硕士论文-枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病的研究

东南大学硕士学位论文枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病的研究姓名张勇申请学位级别硕士专业营养与食品卫生学指导教师孙桂菊黄杰20040601东南大学硕士学位论文血清肌酐含量，增加模型大鼠的内生肌酐清除率，减轻糖尿病对模型大鼠肾脏病理的改变，具有明显保护模型大鼠肾功能的作用。可以初步认为，通过降低血糖，增加机体对的敏感性，改善周围组织对葡萄糖的利用；通过降低肾脏活性，减少体内一的分泌，降低血清的形成；并有可能通过影响肾索一血管紧张素系统，改善高血糖引起的肾小球高灌注、高滤过状况，从而起到预防糖尿病肾病的作用，其确切机制尚有待于进一步的研究。本研究证实，具有明显的降血糖、增加机体水平、肝糖原含量及保护肾功能等作用，如将其作为治疗糖尿病及预防糖尿病肾病的药物及有辅助降血糖作用的保健食品进行开发，会具有广阔的前景。关键词枸杞；枸杞多糖；提取；糖尿病；糖尿病肾病；降血糖站土纳。曩，（）、（）（），（）、。【（），、，。，、（），（），），（），一一（）。，（），（）；，；东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名旅谤日期磷阳东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保留论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。论文的公布（包括刊登）授权在东南大学研究生院办理。研究生签名叛勇重要塑堕塑查一主要缩略词表。）（）（）（“）（）（）（）（）（）（）（）（）一（一）（）（）（）（）（）（）枸丰己多糖空腹血糖胰岛素空腹胰岛素胰岛素敏感指数非酶糖基化终产物型糖尿病糖尿病肾病链尿佐菌素肢岛素抵抗总胆同醇甘油三酯肌酐醛糖还原酶糠化血红蛋白流动注射分析白介素超氧化物歧化酶丙醛多不饱和脂肪酸放射免疫测定聚合酶链反应逆转录聚合酶链反应前言枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的研究刖菁糖尿病是严重影响人类健康的非传染性疾病，近年来发病率呈上升趋势，初步估计我国现有糖尿病患者万人以上，其中型糖尿病约占，糖尿病已成为我国重要的公共卫生问题。型糖尿病（，）病因复杂，其发病机理尚未完全清楚，目前多数认为是多种环境因素和遗传因素共同作用所致的慢性疾病。其中饮食因素如能量摄入多消耗少而导致肥胖及能量代谢紊乱在型糖尿病的发生发展中起重要作用。型糖尿病病人除高血糖外，一般均有脂质代谢异常和胰岛素抵抗（，），这些已经在喂饲高热能高脂肪饲料的动物模型中得到证实呻。糖尿病肾病（，）是糖尿病慢性血管并发症之一，随着糖尿病治疗手段的提高，存活时间的延长，已成为糖尿病特别是型糖尿病的严重并发症之一。已是西方国家引起终末期肾病的首位病因。在我国，发病率亦呈明显地逐年增加趋势，在糖尿病患者中其总发生率已高达左右，严重影响糖尿病患者的生活质量，并增加患者家庭和社会的经济负担【】。有关的发生机理尚无定论，目前研究比较多的大致有以下几个方面组织非酶糖基化终产物（）蓄积孙子林】等报道，糖尿病组小鼠糖基化终产物水平显著高于对照组，认为其在发生中可能起重要作用，而且由于其反复交联的特性，小分子糖基化终产物（）在等并发症发生、发展中的作用更加重要”。