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文档简介

1、高中新课标生物必修三知识点总结专题一 基因工程(基本原理:基因重组) 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品又叫做DNA重组技术。把外源基因转入生物体内,能有效的打破物种界限,定向的改造生物的遗传性状。1.1 DNA重组技术的基本工具 一、“分子手术刀” 1、名称:限制性核酸内切酶,又称限制酶。 2、来源:从原核生物中分离纯化的(真核生物也有)。3、特点:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列;并且有唯一切点(指每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键)。4、识别序列大多数限

2、制酶识别序列由6个核苷酸组成(ECORI、SmaI);也有少数酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。 5、片段末端:两种形式黏性末端和平末端。 二、“分子缝合针”1、名称:DNA连接酶 2、来源:从大肠杆菌中分离得到的,为E.coliDNA连接酶。 从T4噬菌体中分离得到的,为T4DNA连接酶。3、特点:恢复两核苷酸间的磷酸二酯键。4、区别:E.coli连接酶只连互补的黏性末端。T4DNA连接酶可连黏性末端又可连平末端。 三、“分子运输车”1、载体:质粒(在天然质粒的基础上经过人工改造的)、噬菌体的衍生物、动植物病毒。2、质粒:细菌细胞内独立于拟核DNA之外,裸露的、结构简单并具有自我复制能力

3、的双链环状DNA分子。 3、作为载体的条件: (1)能够在受体细胞内自我复制,或整合到染色体DNA上,随着染色体DNA进行同步复制,并在宿主细胞内稳定保存。 (2)有一个到多个限制酶切割位点,供外源DNA片段插入其中。 (3)具有特殊标记基因,供重组DNA的鉴定和选择(四环素抗性基因,氨芐青霉素抗性基因)。DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA 双链单链连接部位在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3 端的羟基上,形成磷酸二酯键四、DNA连接酶与DNA聚合酶1.2基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 1、方法: (1)从自然界中已有的物种中提取出来。(2)人工合

4、成的基因:基因较小,核苷酸序列已知,通过DNA合成仪或用化学方法直接人工合成。 (3)从基因文库中获取目的基因:基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段导入受体菌的群体中储存,各个受菌分别含有这种生物的不同的基因。部分基因文库(cDNA文库不含启动子):只包含了一种生物的一部分基因。操作:根据目的基因有关信息(核苷酸序列,基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性)来获取。特点:操作简便,但工作量大,具有一定的盲目性。(4)利用技术(聚合酶链式反应)扩增目的基因: 原理:双链复制的原理。 前提:要有一段已知目的基因的核苷酸序列,并根据这一序

5、列合成引物。过程:a目的基因的DNA受热变性后解链为单链。 b引物与单链相应互补序列结合,在DNA聚合酶(Taq酶)的作用下延伸。 c重复循环多次。优点:可以在短时间内大量扩增目的基因(成指数形式扩增)(5)PCR技术与DNA复制比较PCR技术DNA复制相同点原理DNA的复制原料四种游离的脱氧核苷酸(A,G,C,T)条件APT、模板、原料、酶不同点解旋方式高温变性解旋解旋酶解旋场所体外主要在细胞核内酶热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)细胞内含有的DNA聚合酶结果在短时间内形成大的DNA片段形成整个DNA分子 二、基因表达载体的构建 1、基因表达载体的构建是实施基因工程第二步,也是基因工程的核心。

6、 2、使目的基因在受休细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。 3、表达载体组成:复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需要的蛋白质。终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,使转录在需要的地方停止下来。标记基因:为了鉴别受体细胞中是否有目的基因,将含有目的基因的细胞筛选出来(如抗生素抗性基因)。 复制原点:开始复制的地方。三、将目的基因导入受体细胞1、转化:目的基因进入受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2、方法: (1)将目的基因导入植

7、物细胞:农杆菌转化法:a能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,而对大多数单子叶植物没有感染能力。 b转化:目的基因插入Ti质粒的T-DNA进入农杆菌导入植物细胞稳定维持和表达。 基因枪法(单子叶植物,成本高)。 花粉管通道法(普遍经济)。 (2)将目的基因导入动物细胞: 方法:显微注射技术 操作程序:目的基因表达载体提纯取卵(受精卵)显微注射胚胎早期发育新性状动物。 (3)将目的基因导入微生物细胞 原核生物特点:繁殖快;多为单细胞;遗传物质相对较少。方法:a用Ca2+处理细胞,使细胞变为感受态细胞(能吸收周围环境中DNA分子的生理状态)。b重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,

