[硕士论文精品]茶多酚注射液在大鼠体内的药代动力学研究

第一部分茶多酚注射液在大鼠体内的药代动力学研究硕士生姓名付婷指导教师韩国柱教授专业名称药理学茶多酚注射液在大鼠的血浆药代动力学摘要目的建立反相高效液相色谱RPHPLC法同时测定大鼠血浆中茶多酚TEAPOLYPHENOLS。TP主要抗氧活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG和表儿茶素没食子酸酯ECG的浓度，进而研究其药代动力学特点，为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法采用RPHPLC法测定血浆样品中EGCG和ECG的浓度。固定相采用KROMASILCI8色谱柱46150MM，5PM，预柱为KROMASILCI8保护柱4620MMID，LOIM，流动相为乙腈01枸橼酸溶液，梯度洗脱，UV检测波长280NM。血浆样品200PL，加20维生素C水溶液20UL，30LAGML一香草醛内标，IS溶液20L，乙酸乙酯ETOAC500LLL提取2次，合并上层有机相，N2流下37水浴挥干，加20乙腈CH3CN水溶液100UL复溶，漩混1MIN，4低温离心7500RMIN叫10RAIN后，取上清液60L进样，以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、日内精密度、日间精密度、准确度、萃取回收率、稳定性按药监局指导原则进行测定。雄性SD大鼠15只，随机分为三组N5，即高剂量组150MGKG。1、中剂量组100MGKG一和低剂量组50MGKG一，各动物自尾静脉注射给予TP后，于给药前和给药后不同时间点从内眦静脉收集血浆样品，应用上述方法测定血药浓度，经3P97程序处理拟合房室模型，并计算药代动力学参数。结果EGCG和ECG的保留时间TR分别为112RAIN和L83RAIN，IS的保留时间为L64RAIN，三者之间达到基线分离，并不受空白血浆和代谢物以及TP中其他成分的干扰。EGCG和ECG标准曲线的线性范围分别为O25300LAGMLJ和0160LAGML一，线性方程分别为Y01404X0005059R2O9996，N3和Y01393X00007530R2O9997，N3，日内精密度RSD均小于797，日间精密度RSD均小于1299，准确度为861211242。EGCG和ECG的萃取回收率分别为79808464和76598727。血浆样品一20保存至少一个月内稳定；室温保存至少8H内稳定；对照品储备液20保存至少两个月内稳定；血浆样品经ETOAC萃取后24保存至少24H内稳定。EGCG和ECG的血药浓度时程符合二室模型线性动力学过程。主要药动学参数为EGCG和ECG的TL28分别为1115614482MIN和46276118MIN，说明消除快速EGCG的AUC分别为29316060926LAGMLMIN高剂量AGMLMIN中剂量和8250110311LAGMLMIN低剂量，ECG的AUC分别为10679811997LAGMLMIN高剂量，5L056L0302LAGMLMIN中剂量和257216769LAGML一MIN低剂量EGCG和ECG的VD分别为459595LKG。1和201275LKG；EGCG和ECG的CL分别为00250033LKG。MIN叫和O024“。0034LKGMIN一。三剂量组间AUC随剂量的增加成比例增加P005。结论本文建立的RPHPLC法同时测定大鼠血浆中TP主要活性成分EGCG和ECG的浓度，经方法学验证表明特异性高、精密度好、回收率高。血药浓度数据表明EGCG和ECG在本研究的剂量范围内呈线性动力学，且消除快速，分布广泛VD值远超过总体水体积；与ECG相比，EGCG相对消除较慢，分布更广，但清除率基本相同。关键词药代动力学高效液相色谱茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯表儿茶素没食子酸酯第二部分茶多酚注射液在大鼠组织中的分布摘要目的建立RPHPLC法同时测定大鼠心脏、肝脏、肾脏和脑组织中2TP主要活性成分EGCG和ECG的含量，研究其在组织中的分布特点，为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法采用RPHPLC法测定大鼠心、肝、肾和脑组织中EGCG和ECG的含量。色谱条件与前述血浆药动学研究相同。上述组织以饱和生理盐水按1G4ML心脏、肝脏和脑组织和1G9ML肾脏的比例制成匀浆。取组织匀浆样品1ML，加20维生素C水溶液20“L，20GGML1香草醛IS溶液20UL，乙酸乙酯ETOAC2ML，漩混1RAIN，4低温离心7500RMIN一10MIN后取上层有机相，置于另一离心管中，如此共萃取2次，合并2次萃取液，N2流下37水浴挥干，加20乙腈CH3CN水溶液200LAL复溶，漩混LMIN，4低温离心7500RMIN以10MIN后，取上清液60UL进样，以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、同内精密度、F1间精密度、萃取回收率、准确度、稳定性按药监局指导原则进行测定。健康雄性SD大鼠15只，随机分为三组N5。