髓瘤细胞可从小鼠骨髓中提取。植物组织培养和植物细胞杂交的比较，一种植物细胞杂交，两种植物细胞杂交和有性杂交的不明确区分(1)植物细胞杂交：如果两种不同的植物细胞a和b融合，a包含2X染色体