阿司匹林磁性壳聚糖微球的制备及其性能

1、阿司匹林磁性壳聚糖微球的制备及其性能摘要:目的：以阿司匹林为药物模型,制备阿司匹林磁性壳聚糖微球(AMCM),研究其体外释放度与体内靶向性。方法：利用壳聚糖为骨架材料,以Fe3O4作为磁性内核,戊二醛作为交联剂,固载阿司匹林,研制AMCM,采用动态透析法及分光光度法进行体外释药实验;设定纯种兔为一靶区,外加磁场,经兔耳缘静脉注射AMCM,观察AMCM在体内分布情况,并观察外加磁场强度对微球在靶区定位的影响。结果：制华备的AMCM成球性能好,无粘连,粒径栈18m,载药率(W/W),包封率%,具有显著的缓释阿司匹林作用,经外夯加磁场下的AMCM有较好的靶向分布性整且与磁场强度相平行。结论：自制的夏

2、AMCM具有显著的体外缓释与体内靶向侈作用。关键词:阿司匹林;壳聚糖;柿胶囊;迟效制剂;微球体壳聚糖来源栳广泛,性质稳定,生物相容性和可降解性碳好,毒性极小,应用范围广泛,在药剂学锛领域中应用极为活跃。它在缓释制剂中作苯为微囊、微球的囊材或载体与作为缓释片冫、缓释膜的骨架材料,已有较多的报道启13。关于壳聚糖与铁磁性物质共同包褪埋或分散于药物中构成靶向体系,亦有报麒道4。阿司匹林具有良好的解热、镇舒痛、抗炎、抗风湿、抗血小板凝集等作用,临床上广泛用于治疗血栓栓塞性疾病5,但是它有许多不良反应,如胃肠道反应、凝血障碍、变态反应、水杨酸反应峄等。笔者制备阿司匹林磁性壳聚糖微球(蛔aspirinma

3、gneticall刎ychitosanmicrosphe胨res,AMCM),探讨阿司匹林的体外缓释作用及体内的靶向性,以期为阿司砬匹林提供新型的具缓释性与靶向性的药物睬载体。1材料与方法材料试剂阿司匹林原料药(桂林制药厂),阿司匹林对照品(中国药品生物制品检定琬所),壳聚糖(自制,脱乙酰度为%),衲Fe3O4(AR,上海大场场南化工厂死),25%戊二醛水溶液(生化试剂BR妒,中国医药集团上海化学试剂公司),凝图结液(含氢氧化钠质量分数10%,乙醇质量分数2%),氢氧化钠、冰乙酸、无荇水乙醇、磷酸盐缓冲液()等均为分析纯共产品。酚酞指示剂(上海化学试剂公司分裎装厂),SnCl2?H2O(美国S

4、igma公司)。动物健康大耳纯民种白兔(福清卫生学校实验动物中心)。仪器电热恒温干燥箱(SC202徕型,浙江省嘉兴县新塍电热仪器厂),离木心机(800B,上海安亭科学仪器厂)缇,电动搅拌器(JJ1型,常州国华电器凶有限公司),电热恒温水浴锅(HHS,尹上海医疗器械五厂),紫外分光光度计(况751G,上海分析仪器厂)。永磁铁(批6,中南工业大学粉末冶金研究所)吩。发射式计算机处理断层摄影(ECT,德国Simons公司)。方法颂制备AMCM参照文献6。壳聚糖溶解于1%醋酸溶液100mL,连续搅拌祖至完全溶解,得壳聚糖溶液。精密称取F腓e3O4微粉,缓慢加入到200r/m纽in的壳聚糖溶液100mL

5、中,连续搅笥拌5h,混合吸附均匀。取凝结液350踟mL,用40mL注射器吸取含Fe3O挺4微粉的壳聚糖溶液混匀物,在持续搅拌鸦下缓慢滴入凝结液,继续搅拌30min。静置36h后减压抽滤,用无水乙醇洗菡涤至中性,置恒温干燥箱40烘干,称臀取。称取上述制备的磁性壳聚糖微球用1纷%醋酸溶液200mL搅拌溶解,形成A液。取阿司匹林用无水乙醇50mL搅拌治溶解,形成B液。将B液缓慢匀速滴入A岢液中,剧烈搅拌10min,形成C液。在C液中滴加25%戊二醛水溶液25m桁L,交联固化12h后,用离心2000绞r/min3min,将沉淀物重新洗腰涤3次,40烘干12h,得。60C矣o灭菌,且将离心液和洗涤液收集

6、合并,氲得“合并液”。测定载药率和包封率时用/LNaOH溶液滴定“合并液”的阿腽司匹林残余量,酚酞为指示剂,NaOH铵1mL相当于阿司匹林。按下列公式计算滩阿司匹林磁性壳聚糖微球的载药率和包封觅率:载药率=(投药量合并液中药量)/微球重量100%包封率=(踩投药量合并液中药量)/投药量100鲵%测定AMCM体外释药建立阿司匹林标准液标准曲线精密称取阿司匹林躬,溶于无水乙醇,并定容于100mL容量瓶,振荡摇匀后分别精确移取0,1,纥2,3,4,5mL分置于50mL容量悔瓶,加蒸馏水稀释至刻度,测定光密度休D(280nm),以D为纵坐标,以浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,得矛回归方程:A=+(C