每组动物均按L00MGK91的剂量自尾静脉注射给药。三组受试大鼠分别于给药后20MIN，60MIN和120MIN取血后处死，立即解剖采集心脏、肝脏、。肾脏和脑组织，应用前述方法测定血药浓度和上述方法测定各组织中的药物含量。结果EGCG和ECG的保留时间分别为112MIN和183MIN，IS的保留时间为164MIN三者之间达到基线分离，并不受各空白组织匀浆和代谢物以及茶多酚中其他成分的干扰。各组织匀浆中EGCG和ECG标准曲线的线性范围均分别为O2520LAGML1和012510GGML。心脏、肝脏、肾脏和脑组织匀浆中EGCG线性方程分别为Y07252X0001502R2O9995，N3，Y07609X006228R209996，N3，Y11210XO004801R2O9989，N3和Y08366X一002721R209999，N3；ECG线性方程分别为Y07170XO001043R209988，N3，Y0605IXO02370R2O9990，N3，YI1852XO05L44R209959，N3和Y08303X一002856R2O9999，N3。日内和同间精密度RSD均小于15，准确度为961310419。EGCG和ECG的萃取回收率分别为51907554和5313一8065。各组织匀浆样品一20保存至少一个月内稳定，室温保存至少8H内稳定。EGCG在各组织中浓度的顺序为肾脏6869PGG。1血浆1979LAGML1肝脏900“GG1心脏791LAGG_药后20MIN；血浆752LAGML一肾脏637LAGG一心脏233LAGG1肝脏110LAGG1药后60RAIN血浆330LAGML。肾脏23LGG。心脏074LAGG一肝脏0193PGG。1药后120MIN。ECG在各组织中浓度的顺序为。肾脏4212GG叫肝脏1067PGG叫血浆717LAGML。1心脏215PGG一药后20RAIN；肾脏305“GG。1血浆261LAG。ML。肝脏136“GG一心脏069LAGG。1药后60MIN；肾脏115PGG“血浆O85GGML“肝脏037PGG。1心脏025LAGG。1药后120MIN。脑组织中二者均未测得。结论本文建立的RPHPLC法同时测定大鼠心脏、肝脏、肾脏和脑组织匀浆中TP主要活性成分EGCG和ECG的含量，经方法学验证表明特异性高，精密度好。各组织数据表明EGCG和ECG在肾脏中含量最高，肝脏和心脏次之，脑组织中含量甚微，提示EGCG和ECG不易透过血脑屏障。关键词组织分布高效液相色谱茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯表儿茶素没食子酸酯第三部分茶多酚注射液自大鼠尿、胆汁和粪中的排泄摘要目的建立RPHPLC法同时测定大鼠尿、胆汁和粪中茶多酚TP主要抗氧活性成分EGCG，ECG，EGC和EC的浓度，研究其排泄特点，为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法采用RPHPLC法分别测定大鼠静脉注射100MGKG叫的TP后，不同时间段内上述4种儿茶素类化合物在尿、胆汁和粪中的浓度含量。尿、胆汁样品的色谱条件与前述血浆药动学研究相同，但对粪样品的色谱条件有所改进。尿样和胆汁以生理赫水适当稀释，粪样以甲醇制成1O的匀浆。各样品以10TAGML卅香草醛VAN溶液作为内标IS，经乙酸乙酯ETOAC液液萃取后N2流下37水浴挥干，加20乙腈CH3CN水溶液复溶，4低温离心后，取上清液60L进样，以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、同内精密度、日间精密度、准确度、萃取回收率和稳定性按药监局指导原则进行测定。健康雄性SD大鼠1O只，随机分为两组N5。每组动物均按100MGKG一的剂量自尾静脉注射4给药。一组受试大鼠自胆管插管收集空白胆汁后给药，收集不同时间段胆汁样品；另一组收集空白尿样和粪样后，给药，收集不同时间段尿样和粪样。分别应用上述方法测定胆汁浓度和尿样、粪样中的药物浓度含量。结果尿和胆汁色谱条件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留时间分别为112MIN、183RAIN、60RAIN和96RAIN，IS的保留时间为164MIN；粪色谱条件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留时间分别为1525RAIN、2163MIN、772RAIN和L377RAIN，IS的保留时间为1769RAIN。相互之间达到基线分离，并不受各空白样品和代谢物以及茶多酚中其他成分的干扰。4种儿茶素类化合物的尿标准曲线的线性范围为050L0“GML1EGCG，0125250LAG。ML叫ECG，25050LAGML叫EGC和1OO20PGML。1EC；胆汁标准曲线的线性范围为O25GGML一EGCG，025I,TGMLECG，O820GGML1EGC_；11041OP,GML。1EC；粪匀浆标准曲线的线性范围为125GGML。1EGCG，O820GGML。1ECG，4100I,TGMLJEGC和250ITGML。EC。