8、在一定温度下促进细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 1、检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因。方法:DNA分子杂交技术,将转基因生物用放射性同位素等作标记,以此作探针(基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的单链DNA分子),使探针与其基因组DNA杂交,如果显示出杂交带,就表明目的基因已插入染色体DNA中。 2、检测目的基因是否转录出了mRNA方法:mRNA分子杂交技术,从转基因生物中提取的是mRNA,同样用标记的目的基因作探针,与mRNA杂交,如果显示出杂交带,则表明目的基因转录出了相应的mRNA。 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质。(1)方法:从转基因生物中提取蛋

9、白质,用相应的抗体进行抗原-抗体杂交,若杂交带出现,表明目的基因已形成蛋白质产品。(2)不同生物间能够移植成功,说明:a.基因成分相同b.结构相似c.都遵循碱基互补配对原则d.限制酶切除的黏性末端相同能表达:因为共用一套遗传密码。五、基因表达 1、含义:经转录翻译出相应的酶并表达相应的性状(产生相应的蛋白质)。 转录 翻译 2、过程:目的基因mRNA蛋白质1.3基因工程的应用 一、抗虫转基因物质1、杀虫基因种类:Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因,淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。2、成果:抗虫动植物,如棉、玉米、马铃薯、番茄等。二、抗病毒基因动植物 1、植物的病原微生物:病毒、真菌、细菌等

10、2、抗病毒基因种类: (1)病毒外壳蛋白基因和病毒复制酶基因。(2)抗真菌基因:几丁质酶基因和抗毒素合成基因。 (3)成果:抗烟草花叶病毒的转基因烟草和抗病毒的转基因小麦、甜椒、番茄等。 三、抗逆转基因植物1、抗逆基因:a调节细胞渗透压的基因,使作物抗盐碱、抗干旱;b鱼的抗冻蛋白基因使作物耐寒;c抗除草剂基因,使作物抗除草剂。2、成果:烟草、大豆、番茄、玉米等。四、转基因改良植物1、优良基因:必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因、控制番茄果实成熟的基因和动植物花青素代谢有关的基因。2、成果:转基因玉米、转基因延熟番茄和转基因矮牵牛。 五、提高动物的生长速度1、生长基因:生长激素基因。2、成果:转基

11、因绵羊、转基因鲤鱼。 六、改善畜产品的品质1、优良基因:肠乳糖基因。2、成果:转基因牛分泌的乳汁,乳糖含量少。 七、转基因动物生产药物 1、基因来源:药用蛋白基因+乳腺蛋白基因的启动子。 2、成果:乳腺生物反应器(让乳腺把目的基因表达出来)。 八、转基因动物作器官移植的供体1、器官供体:抑制或除去抗原决定基因。 2、成果:利用克隆技术,培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。 九、基因工程药品1、来源:转基因工程菌。2、成果:重组人胰岛素、细胞因子、抗体、疫菌、激素等。 十、基因治疗1、概念:把正常基因导入病人体内,使该基因的表达产物发挥功能,从而达到治疗疾病的目的。2、成果:将腺苷脱氨酸基

12、因导入患者的淋巴细胞。1.4蛋白质工程的崛起 一、蛋白质工程 1、实质:将一种生物的基因转移到另一种生物体内,后者可以产生它本不能产生的蛋白质,进而表现出新性状。 2、目的:对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。 3、目标:根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行分子设计。 4、原理:基因改造 5、蛋白质工程的关键技术是基因工程,蛋白质工程的条件是了解蛋白质的结构和功能的关系6、生物界原不存在的蛋白质合成过程: 从预期的蛋白质功能出发设计预期的蛋白质的结构推测应有的氨基酸序列,找到相应的脱氧核苷酸序列人工合成基因转录mRNA翻译出具的特定氨基酸序列

13、的多肽链折叠蛋白质三维结构生物功能 7、蛋白质的改变: (1)小改:几个氨基酸 (2)中改:几段肽段 (3)大改:蛋白质全部 二、蛋白质工程的基本原理 1、蛋白质工程的原理应该是中心法则的逆推。(基因突变) 2、蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活需求。3、基因工程的蛋白质工程的比较 (1)蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。(2)基因工程中的目的基因一般为自然存在的基因,而蛋白质工程中的基因不是自然界存在的。基因工程蛋白质工程操作环境生物体外生物体外操作