醛糖还原酶（，）活性改变高血糖时肾脏的活性可被激活，催化己糖（葡萄糖、半乳糖）转化为山梨醇等。由于山梨醇的极性很强，不易通过细胞膜，导致肾系膜细胞内山梨醇蓄积，使细胞处于高渗状态，过度吸水破坏生物膜的完整性，致使细胞、细胞器的结构功能改变，最终导致糖尿病并发症（包括）的发生。近年来发现某些生长因子，如等与发病有关。新近研究表明，临床常用降糖药的长期使用，或效果不佳，或有较严重的副作用。因此从天然药物中筛选和研究降糖药，已为世界各国医务工作者所瞩目。近年来国内外对具有降糖作用的植物多糖的化学和药理研究取得了很大进展，多糖类成分不仅是一种东南大学硕士学位论文非特异免疫增强剂，起到抗菌、抗病毒、抗肿瘤等功能，并具有降血糖、降血脂、降血压等多种生理活性，且无任何毒副作用。枸杞子是传统名贵中药，性甘平其功用补肾养阴，治虚劳消渴。在多种补盏方剂中均列为常用药味，有着悠久的临床应用历史，枸杞多糖（，）是其有效成分之一，它是酸性杂多糖与多肽或蛋白质构成的复合多糖。目前对于的研究较多的是其增强免疫，耐缺氧川，延缓衰老】等作用，降糖作用的研究较少，且为数不多的研究也是观察其对大剂量四氧嘧啶或链尿佐菌素（，）造成的、以破坏胰岛为特点的型糖尿病模型动物的降糖作用，尚未见关于对小剂量链尿佐菌素结合高能量饲料造成的型糖尿病大鼠的降糖作用的报道，而且也未见国内外有关预防作用的报道。本文将从宁夏枸杞中提取，研究其对型糖尿病大鼠血糖和肾功能等的影响。第一章枸杞多糖的提取第一章枸杞多糖的提取枸杞子系茄科植物枸杞的干燥果实，是传统名贵中药，素有“红宝”美称，主要生长在中国北方的内蒙、宁夏、河北等省，含有多种营养成分，其药理作用广泛。是从枸杞子中分离出的，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖等种单糖，通过不同形式的糖苷键连接起来，组成结构复杂而且庞大的，含有多种微量元素和氨基酸的一种蛋白杂多糖，具有广泛的生物活性”。随着分子生物学的发展，人们发现，枸杞子中的是其重要的有效成份，具有极其重要的生物功能，如降血糖、抗疲劳、增强免疫等。为此，我们从宁夏枸杞子中提取了，并对其糖含量进行测定。仪器、材料与试剂仪器索氏提取器通州市南兴申海玻仪厂旋转蒸发仪上海青浦沪西仪器厂，真空泵浙江临安精工真空设备厂分光光度计上海第三分析仪器厂玻璃层析柱（及）通州市南兴申海玻仪厂材料枸杞子系宁夏产宁夏枸杞的干燥成熟果实。试剂三氯甲烷、甲醇、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸等试剂均为分析纯。方法枸杞粗多糖的提取过程按孙智达等人方法适当改进【枸杞子一烘干一氯仿一甲醇（）脱脂、脱色一乙醇脱小分子糖一水提取一减压蒸馏浓缩一乙醇沉淀一有机溶剂脱水一真空干燥一枸杞粗多糖。具体方法如下称取枸杞子，。烘干，置于燥器中。粉碎，组装索氏提取器，以氯仿甲醇（）（下回流脱脂次，每次，残渣。下过夜。再用醇下回流次，每次，残渣加蒸馏水于提取次，每次，合并滤液并减压蒸馏浓缩至，于浓缩液中加入倍体积即的体积分数为的东南大学硕士学位论文乙醇，于冰箱冷藏静置后，离心，沉淀物先后用的乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤，真空干燥，得到枸杞粗多糖。中糖含量的测定（以葡萄糖计）取经脱脂、脱色、脱小分子糖后的，配制成溶液，用硫酸一苯酚法测定该溶液中糖的浓度，计算出总糖含量。方法如下对照液的配置精确称量。