尿、胆汁和粪匀浆中EGCG线性方程分别为Y04505X00485R209972，N3，YO4347XO03650F209985，N3和YO1475X005908R209997，N3；ECG线性方程分别为YO3839X一00489R209962，N3，YO3512X003819R2O9994，N3和Y02209X01219R2O9986，N3；EGC线性方程分别为Y00587X01084R209954，N3，Y004993X002456R209990，N3和YO01933X007218R209975，N3；EC线性方程分别为Y0207X02283R2O9972，N3，YO2220X007966R209988，N3和YO07538XO04321R2O9982，N3。日内和日间精密度RSD均小于L0，准确度为9007“10917。EGCG、ECG、EGC和EC的萃取回收率分别为65849160，82539956，59749300和778810162。尿、胆汁和粪样品一20保存至少一个月内稳定，室温保存至少8H内稳定。大鼠IVTPI00MGKG。后，上述4种儿茶素类化合物在尿8H的累积排泄分数分别为145，084，788和L073；在胆汁8H的累积排泄分数分别为012，116，045和0053粪中EGCG和EGC的24H累积排泄分数分别为007和999，但ECG和EC未检测到。结论本文建立的RPHPLC法同时测定大鼠尿、胆汁和粪样中TP主要活性成分EGCG、ECG、EGC和EC的浓度，经方法学验证表明特异性高、精密度好、回收率高。EGCG、ECG、EGC和EC在大鼠体内仅很5少一部分以原型从尿、胆汁和粪中排出。其中以尿排泄为主，其次为胆汁排泄，经粪排泄最差，提示这4种儿茶素类化合物体内代谢十分旺盛。关键词排泄高效液相色谱茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯表儿茶素没食子酸酯表没食子儿茶素表儿茶素6STUDYONTHEPHARMACOKINETICSOFTEAPOLYPHENOLSINJECTIONINRATSPART1MASTERDEGREECANDIDATEFUTING妯PERVISORPROFESSORHANGUOZHUMAJORPHARMACOLOGYNE胁SMAPH姗瞥。廿吵SSTUDY。FTEAP0LYPHENOLSLNJECTIONINRATSABSTRACT。O，JCVET。DEVEL。PASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUV竺翼、如R8JMUNANEOUSDETERMINATIONOFEPIGALLOCATEC也一EGCAND。EPICATECHIN3一GALLATEECGASTHEMAINAN,T,I,。VXUIUDLANOTGAACLTLIAVTEEGRDLENS。FEAPOLYPHEN。LSTP，ANDTHEREBYT。STUDYTHEIRPLASMAMETHODSEGCGANDECGINPLASMAWEREELUTED。NAKR。MASILCI8三N，ANLYTICALC。O。LUMN46150MM，5“MPR。TECTEDBYACI8PREC。LUMN4苫；2URI1O“MWIHA1INEARGRADIENTM。BIIEPHASEC。MP。SED。F，、，、，A，。0N1CIRICACIDBANDAGRADIENTF1。WRATETHEUV二ETECT二WLALIS3KSEIXT砒28M舢ALIQUOT200“L。FPLASMASAMPLESPIKEDWITHII,1S1。二冀RESENCEOF。ASMALLV。1UME。F20VITCS。LUTI。NWASPREPAREDBYIQUID。LIQU1DEX2RACI。NPROCEDUREWITHM。RETHAND。UBLEV。LUMES。FETOAC三LCEANDMENEVAPORATIONOFORGANICPHASEUNDERN2STREAMT。DRY，2燮OWE帅YRECONSTITUTIONWJTH100PL。F20CH3CNAQUEOUSSOIUTI。N，磊“LSUPERNAANWASINJECTEDONTOCHROMAT。GRAPHTHEPEAKAREARATI。SOFANALYTESTOVANIJIINASINTERNALSTANDARDVSCONCENTRATIONOFANALYTEST。|ONSTRUCH引泊RANONCURVESTHEMETH。DVAJIDATJONINCLUDINGSPECIFICITY,IINEARITY，PRECISI。N，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBVR。U1NEPRO，CEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLES。FPKSTUDYISSUEDBSFDAFJFEENRATSWERERAND。MLYDIVIDEDINT。3GR。UPSA二二三CONTAINING5ANIMALSRECEJVINGJVADMINISTRATI。NVIACAUDAJVEIN。FT彳15I100AND50MG。