GB 5009.121-2016 食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定

中华人民共和国国家标准GB50091212016食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定20160831发布20160920实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB50091212016前言本标准代替GB/T50091212003食品中脱氢乙酸的测定。本标准与GB/T50091212003相比,主要变化如下标准名称修改为“食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定”增加液相色谱法液相色谱法采用GB/T233772009的方法增加试样分类改进气相色谱法中样品的制备和提取方法修改气相色谱法的色谱条件。GB500912120161食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定1范围本标准规定了果蔬汁、果蔬浆、酱菜、发酵豆制品、黄油、面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品中脱氢乙酸含量的测定方法。本标准适用于果蔬汁、果蔬浆、酱菜、发酵豆制品、黄油、面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品中脱氢乙酸含量的测定,其他食品可参考执行。第一法气相色谱法2原理固体半固体样品,沉降蛋白、经脱脂酸化后,用乙酸乙酯提取果蔬汁、果蔬浆样品经酸化后,用乙酸乙酯提取用配氢火焰离子化检测器的气相色谱仪分离测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。31试剂311乙酸乙酯C4H8O2色谱纯。312正己烷C6H14色谱纯。313盐酸HCL。314硫酸锌ZNSO47H2O。315氢氧化钠NAOH。32试剂配制321盐酸溶液11,体积比量取50ML盐酸加入到50ML水中。322硫酸锌溶液120G/L称取12G硫酸锌,溶于水并稀释至100ML。323氢氧化钠溶液20G/L称取2G氢氧化钠,溶于水并稀释至100ML。33标准品脱氢乙酸DEHYDROACETICACID,C8H8O4,CAS520456标准品纯度995。34标准溶液的制备341脱氢乙酸标准贮备液10MG/ML准确称取脱氢乙酸标准品01000G精确至00001G于100ML容量瓶中,用乙酸乙酯溶解并定容。4保存,有效期为3个月。GB500912120162342脱氢乙酸标准工作液分别精确吸取脱氢乙酸标准贮备液001ML、01ML、05ML、10ML、20ML于10ML容量瓶中,用乙酸乙酯稀释并定容,配制成浓度为100G/ML、100G/ML、500G/ML、100G/ML、200G/ML标准工作液。4保存,有效期为1个月。4仪器和设备41气相色谱仪,配氢火焰离子化检测器。42天平感量为01MG和1MG。43离心机转速4000R/MIN。44超声波清洗器功率35KW。45粉碎机。46不锈钢高速均质器。47PH计。5分析步骤51试样制备511果蔬汁、果蔬浆称取样品2G5G精确至0001G,置于50ML离心管中,加10ML水振摇1MIN,加1ML盐酸溶液321酸化后,准确加入50ML乙酸乙酯,振摇提取2MIN,静置分层,取上清液供气相色谱测定。512酱菜、发酵豆制品样品用不锈钢高速均质器均质。称取样品2G5G精确至0001G,置于50ML离心管中,加入约15ML水、25ML硫酸锌溶液322,用氢氧化钠溶液323调PH至75,超声提取15MIN,转移至25ML容量瓶中,加水定容。样液移入离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取10ML上清液,加1ML盐酸溶液321酸化后,准确加入50ML乙酸乙酯,振摇2MIN,静置分层,取上清液供气相色谱测定。513面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料、预制肉制品及熟肉制品样品用粉碎机粉碎或不锈钢高速均质器均质。称取样品2G5G精确至0001G,置于50ML离心管中,加入约15ML水、25ML硫酸锌溶液322,用氢氧化钠溶液323调PH至75,超声提取15MIN,转移至25ML容量瓶中,加水定容。样液移入分液漏斗中,加入5ML正己烷,振摇1MIN,静置分层,取下层水相置于离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取10ML上清液,加1ML盐酸溶液321酸化后,准确加入50ML乙酸乙酯,振摇2MIN,静置分层,取上清液供气相色谱测定。