14、核心操作基因基因操作起点目的基因预期的蛋白质功能基本过程剪切拼接导入表达确定蛋白质应有的高级结构应具备的折叠状态应有氨基酸序列应有碱基序列改造的蛋白质结果人类需要的基因产物人类需要的新基因,可以创造出自然界不存在的蛋白质专题二 细胞工程 应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过细胞水平或细胞水平上的操作改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术,动植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。21植物细胞211植物细胞工程的基本技术 一、细胞全能性1、概念:具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞,都具有发育成完整生物体的潜能,也就是说,每个生物细胞都具有全能性。 2、大小:植物细胞动物细胞

15、 受精卵生殖细胞体细胞 3、与细胞分化的关系: 一般:分化程度越高,全能性越低 特例:(分化程度)受精卵体细胞卵细胞体细胞4、体内细胞不能表达全能性的原因:基因是在特定的时空条件下选择性表达的结果。(或基因在体内会选择性表达。) 5、植物细胞表现其全能性的条件:(1)脱离母体(2)提供营养:无机物、有机物、矿物质、糖类、维生素。(3)激素(生长素、细胞分裂素和它们的比值)。(4)适宜的外界条件:全程无菌、光照、温度、pH。二、植物组织培养技术: 1、植物组织培养(1)概念:植物组织培养就是在无菌和人工控制条件,将离体动植物器官、组织、细胞,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产

16、生愈伤组织、丛芽,最终形成完整的植株。 (2)培养基:状态:固态,成分:无机营养有机营养激素琼脂。(3)理论基础:全能性2、在植物组织培养的前期(脱分化)对光照无需求,后期(再分化)需要光照条件,这有利于细胞的生长、分化。 三、植物体细胞杂交技术 1、涉及原理:细胞膜的流动性和细胞全能性原理。 2、植物体细胞杂交步骤:(1)去除细胞壁,分离出有活力的原生质体,去壁方法是酶解法,也就是在温和条件下用纤维素酶、果胶酶等分解植物细胞的细胞壁。(2)不同植物体细胞原生质体整合,必须通过物理方法和化学方法来诱导融合。物理方法有:离心、振动、电刺激等促使原生质体整合。化学方法:用聚乙二醇(PEG)等试剂作

17、为诱导剂来诱导融合。融合后再生细胞壁(诱导融合的杂交细胞含有的是双亲a倍体和b倍体的全部基因,为a+b倍体)。 3、杂交完成的标志:产生新的细胞壁。 4、意义:克服远缘杂交不亲和的障碍。2.1.2植物细胞工程的实际应用 一、微型繁殖:植物组织培养技术可以保持优良品种的遗传特性,还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。 二、作物脱毒:植物分生区附近(如茎尖)的病毒极少,甚至无病毒,切取一定大小的茎尖进行组织培养,再生的植株就有可能不带病毒,从而获得脱毒苗。(无性繁殖的生物(土豆等),感染病毒后很容易传给后代。) 三、人工种子1、特点: (1)后代无性状分离 (2)不受气候、季节和地域限制 2、技术:

18、植物组织培养 3、胚状体的来源:愈伤组织;由脱分化的外植体直接产生;由悬浮细胞培养产生。4、优点:(1)解决了一些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。(2)种子可以工业化产生,提高农业自动化程度。(3)人工胚乳中还可以添加各种附加成分,有利于幼苗茁壮成长,提高作物产量。(可含有营养(水、无机盐、有机物)和其他(农药、抗生素、有益菌)。) (4)胚状体:已分化出胚芽,胚轴和胚根等结构,所以能萌发长成幼苗。 (5)人工种皮的条件:可降解。透气。 四、单倍体育种 1、方法;花药的离体培养 2、优点::后代稳定遗传,都是纯合子;:明显缩短育种年限五、突变体的利用 1、产生:植物组织培养。 2