7、,g/mL)r=测定AMCM体外缓释采用动廊态透析法测定,精密称取置于透析袋内,加入的磷酸盐缓冲溶液500mL,置于匦(37)恒温水浴,连续搅拌24h灵,转速为100r/min,每隔4h取枭样液10mL,每次取样液后即用磷酸盐缓冲溶液补充。分别将取出的悬浮液在2胥000r/min离心3min,移取上层清液1mL定容稀释至50mL,测定孺D(280nm),通过回归方程计算各哓时间段阿司匹林浓度。的99mTc标记称取AMCM100mg,依次加入倨108Bq(20mCi)99mTc寝O4新鲜淋洗液2mL和SnCl2溶液(30g/mL)100L(作为还原剂),室温下振动10min。离心去揭上清液,用生

8、理盐水洗涤游离的99mT疬cO4,离心,去除上清液,如此重复3次,测定同位素标记率。每隔1h以生理筒盐水洗涤AMCM,去上清液后测定99萨mTc含量,观察99mTc标记物衰减情况。在兔体内分布实验(1)磁场朕组与未加磁场组。取兔12只,分2组,戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉,磁站场组以AMCM100mg溶于生理盐水僵2mL,兔耳缘静脉缓慢注射,并在兔头部加磁场()30min,未加磁场组注茵射同样药物,但不加磁场。ECT全身摄叩像并计99mTc标记放射性活度在体内分布情况。(2)不同磁通量组。取兔1悍2只,分2组,戊巴比妥钠30mg/kg静脉麻醉,AMCM100mg溶于生缁理盐水2mL,兔耳缘

9、静脉缓慢注射,在魑兔头部加磁场,磁通量密度分别为和12缀5T,30min后以ECT摄像并计数浴,观察体内各器官放射性活度分布情况。襻2结果的外形特征取上述AMC嶷M10mg混悬于生理盐水1mL中,于光镜及扫描电镜下观察形态结构,测量1牯个视野中微球直径范围。AMCM呈球形贲,表面光滑,大小均匀,在生理盐水中分蹩散性好,粒径18m。的载药率命与包封率记录消耗碱液的体积为。经公式某计算,AMCM载药率/g,包封率%。体外释药测定体外释放见表1。表1阿司匹林磁性壳聚糖微球体外释放吸(略)Tab1AMCMrelea萼singdrugrateinvitr拔ot/hC/的释放行为AMCM在牧起始4h内释药

10、量%,8h内%,24h训内总释药量%,本研究制得的磁性微球具帐有较好的缓释性(图1)。图1阿司匹林磁性壳聚糖微球的释药率与时间的关系(略)Fig1Therelea距singdrugpercenttimecurveofAMCM在兔体内分布99mTc标记率为40%,半衰期材6h。各组注射药物后生命征平稳,无异渎常反应。未加磁场时放射性活度主要聚集残在肝脏,加磁场后头部(靶部位)的放射冲性活度分布是未加磁场的11倍(图2)悚。头部外加磁场组30min后,放射性活度分布是外加磁场的倍,显示外加磁通悉量密度越大,靶部位的放射性活度越高(阪图3)。3讨论具有体外缓释性税AMCM的释药行为在8h内是因为起始

11、驻微球表面吸附的药物溶解及扩散则形成释穰药的突释效应,而在8h后由于已进入微球的药物在溶剂作用下溶解,须经壳聚糖凌包裹材料的空隙再扩散到介质中,使药物均匀缓慢地释放。124h能缓慢释放湎,释药模式拟合符合Higuichi方程,说明笔者制作的AMCM具有体外缓诉释性能。有关此微球的体内药代动力学有煮待进一步研究,以证明其体内的缓释性。图2磁场对放射性活度在体内分布的窕影响(略)Fig2Thedist缫ributioninfluenceo滇fradiatingactivati贽onbyusingmagnetorn拗onmagnetinvivo图3揭磁通量对放射性活度在体内分布的影响(疬略)Fig3

12、Thedistrib篝utioninfluenceofradiatingactivationb亵yusingdifferentmag蚯neticdensityinvivo苄具有体内靶向性经外加磁场作用下的庹AMCM有较好的靶向分布性,且与外加援磁场作用的磁通量密度正相关,提示在不唏导致动物或人体生理功能紊乱的前提下,帮为达到满意的作用效果,可适当加大磁通嫱量密度。笔者选择兔头部作为磁控给药的猾靶向,因为兔头部血循环丰富,可模拟脑熊血栓靶向给药后磁性微球在病灶内及机体其他部位的分布情况。实验表明加磁场时内,微球主要集中在靶部位(头部),而不加磁场时微球主要集中在肝脏,证明99瘤mTc与AMCM紧密结合,外加磁场能忍改变其体内分布。同时也说明AMCM具有被动靶向于肝脏。这可能由于RES系