KGL，RESPECTIVELYPLASMASAMPLESWERECOLLECTEDFROMO伯驯SLNUSPRLORTODOSINGANDDIFFERENTTIME2，5，10，20，40，60，90，120180，240，300RAINPOSTDOSINGRESULTSUNDERTHESPECIFIEDHPLCANDPLASMASAMPLESPREPARATIONCONDITIONS,THECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECGANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMETROF112MIN，183ANDL64MIN螂PECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLLTESAND1MPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESHADGOOD11NEARLTYOVERTHERANGEOF025“300PGMLFOREGCGAND0I60I,TGMLIFORECG,WITHWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFYPEAKAREARATLOOFANALYTEIS01404XANALYTECONCENTRATION，PGML一1O005059R209996，N23ANDY01393X00007530R2O。9997，N3RESPECTIVELY；。IMEINTRA。ANDINTERDAYPRECISIONRSD，OBTAINEDBVMEASUNNGQCSAMPLESATHIGH，MIDDLEANDLOWCONCENTRATIONSINASETOF5REPLLCATESONASINGLEASSAYDAYAND5SEPARATEDAYS，WASBETTERTHAN797ANDL299，RESPECTIVELY，ANDTHEAVERAGEACCURACY，EXPRESTEDASREIATIVERECOVERYCALCULATEDBASED011LINEARREGRESSIONEQUATIONOFCALIBRATIONCURVEWASBETWEEN86121I242THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCGANDECGWAS79808464AND76598727，RESPECTIVELYTHEPLASMASAMPLESWERE吼ABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURE；EGCG,ECGANDISSTOCKSOLUTIONS2MONTHSAT20，ANDTHEETOACEXTRACTEDPLASMASAMPLES24HAT4THEPKBEHAVIOROFEGCGANDECGINPLASMAAFTERIVADMINISTRATIONCOULDBEDESCRIBEDBVTWOCOMPARTMENTMODELANDFIRST。ORDERKINETICS，WITHT唧1123914520MINAND46636L48MIN，VD459595LKGAND201275LKG，CLO0250033LKGMINAND00240034LKGMIN一FOREGCGANDCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTO川YMEEREQUIREMENTSFORPKSTUDYOFTPINJECTIONINRATSTHEPLASMADATADEMONSTRATEDARAPIDELIMINATIONFROMBODYOFEGCGANDECGEVIDENCEDBYASHORTTT2OF1“2H，ANDFOLLOWLINEARPHARMACOKINETICSINRATSIHETWOTEACATECHINSAREDISTRIBUTEDWILDLYINTHEBODY，REFLEETEDBVMUCHLARGERVDTH柚TOTALBODYWATERWHENTHECOMPARISONISMADEBETWEENTHETWO，EGCGELIMINATESLESSRAPIDLYANDDISTRIBUTESWIDERTHAN8ECGBUTHASALMOSTSAMECLASTHATOFECGKEYWORDSPHARMACOKINETICSHPLCTEAPOLYPHENOLSEGCGECGPART2THETISSUEDISTRIBUTIONSTUDYOFTEAPOLYPHENOLSINJECTIONINRATSABSTRACTOBJECTIVETODEVELOPASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUVMETHODFORSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFEGCGANDECGTHEMAINACTIVEINGREDIENTSOFTEAPOLYPHENOLSTP，ANDTHEREBYTOSTUDYTHEIRTISSUEDISTRIBUTJONINRATSMETHODSTHESEPARATIONOFTEACATECHINSWASACHIEVEDUSINGTHESAMECHROMATOGRAPHICCONDITIONSASTHATDESCRIBEDUNDERSECTION1PLASMAPHARMACOKINETICSSTUDY”APREPARATIVEPROCEDURECONSISTINGOFHOMOGENIZATIONOFTISSUESWITHSATURATEDSALINEATARATIOOF1G4MLHEART，LIVER，BRAINAND1G9MLKIDNEYANDSUBSEQUENTLYLIQUIDLIQUIDEXTRACTIONWITHDOUBLEVOLUMESOFETOAC，FOLLOWEDBYEVAPORATIONOFORGANICPHASETODRY，THENRECONSTITUTIONASDESCRIBEDUNDERSECTION1WASDEVELOPEDTHEPEAKAREARATIOSOFANALYTESTOVANILLINASINTERNALSTANDARDYSCONCENTRATIONOFANALYTESTOCONSTRUCTCALIBRATIONCURVESTHEVALIDATIONOFTHEMETHODINCLUDINGSPECIFICITY，LINEARITY，PRECISION，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBYROUTINEPROCEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLESOFPKSTUDYISSUEDBYSFDAFIFTEENRATSWERERANDOMLYDIVIDEDINTO3GROUPSEACHGROUPCONTAINING5ANIMALS，BASEDON3DIFFERENTTIMEPOINTOFTISSUESCOLLECTIONPOSTDOSINGANDRECEIVEDIVADMINISTRATIONOFTP100MG。KGRESULTSUNDERTHEABOVESPECIFIEDHPLCCONDITIONSANDPREPARATIVEPROCEDURE，THECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECGANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMET0OF112MIN，183AND164MIN，RESPECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLITESANDIMPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESHAD9GOODLINEARITYOVERTHERANGEO2520GMLFOREGCGAND012510UGMLFORECGTHEHEART，LIVER，KIDNEYANDBRAINTISSUESHOMOGENATESAMPLESWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFEGCGANDECGAREASFOLLOWSYPEAKAREARATIOOFANALYTEIS2O7252XANALYTECONCENTRATION，“GML。10001502R209995，N23，Y07170X一0001043R2O9988，N3；Y07609X006228RZ09996，113，Y06051XO02370R2O9990，N3；Y11210X0004801R209989，N3，Y11852X一005144R2O9959，N3ANDY08366X一002721R209999，N3，Y08303X一002856RL09999，N23，RESPECTIVELYTHEINTRAANDINTERDAYPRECISIONRSDWASBETTERTHAN15THEAVERAGEACCURACYWASBETWEEN961310419THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCGANDECGWAS51907554AND53138065，RESPECTIVELYTHETISSUESHOMOGENATESAMPLESWERESTABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURETHETISSUEDISTRIBUTIONOFTPWASINVESTIGATEDAT20，60AND120MINPOSTDOSINGINRATSWHEN100MGKGOFTPWASADMINISTEREDIVTORATS，EGCGANDECGWERERAPIDLYDISTRIBUTEDINTOTHEMOSTOFTISSUES，ANDKIDNEYTISSUEEXHIBITEDTHEHIGHESTEXPOSURE，WHILETHETISSUEWITHTHELOWESTEXPOSUREWASBRAINCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTOFULLYMEETREQUIREMENTSFORTPINJECTIONTISSUEDISTRIBUTIONSTUDYINRATSTHETISSUESDATAINDICATEARAPIDDISTRIBUTIONOFEGCGANDECGINRATSINTOTHEMOSTOFTISSUES，ANDKIDNEYTISSUEEXHIBITEDTHEHIGHESTEXPOSURE，WHILEBRAINWITHTHE】OWESTKEYWORDSTISSUEDISTRIBUTIONHPLCTEAPOLYPHENOLSEGCGECGPART3THEEXCRETIONOFTEAFROMURINE，BILEPOLYPHENOLSINJECTIONANDFECESOFRATSABSTRACTOBJECTIVETODEVELOPASIMPLEANDSPECIFICREVERSEDPHASEHPLCUVMETHODFORSIMULTANEOUSDETERMINATIONOFEGCG，ECG，EGCANDEC，DERIVEDFROMTEAPOLYPHENOLSTP，ANDTHEREBYTOSTUDYTHEIREXCRETIONFROMURINE，BILEANDFECESOFRATSAFTERIVADMINISTRATIONOFTPMETHODSTHEURINEANDBILELEVELSOFTHEABOVESTATED4TEACATECHINSWEREQUANTIFIEDBYHPLCUVMETHODSBASEDONTHESAMECHROMATOGRAPHICCONDITIONSASDESCRIBEDUNDERSECTION1，BUTFECESLEVELSBASEDONAMILDMODIFIEDCHROMATOGRAPHICCONDITIONSTHEPEAKAREARATIOSOFANALYTESTOVANILLINASINTERNALSTANDARDVSCONCENTRATIONOFANALYTESTOCONSTRUCTCALIBRATIONCURVESTHEMETHODVALIDATIONINCLUDINGSPECIFICITY，LINEARITY，PRECISION，ACCURACY，RECOVERYANDSTABILITYWASCONDUCTEDBYROUTINEPROCEDURESASDESCRIBEDINGUIDINGPRINCIPLESOFPKSTUDYISSUEDBYSFDAFIVEFOLDDILUTEDURINE，BILESAMPLESAND1G9MLFECESHOMOGENATESAMPLESSPIKEDWITHISEXTRACTEDTWICEINPRESENCEOFASMALLVOLUMEOF20VITCSOLUTIONWITHETOACTHECOLLECTEDETOACFRACTIONWASEVAPORATEDUNDERN2STREAMTODRY，FOLLOWEDBYRECONSTITUTIONWITH20CH3CNAQUEOUSSOLUTIONTENRATSWERERANDOMLYASSIGNEDINTO2GROUPS5ANIMALSEACH，ANDGIVENTP100MGKGASAIVBOLUSINJECTIONBILESAMPLESWERECOLLECTEDATDIFFERENTTIMEOFPERIODPOSTDOSINGINONEGROUPOFRATS；URINEANDFECESSAMPLESWEREFROMTHEOTHERRESULTSTHECHROMATOGRAPHICPEAKSOFEGCG，ECG，EGC，ECANDISWERERESOLVEDWELLFROMEACHOTHERWITHRETENTIONTIMETROF112，L83，60，96AND164MIN，FORURINE，BILERESPECTIVELY，ANDWITH1525，2163，772，1377AND1769MINFORFECESRESPECTIVELY；THEREWASNOINTERFERENCEFROMENDOGENOUSSUBSTANCES，METABOLITESANDIMPURITIESOFTPRAWMATERIALTHECALIBRATIONCURVESOFURINEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE05010LAGML1FOREGCG，0125250GGML。FORECG,250“50LAGML叫FOREGCAND100一20LAGML。1FORECTHECALIBRATIONCURVESOFBILEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE025LAGMLFOREGCGO25LAGMLFORECG，0820LAGML。1FOREGCANDO410LAG。ML。FORECTHECALIBRATIONCURVESOFFECESHOMOGENA,TEHADGOODLINEARITYOVERTHERANGE125LAGML“FOREGCG,O820LAGMLFORECG，4100LAG。