烘干至恒重的葡萄糖，定容至，取该溶液至的容量瓶中，定容至刻度，摇匀供试。标准曲线的制各精密量取对照溶液、，分别置容量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别吸取上述各溶液，置具塞试管中，加苯酚，摇匀。置沸水浴中，于波长处比色，根据吸光度绘制标准曲线。待测液的配置称取干燥至恒重的，溶解后转入容量瓶中，定容，摇匀。准确量取于容量瓶中，定容，摇匀。诹上述待测液，按制作标准曲线方法操作，测定吸光度，根据回归方程计算溶液浓度，进而计算出糖含量。结果枸杞粗多糖的提取三次提取，枸杞子分别得到粗多糖、，得率分别为、和，与文献报道基本一致。中糖含量的测定（以葡萄糖计）标准曲线见图，建立回归方程为，测定了三份，其糖含量分别为、。吸光度，糖含量瞀）图中糖含量测定标准曲线第一章枸杞多糖的提取讨论的提取方法主要有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、超临界萃取以及酶提取法等，前三种为化学方法，超临界萃取为物理方法结合生物方法，酶提取法为生物方法。热水浸提法是多糖提取的传统方法，用水作为溶剂浸提多糖，温度一般控制在。，在恒温水浴上回流小时，再用水将过滤后的滤渣反复浸提次，浓缩滤液。然后边搅拌边加入相当于浓缩液倍体积的乙醇，使多糖呈絮状析出，而蛋白质及其它成分保留在溶液中。滤出沉淀用丙酮或乙醚洗涤脱水，然后进行真空干燥或直接冷冻干燥得到粗多糖。酸浸提法是在酸性条件下完成的，一般是在的盐酸溶液中。恒温水浴浸提小时，用碱中和过滤，滤渣加盐酸溶液反复浸提次，最后合并滤液，浓缩。用乙醇沉淀、分离、洗涤脱水，干燥后得粗多糖。碱浸提法一般是在的氢氧化钠溶液中。恒温水浴中浸提小时，用酸中和过滤，滤渣加氢氧化钠溶液反复浸提次，最后合并滤液，浓缩。用乙醇沉淀、分离、洗涤脱水，干燥后得粗多糖。酶法从原理上不同于上述三种方法，该法是先用蛋白酶除去大部分的蛋白质，然后再从溶液中浸提多糖，其一般过程如下按原料水的比例配成溶液，调整适当的值，加入蛋白酶或复合酶制剂，置于。水浴中酶解小时，然后用乙醇沉淀、分离、洗涤脱水，干燥后得粗多糖。由于酸浸提法和碱浸提法很容易使部分多糖发生水解，进而破坏多糖的活性结构，而超临界萃取及酶水解法操作比较复杂，提取设备要求较高，工艺不易掌握，所以在本实验采用传统的热水浸提法提取。由于枸杞中含有香豆素、挥发油等脂溶性成分和一些色素，为了提高的质量，应先以有机溶剂进行脱脂、脱色。用的乙醇回流可以得到颜色较浅的，还可以除去部分小分子寡糖。提取过程中，温度应始终控制在。以下，如温度过高，多糖易褐色变，其理化性质有可能改变，故应使用减压蒸馏，以降低沸点，提高多糖的得率和稳定性。由于目前尚无标准品，故只能以葡萄糖的含量代替多糖的含量。因本研究关注的重点是的降血糖及预防作用，故在提取过程中末进行正交试验，由于动物实验对的需求量较大，也未对进行纯化，而只是用粗多糖进行动物实验。今后需对提取的最佳条件进行探索，并改进纯化工艺，东南大学硕士学位论文使各组分的提取能达到规模化，对各组分的结构特点加以研究，并用纯化组分进行动物实验，咀探讨的功效因子。第二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究第二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究随着经济和社会的发展，人们饮食习惯的改变，糖尿病已成为人类最重要的公共卫生问题之一，而在整个糖尿病病例中，型糖尿病在国外占以上，国内则更高，报道在以上【。