514黄油称取样品2G5G精确至0001G,置于50ML离心管中,加入约15ML水、25ML硫酸锌溶液322,用氢氧化钠溶液323调PH至75,超声提取15MIN,转移至25ML容量瓶中,加水定容。样液移入分液漏斗中,加入5ML正己烷,振摇1MIN,静置分层,取下层水相置于离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取10ML上清液,加1ML盐酸溶液321酸化后,准确加入50ML乙酸乙酯,振摇2MIN,静置分层,取上清液供气相色谱测定。52仪器参考条件521毛细管柱极性毛细柱化学键和聚乙二醇固定相,30M032MM025M,或相当者。522柱温升温程序初温150,以10/MIN速率升至210,20/MIN速率升至240,保持2MIN。523进样口温度240。524检测器温度300。GB500912120163525载气N2流量10ML/MIN。526分流进样,分流比为51,进样体积10L。53标准曲线的制作将脱氢乙酸标准工作液342分别注入气相色谱仪中,测定相应峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。脱氢乙酸标准色谱图见附录A。54测定将测定溶液注入气相色谱仪中,以保留时间定性,同时记录峰面积,根据标准曲线得到测定溶液中的脱氢乙酸浓度。55空白试验除不加试样外,空白试验应与样品测定平行进行,并采用相同的分析步骤分析。6分析结果的表述果蔬汁、果蔬浆试样中脱氢乙酸含量按式1计算X1C1C0V1000M100010001其他试样中脱氢乙酸含量按式2计算X2C1C0V1V1000MV2100010002式中X1试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克G/KGC1试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升G/MLC0空白试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升G/MLV乙酸乙酯定容体积,单位为毫升MLM称取试样的质量,单位为克GX2试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克G/KGV1试样处理后定容体积,单位为毫升MLV2萃取脱氢乙酸所取试样液体积,单位为毫升ML。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。8其他气相色谱法的线性范围100G/ML200G/ML果蔬汁、果蔬浆取样量5G,确定检出限为00003G/KG,定量限为0001G/KG其他试样取样量5G,样液定容体积25ML,取10ML样液提取,确定检出限为0001G/KG,定量限为0003G/KG。GB500912120164第二法液相色谱法9原理用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸,经脱脂、去蛋白处理,过膜,用配紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定,以色谱峰的保留时间定性,外标法定量。10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。101试剂1011甲醇CH4O色谱纯。1012乙酸铵C2H6O2N优级纯。1013氢氧化钠NAOH。1014正己烷C6H14。1015甲酸CH2O2。1016硫酸锌ZNSO47H2O。102试剂配制1021乙酸铵溶液002MOL/L称取154G乙酸铵,溶于水并稀释至1L。1022氢氧化钠溶液20G/L称取20G氢氧化钠,溶于水并稀释至1L。1023甲酸溶液10量取10ML甲酸,加水90ML,混匀。1024硫酸锌溶液120G/L称取120G硫酸锌,溶于水并稀释至1L。1025甲醇溶液70量取70ML甲醇,加水30ML,混匀。103标准品脱氢乙酸DEHYDROACETICACID,C8H8O4,CAS520456标准品纯度995。104标准溶液的制备1041脱氢乙酸标准贮备液10MG/ML准确称取脱氢乙酸标准品01000G精确至00001G于100ML容量瓶中,用10ML氢氧化钠溶液1022溶解,用水定容。4保存,有效期为3个月。1042脱氢乙酸标准工作液分别吸取脱氢乙酸储备液01ML、10ML、50ML、10ML、20ML于100ML容量瓶中,用水定容。配制成浓度为100G/ML、100G/ML、500G/ML、100G/ML、200G/ML标准工作液。4保存,有效期为1个月。11仪器和设备111高效液相色谱仪配有紫外检测器或二极管阵列检测器。112分析天平感量为01MG和1MG。113粉碎机。GB500912120165114不锈钢高速均质器。115超声波清洗器功率35KW。116涡旋混合器。117离心机转速4000R/MIN。118PH计。119C18固相萃取柱500MG,6ML使用前用5ML甲醇、10ML水活化,使柱子保持湿润状态。