ML叫FOREGCAND250LAGML1FORECTHEURINE，BILEANDFECESHOMOGENATESAMPLESWEIGHEDLINEARREGRESSIONEQUATIONOFEGCGAREASFOLLOWSYPEAKAREARATIOOFANALYTEIS04505XANALYTECONCENTRATION，LAG。ML叫00485R209972，N3，YO4347XO03650R2O9985，N3ANDY01475X005908RL09997，N3；ECGAREY03839X一00489R209962，N。3，Y03512XO03819R2O9994，N3ANDY02209X01219FRL09986，N3；EGCAREYO0587X01084R209954，N23，Y2004993X002456R209990，N3ANDY001933X007218FR2。09975，N3,ANDECAREYO207X02283R209972，N53，YO2220XO07966R2O9988，N3ANDY007538X004321FR2J09982，N3，RESPECTIVELYTHEINTRAANDINTERDAYPRECISIONRSDWASBETTERTHAN10THEAVERAGEACCURACYWASBETWEEN900710917THEEXTRACTIONRECOVERYOFEGCG,ECG，EGCANDECWAS65849160，82539956，59749300AND77881O162RESPECTIVELYTHEURINE，BILEANDFECESHOMOGENATESAMPLESWERESTABLEFORATLEAST30DAYSAT20AND8HATROOMTEMPERATURETHEEXCRETIONEXPERIMENTSSHOWEDTHATONLYABOUT145，084，788AND1073OFADMINISTRATEDDOSEFORUNCHANGEDEGCG，ECG，EGCANDECWEREEXCRETEDINURINEWITHIN8H，RESPECTIVELY，ONLY012，116,045AND0053OFADMINISTEREDDOSEWASEXCRETEDINBILEWITHIN8H，RESPECTIVELY，ONLY007AND999FOREGCGANDEGCINFECESWITHIN24H，NOECGANDECWEREFOUNDINFECESCONCLUSIONTHEMETHODDEVELOPEDINTHEPRESENTSTUDYISVALIDATEDTOSUFFICIENTLYMEETREQUIREMENTSFORTPEXCRETIONSTUDYINRATSTHEEGCG,ECGEGCANDECWEREEXCRETEDASUNCHANGEDFORMONLYINAVERYSMALLPERCENTAGEOFADMINISTEREDDOSEFROMURINE，BILEANDFECES；AMONGTHE3EXCRETORVROUTESURINARYEXCRETIONPREDOMINATED，BILIARYEXCRETLONWASPOOR，FECESEXCRETIONWASNEGLIGIBLEEXCEPTFOREGCTHESEFINDINGSSUGGESTTHEAFORESAID4TEACATECHINSUNDERGOEXTENSIVEMETABOLISMINBODYOFRATSKEYWORDSEXCRETIONHPLCTEAPOLYPHEN。LSEGCGECGEGCEC关于学位论文使用授权的说明茶多酚注射液在大鼠体内的药代动力学研究系本人在大连医科大学攻读辟士、硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入1中国学术期刊光盘版电子杂志社中国博士学位论文全文数据库、中国优秀硕士学位论文全文数据库及CNKI相关数据库。2中国科学技术信息研究所中国学位论文全文数据库3国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。论文作者签名互主琏指导教师签名堕叠鱼垂至，签字日期乃2年二月竺日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名童盎签字日期塑2年_5_,9OET综述茶多酚的药代动力学研究进展付婷综述韩国柱审校茶多酚TEAPOLYPHENOLS，TP是自绿茶CAMELLIASINENSIS，LOKTZE中提取得到的一类多羟基酚类化合物的总称，其主要抗氧活性成分儿茶素类化合物约占总量的65一80。主要包括表没食子儿茶素没食子酸酯EPIGALLOCATECHIN3一GALLATE，EGCG】、表儿茶素没食子酸酯一EPICATECHIN一3一GALLATE，ECG】、表没食子儿茶素EPIGALLOCATECHIN，EGC】和表儿茶素【EPICATECHIN，EC等，其化学结构特征为B环上有两或三个羟基取代和A环上5，7间位羟基取代的黄酮醇类化合物。4种儿茶素类活性成分中，以EGCG含量最高，抗氧化活性最强，ECG则次之，EC最低】。