因此，使用型糖尿病大鼠模型进行降血糖实验具有非常重要的意义。型糖尿病病因复杂，其发病机理尚未完全清楚，目前多数认为胰岛素作用受损（）及胰岛素分泌障碍起着重要作用【”。而当前关于降血糖作用的动物实验所使用的大多是大剂量链尿佐菌素（）或四氧嘧啶造成的，、以胰岛素分泌障碍为特征的型糖尿病模型，这与糖尿病发生的实际情况不符，故我们先以高脂饲料喂养，诱发，再腹腔注射小剂量，产生型糖尿病模型，用该模型评价的降血糖等作用。材料与方法主要试剂与仪器试剂、甘油醛、均为公司产品免疫组化用试剂盒（兔、鼠两用），染色试剂盒，封片剂均购自福州迈新生物制剂公司三氯甲烷、三氯乙酸，南京化学试剂一厂（焦炭酸二乙脂，公司产品）使用前以双蒸水稀释配成水，高压灭菌备用试剂，石蜡油，琼脂糖均购自上海生工生物工程技术服务有限公司逆转录酶，逆转录缓冲液，酶抑制剂（），聚合酶，聚合酶缓冲液均为公司产品，（）为上海生工生物工程技术服务有限公司产品仪器型电子天平，上海民桥电子仪器厂东南大学硕士学位论文型电子天平，上海精科天平厂生物显微镜，日本公司日立全自动生化分析仪，日本日立公司型分光光度计，上海第三分析仪器厂。一恒温箱，上海跃进医疗器械厂，台式高速冷冻离心机，法国公司一型快速混匀器，江苏国华仪器厂岛津高效液相色谱仪，日本岛滓公司型离心机，上海手术器械厂自动扩增仪，稳压稳流电泳仪，南京科宝仪器研究所一凝胶成像系统，上海复只科技有限公司受试样品按第一章方法进行提取，由于动物实验持续时间较长，用量较大，而我们提取的纯品受实验室实际提取规模的限制，产量有限，不可能满足动物实验的需要，故我们给予动物的是粗品。鉴于各批次提取的多糖含量有所不同，在动物实验过程中，我们以硫酸一苯酚法监测，保证给予大鼠的糖含量均大于（以葡萄糖计）。型糖尿病大鼠模型的建立参照已有文献，采用下述方法进行模型的建立。雄性大鼠，由中国科学院上海实验中心提供，生产许可证号（沪）。随机取只作为正常对照，给予普通饲料，其余全部给予高脂饲料（含蔗糖，猪油，植物油，胆固醇），喂养周后，高脂饲料组腹腔注射体重的，并继续给予高脂饲料周后，测定空腹血糖（，）、血清中水平、葡萄糖耐量试验，同时满足下列三项标准作为型糖尿病大鼠模型成立葡萄糖耐量实验曲线下面积；不小于正常大鼠的均值减一个标准差；【（空腹血糖值血清胰岛素水平）】，琏正常大鼠的均值一个标准差。第幸枸杞多糖降糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究动物分组与处理将糖尿病模型大鼠根据及葡萄糖耐量实验曲线下面积分为组，分别为模型对照组，只大鼠，继续给予高脂饲料，灌胃蒸馏水；低剂量组，只大鼠，在给予高脂饲料的同时灌胃给予体重；中剂量组，只大鼠，在给予高脂饲料的同时灌胃给予体重；高剂量组，只大鼠，在给予高脂饲料的同时灌胃给予体重。同时将常大鼠随机分为两组，每组只，一组灌胃给予与高剂量相同剂量的，另一组给予蒸馏水作为下常对照组。持续灌胃个月后，将各组大鼠分别置于代谢笼，留取小时尿标本，计量后一。保存，测定尿肌酐，大鼠断尾取血测定血清中各项指标，处死后取肝脏、一侧肾脏制备组织匀浆，进行肝糖元与肾脏活性的测定，另一侧肾脏及胰腺作病理切片检查。各组大鼠一第天采尾离心分钟一血清。冷冻保存。实验末各组大鼠一股动脉采血一颈椎脱臼处死一解剖一检查各主要器官病变发生情况一一侧肾脏制备组织匀浆，另一侧肾脏作常规病理切片检查及一免疫组织化学染色、胰腺作常规染色及细胞醛品红染色检查。