19、、利用:筛选出对人们有用的突变体,进而培育成新品种。 六、细胞产物的工厂化生产 1、种类:蛋白质、脂肪、糖类、药物(紫草素等,多培养到愈伤组织后直接拿来用)、香料、生物碱等。 2、技术:植物组织培养。七、几种育种方法的比较如下表所技术原理优点缺点诱变育种基因突变提高生物变异的频率,使后代变异频率较稳定;可大幅度改良某些性状,缩短育种进程盲目性大,需大量处理供试材料杂交育种基因重组使位于不同个体的优良性状集中于一个个体周期长,验证以克服远缘杂交的障碍单倍体育种染色体变异获得个体均为纯种,明显缩短育种年限技术复杂,须与杂交育种配合多倍体育种染色体变异器官大,提高产量的营养成分适用于植物、动物方面难

20、以开展基因工程育种分子遗传学原理打破特种界限,定向地改造生物遗传性状可能造成新的生态危机细胞工程育种细胞生物学和分子生物学原理克服远缘杂交不亲和的障碍,扩大了用于杂交的亲本组织范围;定向改变生物遗传性状不能按人们的需要表现出亲代的优良性状22动物细胞工程221动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养(原理:细胞增殖)1、概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 2、动物细胞培养的过程: (1)从健康动物体内取出组织块,剪碎,用胰蛋白酶或胶蛋白酶处理一段时间,使组织分散成单个细胞(多取自胚胎或幼龄动物的器官、组织)。

21、 (2)用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液,细胞悬液放入培养瓶内,置于适宜环境中培养。 (3)贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖。(分解的是细胞间质) 3、 (1)接触抑制:细胞进行有丝分裂,数量不断增多,当瓶壁细胞分裂生长到表面相互接触时,不再分裂(而癌细胞不会接触抑制,故能无限增值)。 (2)原代培养:第一次取出的细胞直接培养。 (3)传代培养:接触抑制后再用酶处理,重新制成悬液。 (4)细胞株:原代培养后,遗传物质不变。(10-50代) (5)细胞系:传代培养后遗传物质改变,朝着等同于癌细胞(黏着性差、糖蛋白少)的方向发展,可以无限增殖(细胞核物质

22、改变而影响糖蛋白)。 4、动物细胞培养的条件: (1)无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理。在细胞培养液中添加一定量的抗生素。定期更换培养液。 (2)营养:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 (3)温度和pH::36.50.5 :pH为7.27.4(4)气体环境::O2和CO2 :O2是细胞代谢必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。 5、动物细胞培养技术的应用(1)生产病毒疫苗、干扰素,单克隆抗体等。 (2)判断某种物质的毒性。 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、概念:(1)克隆就是无性繁殖,具体地说,是指一个共同的祖先,

23、通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。(2)动物核移植是将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。 2、条件: (1)具有包含物种完整基因核的活细胞(如乳腺上皮细胞)。 (2)能有效调控细胞发育的细胞物质(如去核卵细胞的细胞质)。 (3)完成胚胎发育的必要的环境条件(子宫)。 3、技术基础 (1)植物克隆的技术基础是植物组织培养。 (2)动物克隆的技术基础是动物细胞培养。 4、动物体细胞核移植技术 (1)原理:细胞核的全能性、细胞膜的流动性。(2)动物细胞全能性的特点:动物细胞的全能性随

24、着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到到抑制,但动物的细胞核仍具有全能性。 (3)细胞核全能性表达的条件:必须提供促进细胞表达全能性的物质和营养条件,去核的卵母细胞是最合适的细胞,因为卵母细胞体积大,易操作;含有丰富的营养物质,能为胚胎早期发育提供养料,并能使细胞核基因得到表达。 (4)核移植种类胚胎胞核移植:较易成功。体细胞核移植:较难成功。三、有性生殖与无性生殖 分裂生殖(单细胞生物)自然条件 出芽生殖(芽体、酵母菌、水蛭)无性 孢子生殖(大型真菌)生殖 营养生殖(嫁接、扦插) 克隆人工条件 组织培养 植物体细胞杂交 花药离体培养有性 孤雌生殖生殖 (蜜蜂、蜂类由未受精的卵细胞直接法医) 卵式

25、生殖2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 1、概念:动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。 2、方法:聚乙二醇(PEG)电激灭活(灭活是为了使病毒的感染性、增殖能力丧失而保留病毒的融合活性)的病毒(仙台病毒)。 3、原理:细胞膜的流动性。 4、起点:2个不同DNA的细胞 5、意义:(1)突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。 (2)为制造单克隆抗体开辟了新途径。 二、单克隆抗体1、(1)过程:灭活病毒 融合给小鼠注射特 从脾脏中分 未融合细胞 定的抗原蛋白 离B淋巴细胞 融合的同种细胞培养基骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 融合

