课题2　月季的花药培养

1、月季的花药培养,（一）被子植物的花粉发育,花粉是由 经过 而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。,花粉母细胞（小孢子母细胞）,减数分裂,1.来源：,2.形成过程,花粉母细胞 （小孢子母细胞）,减数分裂,4个小孢子,（小孢子四分体时期）,（单核期）,单核靠边期,单核居中期,彼此分离,有丝分裂,2个精子,有丝分裂,花粉管细胞核,生殖细胞核,生殖细胞,营养细胞,（双核期）,有丝分裂,在正常情况下，一个小孢子母细胞可以产生 个精子 。,8,4个小孢子,减分,有分,4个花粉管细胞核,4个生殖细胞核,有分,8个精子,1花粉母细胞,4个营养细胞,4个生殖细胞,两个精子和一个营养核的基因型 。,相同,二核花

2、粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成） 三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。,一个成熟的花粉粒，有两种情况：,花粉粒,移栽,（二）产生花粉植株的两种途径,这两种途径的区别主要取决于培养基中 的种类及其 的配比。,浓度,激素,在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构（胚芽、胚根、胚轴等结构完整），发育过程亦与合子胚类似，被称为胚状体。,花粉植株：,即单倍体植株,胚状体：,（体细胞胚）,（花粉胚）,三 影响花药培养的因素,花期早期；单核居中期与靠

3、边期之间,从花药来看，应当选择（初花期、盛花期、晚花期）的花药； 从花粉来看，应当选择（四分体期、单核期、双核期、萌发期）的花粉； 从花蕾来看，应当选择（完全未开放、略微开放、完全盛开）的花蕾。,思考为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,亲本植株的生理状况,答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。,（一）材料的选取,实 验 操 作,1、选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。,2、确定花粉发育时期最常用方法：,醋酸洋红法； 焙花青铬矾法,（蓝黑色）,二、材料的消毒：,月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？,在酒精消毒前，花药不需要预

4、先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗,实 验 操 作,（三）接种和培养,在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药,要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,1、剥离花药,勿损伤花药，否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织,注意：,2、接种,3、培养,培养条件：,愈伤组织 转移到分化培养基上,温度 光照,培养：,4、鉴定和筛选,染色体倍性的变化,胚状体 在花药开裂后尽快将幼小植株 分开，分别转移到新的培养基上,每瓶接种花药7-10个,为何花粉植株常出现染色体数目的变化？,花粉细胞的融合 接种花粉过程中混有小孢子母细胞 在材料的低温处理时抑制了纺锤体的形成 双核期时，

5、生殖细胞核和花粉管细胞核并没有形成两个细胞，而是两个核发生了融合,课题成果评价,选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。,）花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾， ）花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基，对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。,植物组织培养技术与花药培养技术的异同,相同之处是：,培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同,两者不同之处在于：,问题探究,被子植物的花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂过程中的四