指标测定动物生长状况每天观察动物一次，观察动物精神状况、行为和毛色有无异常。每周称重并记录动物体重一次，了解动物体重增长情况。血糖测定葡萄糖氧化酶法，用上海荣盛生物技术有限公司生产的试剂盒进行测定。糖耐量试验动物禁食小时后，先测定，然后灌胃给予体重的葡萄糖溶液，、小时时采尾血测血糖。血清水平测定放射免疫分析法（）测定，采用中国原子能科学研究院生产的放射免疫分析药盒进行测定。肝糖元水平测定蒽酮法，用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。血浆的测定采用德国拜耳公司的型糖化血红蛋白分析仪，试剂亦由拜耳公司提供。血清甘油酯（）、总胆固醇（）测定采用甘油磷酸氧化酶法测定血清水平，利用法测定血清水平，试剂盒均为上海荣盛生物东南大学碗士学位论文技术有限公司生产。内生肌酐清除率的计算血、尿肌酐测定，苦味酸法，采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，应用下列公式计算内生肌酐清除率内生肌酐清除率尿肌酐浓度尿量血清肌酐浓度。活力、含量的测定采用用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。肾脏醛糖还原酶（）活性测定按刘长山、曾昭淳、杨君等方法，】，用光径的石英比色杯在紫外分光光度计下记录、在处三分钟内吸光度下降值表示活性。反应体系使用两种，第一种体系包括甘油醛溶液（甘油醛溶解于缓冲液），溶液，蒸馏水，组织匀浆；第二种体系以溶液，代替，其余试剂同第一种体系。血清非酶糖基化终产物（）的测定流动注射分析法【取血清“加入装有的三氯乙酸（）的管（管）中，再加入氯仿，剧烈震荡以沉淀蛋白并将脂质抽提入有机相，离心分钟。小心吸取水层注入进样环，流动相（蒸馏水流动速率稳定在，紫外检测器设定波长测定肽含量。每份样本进样次，峰高用于计算结果。脏器组织病理学检查动物颈椎脱臼处死后，立即解剖进行大体检查；取胰腺、单侧肾脏，以福尔马林固定，常规取材，脱水，石蜡包埋，制片（，厚），染色，在光学显微镜下阅片，阅片后，胰腺及肾脏切片另存，分别作醛品红染色及免疫组化染色。大鼠肾脏含量的测定免疫组化法，按试剂盒操作步骤如下石蜡切片二甲苯脱蜡一依次以、乙醇分级酒精水化一洗次一滴加过氧化物酶阻断溶液，以阻断内源性过氧化物酶，室温分钟一洗次一将切片置于枸橼酸一枸橼酸钠缓冲溶液中，。热分钟，以修复抗原一洗次一吸去多余液体，滴加一抗，抗体稀释度为，。孵育小时一洗笫二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究次一滴加生物素化兔抗鼠二抗，（分钟一洗次，每次分钟一滴加链霉素抗生物过氧化物酶溶液，。分十洗次，每次分钟一加入显色剂显色，室温分钟，镜下控制显色一自来水冲洗终止反应一苏木素复染，水化分钟一封片剂封片逆转录聚合酶链式反应（）定肾脏一含量提取，具体步骤如下称取大鼠肾脏组织一将组织块）中，在玻璃匀浆器中充分研磨一一。的环境中孵育一。离心（）一将上层无色液体转移到新管中一加入异丙醇，充分混匀，室温一。冷冻离心（），弃去上清一加入乙醇，混合震荡，冷冻离心（），弃去上清一通风，室温中，使乙醇挥发一加入的灭菌水，吹打数次使混匀一。孵育，冰上冷却，供下一步实验用。逆转录（）取样本，紫外可见分光光度计测定总浓度，按浓度加相应体积的水，将总浓度稀释成。取，依次加入灭菌水，。水浴，冰浴，短暂离心收集液体于管底，共上面试管中依次加入下列成分缓冲液酶抑制剂逆转录酶灭菌水孵育，加热，立即冰育，短暂离心，反应产物用于扩增。