26、的杂种细胞克隆检测选择培养基 小鼠体内培养 杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 单克隆抗体 体外培养 (2)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一抗体。(3)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,产量大。2、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂 (2)用于预防和治疗疾病和运载药物:“生物导弹”。专题三 胚胎工程 胚胎工程:是指对动物早期胚胎或配子所在地进行的多种显微操作和处理技术,如体外受精,胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养费等技术。3.1体内受精和早期胚胎发育 一、精子和卵子的发生 1、精子的发生 (1)发生场所:睾丸的曲细精管(2)时期:从初情期(相当于人的青春期)开始,直到生殖机能衰退。 (3

27、)过程:第一阶段:位于曲细精管管壁的精原细胞进行数次有丝分裂,产生大量的精原细胞。其中部分精原细胞经过染色体复制和其他物质的合成,进一步形成初级精母细胞。第二阶段:初级精母细胞连续进行两次分裂产生四个含单倍染色体的精子细胞。第三阶段:圆形的精子细胞经过变形,其中的细胞核变为精子头的主要部分; 高尔基体发育为头部的顶体; 中心体演变为精子的尾; 线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘(为了进行有氧呼吸) 细胞内的其他物质浓缩为球状的原生质滴,随精子的成熟过程向后移动,直到最后脱落。(4)形态:外形似蝌蚪,分头、颈和尾三大部分。不同种动物精子的形态相似,大小略有不同,与动物的体型大小无关。2、卵子的发生

28、(1)场所;卵巢、输卵管。(2)时间:始于性别分化后(胚胎时期)(3)过程:雌性胎儿卵巢内卵原细胞,通过有丝分裂的方式不断增加其数量,并进一步演变为初级卵母细胞,被卵丘细胞包围,形成卵泡。减数第一次分裂是在雌性动物排卵前后完成的,其结果产生一个次级卵母细胞和第一极体,进入输卵管,准备与精子受精。减数第二次分裂是在精子和卵子结合的过程中完成的,产生一个成熟的卵子和第二极体。 二、受精 1、概念:受精是精子与卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。 2、场所:输卵管 3、准备阶段:(1)精子获能:刚刚排出的精子因有抑能因子不能立即与卵子受精,必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化(获能因子)后才能获得

29、受精能力。(2)卵子的准备(减分裂过程):动物排出的卵子成熟程度不同,有的可能是初级卵母细胞(马、犬),有的可能是次级卵母细胞(多以次级为主),当达到减数第二次分裂的中期时,才具备与精子受精的能力。4、受精阶段(顶体反应 穿越透明带 释放第二极体 雌、雄原核融合 第一次卵裂开始) (1) 顶体反应:获能后的精子与卵子相遇时首先发生顶体反应,使体内的顶体酶(水解酶)释放出来直接溶解卵丘细胞之间的物质,形成精子穿越放射冠的道路。(2)透明带反应:穿过放射冠的精子立即与透明带接触,顶体酶随后将透明带溶出一条孔道,精子借自身运动穿越透明带,并接触卵黄膜。(这时的透明带不会让其它的精子进入。)(3)卵黄

30、膜封闭作用:精子外膜和卵黄膜相互融合,精子入卵。精子入卵后,卵黄膜会立即发生一种生理反应,拒绝其他精子再进入卵内(同(2)都是防止多精入卵的两道屏障)。 (4)精子入卵后,尾部脱离,并且原有的核膜破裂,随后,形成一个新的核膜,最后形成一个比原来精子核还大的核,叫做雄原核。卵子完成减数第二次分裂,排出第二极体后,形成雌原核,雌原核一般小于雄原核。(5)雄、雌原核充分发育后,相向移动,彼此接触,二者体积缩小、合并,两组核染色体合为一组,形成一个含二倍染色体的合子,也就是受精卵。 5、受精完成标志:卵黄膜和透明带的间隙可能观察到两个极体。 三、胚胎发育:1、受精卵卵裂桑椹胚囊胚原肠胚幼体(个体发育的