12分析步骤121试样制备与提取1211果蔬汁、果蔬浆称取样品2G5G精确至0001G,置于50ML离心管中,加入约10ML水,用氢氧化钠溶液1022调PH至75,转移至50ML容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取20ML上清液用10的甲酸溶液1023调PH至5,定容到25ML。取5ML过已活化固相萃取柱,用5ML水淋洗,2ML70的甲醇溶液1025洗脱,收集洗脱液2ML,涡旋混合,过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。1212酱菜、发酵豆制品样品用不锈钢高速均质器均质。称取样品2G5G精确至0001G,置于25ML离心管中,加入约10ML水、5ML硫酸锌溶液1024,用氢氧化钠溶液1022调PH至75,转移至25ML容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于25ML离心管中,超声提取10MIN,4000R/MIN离心10MIN,取上清液过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。1213面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料样品用粉碎机粉碎或不锈钢高速均质器均质。称取样品2G5G精确至0001G,置于25ML离心管如需过固相萃取柱则用50ML离心管中,加入约10ML水、5ML硫酸锌1024溶液,用氢氧化钠溶液1022调PH至75,转移至25ML容量瓶如需过固相萃取柱则用50ML容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,超声提取10MIN,转移到分液漏斗中,加入10ML正己烷,振摇1MIN,静置分层,弃去正己烷层,加入10ML正己烷重复进行一次,取下层水相置于离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取上清液过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想,取20ML上清液,用10的甲酸1023调PH至5,定容到25ML,取5ML过已活化的固相萃取柱,用5ML水淋洗,2ML70的甲醇溶液1025洗脱,收集洗脱液2ML,涡旋混合,过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。1214黄油称取样品2G5G精确至0001G,置于25ML离心管如需过固相萃取柱则用50ML离心管中,加入约10ML水、5ML硫酸锌1024溶液,用氢氧化钠溶液1022调PH至75,转移至25ML容量瓶如需过固相萃取柱则用50ML容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。置于离心管中,超声提取10MIN,转移到分液漏斗中,加入10ML正己烷,振摇1MIN,静置分层,弃去正己烷层,加入10ML正己烷重复进行一次,取下层水相置于离心管中,4000R/MIN离心10MIN。取上清液过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。若高效液相色谱分离效果不理想,取20ML上清液,用10的甲酸1023调PH至5,定容到25ML,取5ML过已活化的固相萃取柱,用5ML水淋洗,2ML70的甲醇溶液1025洗脱,收集洗脱液2ML,涡旋混合,过045M有机滤膜,供高效液相色谱测定。122仪器参考条件1221色谱柱C18柱,5M,250MM46MM内径或相当者。1222流动相甲醇002MOL/L乙酸铵1090,体积比。1223流速10ML/MIN。1224柱温30。GB5009121201661225进样量10L。1226检测波长293NM。123定性分析依据保留时间一致性进行定性识别的方法,根据脱氢乙酸标准样品的保留时间,确定样品中脱氢乙酸的色谱峰参见附录B。必要时应采用其他方法进一步定性确证。124标准曲线的制作将脱氢乙酸标准工作液1042分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。125测定将测定溶液注入液相色谱仪中,测得相应峰面积,根据标准曲线得到测定溶液中的脱氢乙酸浓度。126空白试验除不加试样外,空白试验应与样品测定平行进行,并采用相同的分析步骤分析。13分析结果的表述试样中脱氢乙酸含量按式3计算XC1C0V1000FM100010003式中X试样中脱氢乙酸的含量,单位为克每千克G/KGC1试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升G/MLC0空白试样溶液中脱氢乙酸的质量浓度,单位为微克每毫升G/MLV试样溶液总体积,单位为毫升MLF过固相萃取柱换算系数F05M称取试样的质量