加样，每管加入缓冲液东南大学硕士学位论文上游引物一下游引物上游引物下游引物酶灭菌水共用矿物油覆盖，转分，离心秒，把反应管放入仪中，进行如下循环。分钟次分钟。分钟广共个循环。分钟分钟次反应产物保存琼脂糖凝胶电泳的制备称取琼脂糖，倒入小锥形烧瓶内一加入溶液一微波加热，使琼脂糖颗粒全部融化一取出冷却至。，加入溴化乙锭（）一用透明胶带将电泳胶膜开口封注一在距胶膜底底位置放置梳子一将温热的琼脂糖倒入胶模中，凝胶厚度在之间一待胶完全凝固后，撕去胶带，将胶放入电泳槽内反应产物进行琼脂糖凝胶电泳向电泳槽内加入恰好没过胶面约的足量电泳缓冲液一用“的枪头吸取的产物，再加溴酚蓝（上样缓冲液），小心地加入样品孔内一盖上电泳槽并通电，样品向阳极移动（开始用电压，当样品从加样孔内移出后，改用电压）一约分钟后切断电源，在图像扫描仪下观察并扫描入电脑一用统计软件处理，得出目的条带与内参照条带的光密度比值统计方法实验所得数据均以（）表示，用统计软件包中的单因素方差分析进行各组问的比较，用检验进行各试验组与对照组的比较。第二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究结果与分析对大鼠体重及实验结束时小时尿量的影响造模成功后，模型大鼠毛色杂乱，饮水、尿量增多，行动迟缓，正常大鼠毛色正常，未见行为异常。实验过程中，模型对照组低、中、高剂量组及常对照高剂量组各有只大鼠死亡。各组大鼠体重变化情况见表。由表可见，实验开始时，各组大鼠体重问差异无显著性（）第一、二、三、四周时高剂量组体重及体重增加均明显高于模型对照组（），但仍低于正常对照组（）。实验结束时，各组大鼠尿量情况见表，由表可见，第四周末中、高剂量组尿量明显低于模型对照组（），但仍高于正常对照组（）。说明的使用可明显抑制糖尿瘸所导致的体重持续下降，降低大鼠尿量，改善糖尿病所引起的多尿、体熏降低的症状，但仍未能恢复至正常水平。表对大鼠体重（）的影响（）检验，与模型对照组比较均有显著性差异（）东南大学硕士学位论文表对尿量（）的影响（）注，检验，与模型对照组比较有显著性差异（）对血糖及糖耐量的影响造模后动物分组时，各组大鼠血糖水平见表，由表可见，动物分组时模型大鼠及曲线下面积明显高于正常对照组大鼠（），而模型大鼠各组间无显著差异。各组大鼠实验结束时血糖的变化见表。由表可见，实验结束时低剂量组、高剂量组大鼠的水平及曲线下面积均显著低于模型对照组（），但仍显著高于正常大鼠（），说明的应用降低了所建立的型糖尿瘸模型大鼠的血糖水平。从表还可以看出，以高剂量给予正常大鼠，血糖水平无显著性变化，且糖耐量实验与正常对照组大鼠相近，说明对正常大鼠的血糖水平和糖耐量无影响。第一二章枸杞多糖降血糖及预防糖屎病肾病作用的实验研究表造模后动物分组时大鼠血糖及糖耐量（血清）（）检验，与正常对照组比较有显著性差异（）表对空腹血糖及糖耐量的影响（血清）（）检验，与正常对照组比较有显著性差异（），”检验，与模型对照绢比较有显著性差异（），检验，与模型对照组和正常对照组比较均有显著性差异）对模型大鼠血清及的影响造模后动物分组时，各组大鼠及见表，由表可见，造模后动物分组时，各组大鼠及差异均无显著性（），实验结束时各组大鼠血清及的水平见表，由表可见，各组模型大鼠给予后，低、中、高剂量组血东南大学硕士学位论文清水平明显高于模型对照组及正常对照组，差异有显著性（），说明可以促进型糖尿病模型大鼠分泌。