31、起点是受精卵的分裂,终点是性成熟的个体。)2、(1)卵裂 分裂方式为有丝分裂; 总体积不断增加或略有减少; 每个细胞体积会不断减小; 有机物的总量逐步减少(因为细胞不断分裂要消耗的大量能量是通过细胞氧化分解有机物提供的,在此过程中,胚胎不能从外界摄入有机物)(2)桑椹胚:桑椹胚的细胞数在32个左右,细胞排列致密,形似桑椹,由具有全能性的细胞构成。(3)囊胚:细胞出现分化内细胞团和滋养层,内细胞团将来发育成胎儿的各种组织,滋养层将来发育成胎膜和胎盘;出现囊胚腔,是胚胎内部一个含有液体的囊腔;发生孵化,即囊胚进一步扩大,导致透明带破裂,胚胎从中伸展出来。(4)原肠胚:一孔:胚孔(用来气体交换)二腔

32、:扩大的原肠腔,缩小的囊胚腔 外胚层:(动物半球,外包下移):由内细胞形成(发育成表皮、感觉、神经)。 三胚层 中胚层:由内细胞团的部分表层细胞和部分下方细胞形成(其它)。 内胚层(植物半球内陷):内细胞团下方的细胞形成(发育成消、呼、肝、胰)。32体外受精和早期胚胎培养 一、试管动物技术通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精,并通过培养发育为早期胚胎后,再经移植产生后代的技术。这项技术的前期工作包括体外受精和早期胚胎。 二、体外受精1、卵母细胞的采集和培养 (1)方法: 对于实验动物如小鼠、兔,以及家畜猪、羊等,用促性腺激素处理,使其排出更多的卵子。从输卵管中冲取卵子,直接与获能的精

33、子在体外受精。(激素要注射,不能口服,否则被消化道的酶分解) 对大家畜或大型动物,如牛,从屠宰场宰母畜的卵巢中采集卵母细胞,或借助超声波探测仪,内窥镜或用腹腔镜等工具,直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞(采集的卵母细胞,都要在体外经人工培养成熟后,才能与获能的精子受精)。 2、精子的采集和获能 (1)收集精子的方法 假阴道法:大家畜或大型动物。 手握法:体形较小,易于控制的家畜。 电刺激法:野生动物或经济动物。 (2)精子体外获能的方法: 培养法: 对象:啮齿动物、家兔及猪等动物的精子。 方法:将精子放入人工配制的获能液中使其获能。 化学诱导法 对象:牛、羊等家畜的精子。 方法:将精子放在一定

34、浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中,用化学药物诱导精子获能。 3、受精:获能的精子和培养成熟的卵子,一般情况下都可以在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程 4、克隆动物与试管动物的比较克隆动物试管动物生殖方式无性生殖有性生殖技术手段核移植、动物细胞培养、胚胎培养、胚胎移植体外受精、胚胎移植子代特点细胞核来自供体细胞质来自受体细胞核来自父母方细胞质来自母方所属工程细胞工程胚胎工程三、胚胎的早期培养1、哺乳动物胚胎的培养液成分:无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸,核苷酸等营养成分,以及血清等物质。 2、胚胎早期培养的目的: (1)检测受精状况和受精卵的发育能力。 (2)使胚胎发育到适宜的

35、阶段进行受体移植或冷冻保存。 3、胚胎移植时间 (1)牛、羊一般在桑椹胚阶段或囊胚阶段进行移植。 (2)人的体外受精胚胎,即试管胚胎,可在8-16个细胞阶段移植。3.3胚胎工程的应用及前景 一、胚胎移植:1、胚胎移植的概念;将雌性动物的体内早期胚胎或者通过体外受精及其他方式得到胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。2、胚胎移植的条件及意义:(1)胚胎移植成功的条件: 同期发情处理提供相同生理环境。 早期胚胎与子宫建立联系利于胚胎收集。(冲卵) 早期胚胎与母体无免疫(排斥)反应利于存活。 胚胎可与受体子宫建立联系不影响胚胎的遗传特性。 (2)胚胎移植的

36、意义 加速育种工作和品种改良。 大量节省购买种畜的费用。 一胎多产。 保存品种资源和濒危物种。 可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。3、胚胎移植的基本程序(1)主要包括对供、受体的选择和处理,配种或进行人工受精对胚胎的收集、检查、培养或保存,对胚胎进行移植以及移植后的检查等。(2)过程:对供、受体母牛进行选择,应用激素进行同期发情处理。用激素对供体母牛做超数排卵处理。超数排卵的母牛发情后,选择同一种优秀的公牛进行配种或人工受精。胚胎的收集:配种或输精后第七天,用特制的冲卵装置把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)(哺乳动物早期胚胎在一定时间内不与母体子宫建立组织上的联系。)冲卵后,对胚胎进行

