实验二微生物的分离纯化演示课件

1、1,工业微生物与育种学实验,Part 实验基本操作技能 实验二 微生物的分离纯化,2,分离 纯化 形态观察,内容提要,3,半固体培养基：穿刺接种 液体培养基接种 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种 浅盘固体接种,（1）接种,4,无菌操作：,在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行,5,6,划线分离,7,9,划线接种注意要点,划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后接种环应灭菌.,10,稀释分离涂

2、布平板,11,稀释分离倾注平板,13,厌氧微生物的分离,厌氧罐,厌氧手套箱,厌氧罐,厌氧手套箱,15,细菌的分离,1、一般采用NA培养基，加入抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50gm1， 以抑制真菌的生长。 2、琼脂平板在使用前应置于37培养箱中孵育l、2天。 3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。,16,放线菌分离培养需考虑的生态参数： 温度、pH、离子强度、氧化还原电势和底物浓度。 一般采用高氏1号培养基，大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌

3、落。 选择性地添加抗生素，通常加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。,放线菌的分离,17,真菌分离,利用低碳氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。 一般采用PDA培养基 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。,18,（2）纯化,将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上,19,颜色反应：分离特定的菌株；,牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；,待分离的微生物的生长特征明显不同,20,21,22,液体培养基分离纯培养,稀释法进行液体分离必须在同一个稀

4、释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。,单细胞（孢子）分离,一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比；,23,（3）形态观察,24,菌落（colony）：,单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体,众多菌落连成一片,菌苔（lawn）,25,不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般 都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微 生物进行分类、鉴定的重要依据。,26,同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落,27,28,（4）菌种保藏,最常

5、见的保藏方法：斜面 细菌的保藏：甘油保藏 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏,29,菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上,菌种保藏的方法,30,方法：低温保藏法方法：菌种管置4冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。干燥保藏法将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。,31,真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 液氮超低温保藏法 将菌种置于