是空腹血清与血糖乘积的倒数的对数，是反映机体对敏感性的一项指标【】，实验结束时低、中、高剂量组均高于模型对照组（），但低于正常对照组，差异有显著性（），说明的使用可以提高型糖尿病模型大鼠对的敏感性，但仍未能恢复至正常动物水平。表造模后动物分组时血清胰岛素及胰岛素敏感指数（）注“，“，叭，检验，与正常对照组比较有显著性差异（）表对血清胰岛素及胰岛素敏感指数的影响（）注，（，；，检验，与正常对照组、模型对照组比较均有显著性差异（）对模型大鼠肝糖元水平的影响研究实验结束时，各实验组大鼠肝糖元水平见表。由表可以看出，低、中、高剂量组肝糖元含量明显高于模型对照组（），但明显低于正常对照组（），说明可以改善肝脏对的抵抗作用，使肝糖元储存增加，进而降低了血糖水平。第二章枸杞多糖降血糖及预防糖屎病肾病作用的实验研究表对肝糖元水平的影响（）注“，检验，与模型对照组比较有显著性差异）十检验，与模型对照组和正常对照组比较均有显著性差异（）对模型大鼠血浆影响的研究实验结束时，各实验组大鼠血浆水平见表。由表可见，低、中、高剂量组水平明显低于模型对照组，差异有显著性（），但仍高于正常对照组，差异有显著性（），说明可以降低糖尿病大鼠血浆水平。表对血浆的影响（）注，检验，与模型对照组比较有显著性差异（），检验，与模型对照组和正常对照组比较均有显著性差异（）对模型大鼠血清及水平的变化实验结束时，各组大鼠血清及水平见表。从表可见，型糖尿病大鼠体内出现脂肪代谢紊乱，血清、水平均升高，各实验组与模型对照组间均无显著性差异（），说明并未能纠正大鼠体内的脂肪代谢紊乱。东南大学硕十学位论文表对血清及水平的影响（）注“，；”，检验，与模型对照组比较有显著性差异）对模型大鼠血清肌酐及内生肌酐清除率的影响的研究实验结束时，各实验组大鼠血清肌酐及内生肌酐清除率的变化见表。由表可见，中、高剂量组大鼠血清肌酐含量明显高于模型对（），而与正常对照组相比，差异无显著性（），低、中、高剂量组内生肌酐清除率均明显高于模型对照组（），说明能明显降低糖尿病模型大鼠血清肌酐含量，对模型大鼠的肾功能具有明显的保护作用。表对血清肌酐及内生肌酐清除率的影响（）注，“，检验，与模型对照组比较有显著性差异（），检验，与正常对照组和模型对照组比较均有显著性差异（）第二章枸杞多糖降血糖及预防糖屎病肾瘸作用的实验研究对模型大鼠血清、水平的影响研究实验结束时，各实验组大鼠血清及水平见表。由表可见，中、高剂量组血清水平较模型对照组高，差异有显著性（），与正常对照组相比，差异无显著性（）高剂量组血清水平较模型对照组低，差异有显著性（），与正常对照组相比，差异无显著性（），说明的给予可以明显提高模型大鼠血清中水平，降低水平，从而提高机体的抗氧化能力。表对血清、水平的影响（牙）注，；”，检验，与模型对照组比较有显著性差异（），对肾脏活性的影响研究实验结束时，各实验组大鼠肾脏活性见表。表对肾脏活性的影响（）注，叭；“，检验，与模型对照组比较有显著性著异（），检验，与模型对照组和正常对照组比较均有显著性差异（）由表可以看出，低、中、高剂量组反应速度明显低于模型对照组（），说明可以抑制肾脏活性，从数值上看，低、中、高剂量组东南大学硕十学位论文反应速度也低于模型对照组，但差异没有显著意义（）。对模型大鼠血清的影响的研究标准按不同浓度稀释，根据其峰高绘制标准曲线（见图）拟合方程为一，由方程计算样本肽的绝对值（，），相当于水解所得的量。实验结束时，各实验组大鼠血清中水平见表。由表可见，各实验组大鼠血清中。的水平以模型对照组最高，显著高于其它各组（，），说明可以降低糖尿病大鼠血清的水平。