37、质量检测,这时的胚胎应发育到桑椹胚或囊胚阶段。将收集的胚胎直接向受体移植或放入-196的液氮中保存。胚胎的移植:(1)手术法:引出受体子宫和卵巢,将胚胎注入子宫角,缝合创口。(2)非手术法:将装有胚胎的移植管送入受体母牛子宫的相应部位,注入胚胎。对受体母牛进行是否妊娠的检查。受体母牛生产下胚胎移植的犊牛。二、胚胎的分割 1、概念胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术(胚胎分割可以看作动物无性生殖或克隆的方法之一)。 2、意义:提高了的胚胎的利用率。 3、操作: (1)仪器:主要仪器设备为实体显微镜和显微操作仪。 (2)材料:应选择发育良

38、好、形态正常桑椹胚或囊胚。(3)过程:用分割针或者分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的空透明带中,或直接将裸半胚胎移植给受体,要注意将内细胞团均等分割(若分割时不能将内细胞团均等分割,会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强,少的部分发育受阻或发育不良,甚至不能发育等问题)。 三、胚胎干细胞 1、ES细胞的特点 (1)形态上:体积小、细胞核大、核仁明显。(2)功能上:具有发育的全能性,即可以分化为成年动物内任何一种组织细胞。(3)胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,具有胚胎细胞的特性。功能上,具有发育的全能性,在体外培养的条件下可以增殖而不发生分化。 2、

39、ES细胞的主要用途:(1)利用ES细胞可通过诱导分化形成新的组织细胞的特性,用于治疗人类的组织损伤和某些顽症。(2)还可以通过ES细胞体外诱导分化,定向培育出人造组织器官,用于器官移植,解决供体器官不足和器官移植后发生免疫排斥问题。(3)ES细胞还可以用于对哺乳动物个体发生和发育规律的研究,也是研究体外细胞分化的理想材料。专题四 生物技术的安全性和伦理问题4.1转基因生物的安全性 一、转基因生物成果1、什么是转基因生物?转基因生物就是利用重组技术,将外源基因(目的基因)导入受体生物体内,并表达受体生物原本没有的性状,这种受体生物就叫转基因生物。2、转基因生物的优缺点(1)优点:解决粮食短缺问题

40、;减少农药使用从而减少环境污染;节省生产成本,降低粮食售价;增加食物营养,提高贮藏价值;增加食物种类,提升食品品质;促进生产效率,带动相关产业的发展。(2)缺点:可能产生新病毒和新的过敏源;可能产生抗除草剂的杂草;可能使疾病的传播跨越特种障碍;可能会损害农作物的生物多样性;可能干扰生态系统的稳定性。二、对转基因生物安全性的争论1、转基因生物与食物安全(1)两种难点的比较观点存在安全问题不存在安全问题论据对食物安全检测不全面可能出现滞后效应可能出现新的过敏源营养成分可能改变“实质性等同”只是评价的起点,而不是终点多环节、严谨的安全性评价科学家对社会负责的态度至今未发现转基因食品影响人体健康的实例

41、(2)实质性等同原则:“实质性等同”是指在转基因家作物中只要某些重要成分没有发生改变,就可以认为与天然品种“没有差别”,内容包括生理性状、分子特征、营养成分、毒素含量和过敏源等是否具有等同性。(3)保证转基因食品安全性的监控和预防措施立法是监控农业转基因生物安全性的有力措施。多环节监控:转基因农作物研究、从实验室走向大田试验及产品商品化都有相应法规或进行严格监控,只有每一阶段实验获得认可证书后,才可进行下一阶段。安全评价内容具体而严格。2、转基因生物与生物安全(1)两种难点的比较难点引起生物安全问题不引起生物安全问题论据可能变成野生种类或杂草可能重组出新有害病原体有可能形成用除草剂除不去的“超

42、级杂草”可能成为“入侵的外来物种”进入非种植区生命力很差存在生殖隔离,难与其他植物杂交花粉的传播距离和存活时间有限新性状的表现必须有一定水、肥等条件和配套的种植技术(2)外来物种入侵及危害外来物种入侵:是指有意义或无意的人类活动将某物种从一个地区引入其他地区,给当地的生态系统、社会经济造成明显的损害。危害A.外来物种进入新的生态系统之后,由于没有天敌,极易造成生长失控,破坏生态系统的结构。b.入侵的外来物种可能会造成本地生物多样性减少。c外来物种进入新的生态系统后,作为掠夺者、寄生者或病原体,会使受害者和寄主的数量发生变化。d.有些外来植物产生的花粉,是当地居民从未接触过的物质,从而可能成为对

