GB 29684-2013 食品安全国家标准 水产品中红霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 9684 2013 食品安全国家标准 水产品中红霉素残留 量的测定 液相色谱 in 电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准） 2013布 2014施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 产品中红霉素残留量的测定 液相色谱 . 1 范围 . 2 规范性引用文件 . 3 原理 . 4 试剂和材料 . 5 仪器和设备 . 6 试料的制备与保存 . 料的制备 . 料的保存 . 7 测定步骤 . 取 . 化 . 准曲线的制备 . 定 . 白试验 . 8 结果计算和表述 . 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 . 敏度 . 确度 . 密度 . 附录 A . 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 水产品中红霉素残留 量的测定 液相色谱 1 范围 本标准规定了水产品中红霉素残留 量 检测的制样和液相色谱 本标准适用于水产品 可食性组织 中红霉素残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的 条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则 6682 分析 实验室 用水规格和试验方法 3016 水产品抽样方法。 3 原理 试料中残留的红霉素，用 乙腈提取，正己烷 除 脂 ， 净化， 液 相色谱 定 ，内标法定量。 4 试剂和材料 以下所用试剂，除特别注明外均为 分析 纯试剂；水为符合 6682规定的一级水。 霉素 标准品 ： 含 量 97%。 霉素同位素内标物 标准品 ： 红霉素同位素 （ ， N， 3含量 90%。 腈 ： 色谱纯。 己烷 ： 色谱纯。 醇 ： 色谱纯 。 酸 化钠 二水 磷酸氢二钠 酸 200 相当者 。 .1 磷酸盐缓冲溶液 ： 取 十二水 磷酸氢二钠 g， 用 水溶解并稀释至 500 磷酸调至 现配现用 。 0 %甲醇溶液 ： 取 甲醇 40 水 溶解并稀释至 100 0 %甲醇溶液 ： 取 甲醇 30 水 溶解并稀释至 100 乙酸 水 溶液 ：取乙酸 10 L， 用 水 溶解并 稀释至 1 000 100 g/霉素标准 贮备 液 ：精密称取红霉素 标准 品 10 于 100 瓶中， 用甲醇溶解并 稀释至刻度 ， 配制 成 浓度为 100 g/红霉素标准 贮备 液 。 以下避光保存，有效期 6 个月。 5 g/霉素标准工作液： 精密量取 100 g/m 红霉素标准贮备液 500 L，于 10 瓶中，用甲醇 稀释至刻度 ， 配制成 浓度为 5 g/红霉素标准工 作液。 以下避光保存，有效期 3 个月。 00 g/霉素 同位素 内标 物 标准 贮备 液 ：精密称取红霉素 同位素 内标物 标准 品 10 于 100 瓶中， 用甲醇溶解并 稀释至刻度 ， 配 制成 浓度为 100 g/霉素 同位素 内标 物 标准 贮备 液 。 以下避光保存，有效期 6 个月。 00 ng/霉素 同位素 内标 物 标准 工作液 ： 精密量取 100 g/霉素 同位素 内标 物 标准 贮备液 200 L， 于 100 瓶中， 用甲醇稀释 至刻度，配制 成 浓度为 200 ng/红霉素 同位素 内标 物标准工作液 。 以下避光保存，有效期 3 个月。 5 仪器和设备 相色谱 配电喷雾离子源 。 析天平 ： 感量 1 g 。 平 ： 感量 g。 荡器 质机 心机 度计 转蒸发仪 形瓶： 100 离心管： 50 滤膜 ： m。 6 试料的制备与保存 料的制备 取 水产品 空白或供试 可食 性组织 ，绞碎，并使均质。 取 均质后的 供试样品 ，作为供试 试 料 。 取均质 后的 空白样品，作为空白 试 料。 取 均质后的空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作 液 ， 作为空白添加试料。 料 的保存 以下 保存 ，保存期 3个月。 7 测定步骤 取 称取试料（ 5g， 于 50 200 ng/标 物标准 工作液 50 L，加乙腈 15 即搅拌使其分散，超声 5 荡 5 4000 r/0 取 上清液 ，于 另一离心管中 ， 残渣 中 加乙腈 5 重复提取一次， 合并两次上清液， 加氯化钠 2 己烷 15 荡5 4 000 r/0 上层正己烷 液 ，取 下 层 液 ， 于 100 瓶中， 于 40 旋转蒸发至干 ，用 磷酸盐缓冲溶液 5 解 残余物 ，加 正己烷 5 合 1 至 离心管中， 6 000 r/ 正己烷层， 再 加正己烷 5 复操作一次， 取 下层溶液 ， 备用。 化 5 取 备用液过柱，用磷酸盐缓冲液 5 洗涤 液 过柱 ， 流干 ，依次用水 5 0 %甲醇溶液 5 ，抽干 ， 用甲醇 8 收集 洗脱液 ，于茄 形瓶中， 于 40 旋转蒸发至干 ， 用 30 %甲醇溶 液 1.0 物， 滤膜过滤 ，供 液相色谱 定 。 准曲线的制备 精密量取 5 g/霉素 标准 工作 液 和 200 ng/霉素 同位素 内标物 标准 工作 液适量，用 30%甲醇溶液 溶解并 稀释 ，配制 成 红霉素 同位素 内标物 浓度为 10 ng/及 红霉素 浓度 为 1、 5、 10、 25、50、 100 和 500 ng/系列 标准 溶 液，供 液相色谱 以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。 定 相色谱条件 色谱柱： 150 .1 粒径 5 m） ， 或 相当者 ； 流动相： A：甲醇， B： 乙酸水溶液 ； 梯度洗脱： 1.0 30 A； 7 95 A； 17 30 A； 流速： 0.3 mL/ 柱温： 25 ； 进样量： 25 L。 谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； 喷雾电压： 4 700 V； 离子传输毛细管温度： 300 ； 源内碰撞诱导解离电压： 8 V； 雾化气流速： ； 辅助气流速： ； 定性、定量离子对和碰撞能量见表 1。 表 1 定性、定量离子对和碰撞能量 目标化合物 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 碰撞能量 霉素 7 0 红霉素同位 素内标 物 0 定法 性测定 通过 试样 色谱图的保留时间与 相应标准品 的保留时间、 色谱峰的特征离子与相应浓度 标准溶液 色谱峰的特征离子相对照定性。 试样 与标准 品 保留时间的相对偏差不大于 5； 试样 特征离子的相对丰度与浓度相当 标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过 20 %，则可判断 试样 中存在相应的被测物 。 量测定 取试样溶液和 标准 溶 液 ，按外标法 ，以峰面积 定量，标准 溶 液及试样 溶 液中的 红霉素 响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱 红霉素 标准溶液和 空白 添加 试样溶液 中特征离子质量色谱图 见附录 A。 白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算和表述 试料中对 红霉素 的残留量（ g/按 下 式 计算 式中 : X 供试 试 料 中 红霉素 的残留量， g/ C 试样溶液中红霉素的浓度， ng/ V 溶解残余物所用 体积， m 供试试料 质量， g。 注：计算结果需扣除空白值。 测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 敏度 本方法 的 检测限 为 g/量限 为 1 g/ 确度 本方法在 1 400 g/ 水平上 的回收率为 70 % 120 %。 密度 本方法的批内 相对标准偏差 15 %， 批间 相对 标准偏差 15