蝗向（）图测定标准曲线表对血清含量的影响（）（），检验，与模型对照组比较有显著性差异（），检验，与正常对照组比较有显著性差异（）第二章枸杞多糖降血耱及预防糖尿病肾病作用的实验研究对模型大鼠肾脏病理影响的研究（图至图）实验结束时模型对照组大鼠肾组织光镜下可见肾小球明显增大，肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚、系膜区增宽，近端肾小管上皮细胞呈现大量空泡变性。低、中、高剂量组与模型对照组相比，肾小球系膜区增宽、基底膜增厚均较轻，肾小管空泡变性较少。图正常对照组肾脏组织病理学检查病理结果图模型对照组肾脏组织病理学检查病理结果图低剂量组肾脏组织病理学检查病理结果图中剂量组肾脏组织病理学检查病理结果图向刑重组骨脏组取炳埋字槿鱼结果东南大学顷十学位论文对模型大鼠肾脏含量影响的研究免疫组化法各实验组肾脏免疫组化染色结果见图至图“。由各图可见，模型对照组的肾小球基底膜和内皮细胞的胞浆中有一免疫阳性物质沉积，低、中、高剂量组的大鼠肾组织的免疫阳性物质沉积率明显降低，尤其降低了肾小球基底膜上的显色，正常对照组的肾组织基本没有显色。图正常对照组肾脏免疫组化染色结果图模型对照组肾脏免疫组化染色结果圈低触量组肾脏免疫组化染色结果图中剂量组肾脏免疫组他染色结果图高剂量组肾脏免疫组化染色结果第二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究逆转录聚合酶联免疫法（）各实验组肾皮质含量见图及表。由图、表可见，实验结束时低、中、高剂量组肾脏皮质含量明显低于模型对照组，差异有显著性（），低、中剂量组仍高于正常对照组（），而高剂量组与正常对照组相比，差异无显著性（）。图各组肾皮质表达比较标准分子量（），高剂量组，中剂量组，低剂量组，糖尿病模型组，正常对照组，同表对肾皮质表达的影响，检验，与模型对照组比较有显著性差异（）对模型大鼠胰腺病理影响的研究正常大鼠胰岛染色结果见图至图。由图至图可见胰岛形态正常，边界清晰，细胞胞浆内均有丰富的分泌颗粒，着色深，外分泌腺正常。模型对照组大鼠胰岛萎缩，胰岛形态不规则，多数细胞肿胀，颗粒减少，胞浆呈空泡状，外分泌腺萎缩，东南大学硕十学位论文胰岛细胞呈水样改变，细胞边缘皱褶不规整。而各剂量组与模型对照组相比，胰岛内细胞分泌颗粒较多，着色程度较深，胰岛及外分泌腺萎缩均较轻。胰岛细胞行醛品红染色结果见图一至图。由图至图可见，正常对照组大鼠胰岛染色较深，说明胰岛内细胞数目较多，而模型对照组大鼠胰岛染色较浅，胰岛内细胞数日减少，而与模型对照组相比，各剂量组大鼠胰岛内细胞数日明显增多。圈正常对照组大鼠胰岛病理学检查结果圈糖尿炳梗型对照组大鼠腥母炳理学检蚤结果图低剂量织大鼠瞒岛病理学榆杏结果图中剂量组大鼠胰岛病理学检查结果图高剂量组大鼠胰岛病理学检查结果第二章枸杞多糖降血糖及预防糖尿病肾病作用的实验研究图一正常对照组大鼠胰岛细胞染色结果图糖尿病模型对照组大鼠胰岛细胞染色结果图低剂量组大鼠胰岛细胞染色结果圈中剂量组大鼠胰岛细胞染色结果图高剂量组大鼠胰岛细胞染色结果东南大学硕学位论文讨论关于型糖尿病动物模型的建立和模型动物选择标准由于在整个糖尿病病例中，绝大部分为型糖尿病，据报道，国内在以上【。故我们选择制备型糖尿病动物模型进行动物实验。参照相关文献，】，我们采用高脂饲料喂养结合来建立型糖尿病大鼠模型。大鼠经高脂、高热量饲料喂养周后，发生肥胖，同时产生，再经腹腔注射小剂量（体重）的，破坏胰腺的部分胰岛细胞，符合型糖尿病发生的实际情形。我们发现，动物于腹腔注射后数天内陆续出现多饮、多尿、消