43、人类健康造成威胁的新过敏源。4.2关注生物技术的伦理问题一、克隆技术引发的伦理问题观点理由不赞成克隆人严重违反了人类伦理道德克隆人冲击了现有婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念克隆人是在人为地制造在心理上和社会地位上都不健全的人克隆技术尚不成熟赞成技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法得到解决克隆人是一项科学研究,既然是科学,就应该允许科学家研究克隆人。中国政府禁止生殖性克隆人。一再重申的四不原则是不赞成、不允许、不支持、不接受。但是中国不反对治疗性在克隆。二、试管婴儿引发的伦理问题观点理由不符合伦理道德把试管婴儿当作人体零配件工厂,是对生命的不尊重早期的生命也有活下去的权

44、利,抛弃或杀死多余胚胎,无异于谋杀有人会滥用设计试管婴儿技术,设计婴儿性别等符合伦理道德设计试管婴儿是为了救人,是救治患者的最好、最快捷的方法之一提取骨髓中造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤脐带血是试管婴儿的“身外之物”政府观点中国卫生部在体外受精一胚胎移植及其衍生技术规范中规定“实施体外受精一胚胎移植及其衍生技术必须获得卫生部的批准证书”三、基因检测引发的伦理问题1、基因检测的优点通过基因检测可以及早采取预防措施,适时进行治疗,达到挽救患者生命的目的。2、基因检测引发的问题及解决方法(1)问题:目前人类对基因结构及基因间相互作用尚缺乏足够的认识,要想通过基因检测达到预防疾病的目的是困难的。基

45、因检测本身会给受检者带来巨大的心理压力。个人的基因资讯的泄露会造成基因歧视。(2)解决方法:对于基因歧视现象,可以通过正确的科学知识传播,伦理道德教育和立法得以解决。4.3禁止生物武器一、生物武器的特点、局限性及对人体伤害的作用1、生物武器的特点(1)传染性强。(2)污染面广。直接喷洒的生物气溶液胶,可随风飘到较远的地区,杀伤范围可达数百至数千平方千米。在适当条件下,生物战剂潜伏时间较长,不易被发现,(3)难以防治。(4)具有一定的潜伏期,(5)受自然条件影响大。2、生物武器的局限性(1)生物武器主要指病原微生物,所以它们的生存繁殖、死亡易受环境条件的影响。温度:适宜温度37左右a过高:40-

46、50,细胞停止繁殖;50-70死亡,但芽孢必须在100以上的温度长期保持下才会死亡;b过低:一般会停止繁殖、生长、但不会死亡。湿度:大多数在干燥的空气中容易死亡,如霍乱孤菌;少数在干燥环境中仍能存活,如结核杆菌。(2)还受地形、风向等多种条件影响。(3)生物武器的使用不易控制,使用不当可危害本方安全说明:对待生物武器的态度应明确而坚定,即坚决禁止生物武器,有些国家用基因技术制造人类从没接触过的生命武器可能会给人类带来更大威胁,所以应该防止转基因技术的滥用。3、生物武器的作用途径(1)吸入:生物战剂污染空气,可以通过呼吸道吸入,感染致病。(2)误食:食用被生物战剂污染的水、食物而得病(如霍乱、痢疾等疾病)。(3) 皮肤接触:生物战剂如炭疽杆菌等,或带菌物品上的病毒可直接或间接经皮肤、黏膜、伤口进入人体。(4)昆虫叮咬:人被带有生物战剂的昆虫叮咬后,会使血液感染而致病。三、禁止生物武器公约及中国政府的态度1、在全世界爱好和平的人民努力下,1972年4月10日,苏联、美国、英国分别在其首都签署了禁止试制、生产和储存并销毁细菌(生物)和毒剂武器公约(简称:禁止生物武器公约。2、1984年11月15日,中国政府加入了禁止生物公约。3、1998年6月27日,中美两国元首在关于禁止生物武器公约议定书的联合声明中,重申了在任何情况下不发展、不生产

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