TP由于其本身的化学结构与生物学活性以及在医疗保健中的独特功能，己成为近几十年来医学界研究的热点。上个世纪七十年代以来，许多国家的学者对绿茶的药理作用进行了广泛的研究，越来越多的实验室研究证实绿茶对多种疾病均有明显的治疗或缓解作用。随之，对绿茶中的TP及其主要抗氧活性成分EGCG、ECG、EGC和EC等的定性和定量分析也展开了大量的研究。由于TP中组分众多，分离上有很大困难，迄今为止，国内仍未见TP的药代动力学报道。本文就国外文献中TP的药代动力学研究进行综述，并对其今后研究和应用提出展望。一TP的体内过程特点一吸收TP的口服吸收较差。CHENT3】等人研究发现，大鼠灌胃给予DGT去咖啡因的绿茶提取物200MGKG一后，EGCG、EGC年DEC的生物利用度分别为O1、137和312。单独灌胃给予EGCG75MGKG叫后，其生物利用度增加至16，提示DGT中其它的成分可能对EGCG的吸收有影响。为查明茶儿茶素类口服生物利用度低的原因，CAI等【4J分别从大鼠门静脉和外周静脉给予DGT后进行比较性研究发现，EGCG、EGC和EC的肝脏生物利用度FLJV。，分别高达870、1083和949，且所得的PK参数基本类似单独自门静脉给予EGCG后FLIVER办高达870，这些说明儿茶素类化合物的肝首关效应很低，提示儿茶素类化合物13服的体循环前消除与肝脏首关效应没有很大的联系。研究表明转运体介导的肠细胞外排，也可能在茶儿茶素的体循环前丢失中起着一定的作用。采用CACO2细胞系进行的研究表明，EC不能自顶侧向基底侧吸收，反而自基底侧向顶侧被外排，且表观渗透系数较高。这种外排能被MRP2转运体竞争性抑制剂MK571所抑制，但PGP抑制剂维拉帕米却不能抑制这种外排14J。近来有关EGCG在MDCKII细胞的转运的研究表明，吲哚美辛MRP抑制剂增加了EGCG及其甲基化代谢物的胞内蓄积。同样，用MK571处理MRP2过表达的MDCKII细胞导致胞内EGCG及其甲基化代谢物1012倍的增加，但用PGP抑制剂处理PGP过表达的MDCKII细胞则未见明显影响，而用吲哚美辛处理HT29人结肠癌细胞导致胞内EGCG及其甲基化和葡萄糖醛酸结合物水平的明显增加。这些提示MRPS而不是PGP在EGCG的低生物利用度中发挥一定作用【5J。研究还表明，尽管位于肠细胞基底侧的MRPI起着与位于肠细胞顶侧的MRP2不同的作用，预期能够增加EGCG的生物利用度，但由于在人的空肠MRP2MRNA水平高于MRPI1O倍以上，故MRP2对EGCG的外排作用在人的肠道占主导，并导致EGCG生物利用度降低。还有学者认为茶儿茶素类在肠道的不稳定亦是其生物利用度低的原因之一。它们通常在PH1864的低弱酸性环境中稳定，而肠道的PH为58，EGCG及EGC将可能发生降解14。有文献报道，用L0EGCG的亲水性软膏于人和小鼠皮肤，导致显著地皮内摄取【6】，其摄取量可达给药剂量的L20。仅在小鼠可见很少量的EGCG透皮吸收进人体循环，而在人则透皮吸收量极微，人的皮肤具有更为有效的屏障作用，从而防止局部应用的EGCG进入体循环。10EGCG丙酮溶液外用于小鼠皮肤，其吸收更快。当剂量为10MGCM2和50MGCM。2时所达到的稳念皮内浓度分别为O5和O9MGCM，相当于剂量的5和18。当EGCG作为1O软膏外用于小鼠皮肽时，其皮内吸收速率较慢，但较完全。24H孵育，其皮内浓度达33MGCM，相当于19的给药剂量被皮内摄取。体外透皮吸收实验表明，L0EGCG软膏外用于人的皮肤后，其皮内稳念浓度为015MGCM。二分布KIM7】等人给予大鼠O6WVGTPP绿茶多酚，固体粉末中分别含有EGCG，EGC和EC590，76和86MGG。1溶液作为饮用水，连续8天自由饮用，于第9天处死动物，测定其组织中EGCG，EGC和EC的含量，发现三者在大肠4878，3032和9250NGG。1组织和食管2799，185914和1928NGG一组织中含量都较高；EGCG的含量顺序为大肠食管膀胱肾、前列腺脾；EGC为膀胱肾大肠FILL列腺脾食管、肺；EC为大肠膀胱。肾前列腺、肺食管脾。三者在肝、心和甲状腺中水平低。直接接触儿茶素或涉及到消除的器官如食管，大肠，膀胱和L肾等，其含量明显高于肝和心。三代谢早期的研究主要指向微生物代谢和甲基化代谢。晚近，4种主要儿茶素类化合物生物转化的基础研究取得了重大进展。酶系统的检测包括小鼠肝和小肠微粒体，大鼠的肝匀浆和胞液以及微粒体，人的肝微粒体、胎盘胞液、空肠胞液、CACO2胞液、唾液以及磺基转移酶同功酶SULTLAL，SULTLA3和尿苷酸转移酶同功酶UGTLAL，UGTLA3，UGTLA8，UGTLA9的CDNA的表达等等。已发现儿茶素类化合物的代谢转化主要包括以下几个方面LII相代谢由于茶儿茶素类化合物分子中含有多个酚羟基，故易发生结合反应，包括甲基化，硫酸结合，葡萄糖醛酸结合乃至半胱氨酸结合。分子中4和4”羟基在结合反应中显得尤为重要。甲基化的同时分子中其他羟基可发生硫酸葡萄糖醛酸化的结合。1甲基化这是TP代谢的一条重要的途径814J。如从C得到的3和40甲基C和O甲基C一葡醛酸结合物，从EC得到的3和4O甲基EC和O甲基一EC一葡醛酸结合物，从ECG得到的4”O甲基ECG，从EGC得到的4O甲基EGC，从EGCG得到的4”O甲基EGCG和4，4_二O甲基E